【摘要】：集約化高密度的海參養(yǎng)殖方式導(dǎo)致養(yǎng)殖水體污染日益嚴(yán)重。微生態(tài)制劑因其實(shí)用性強(qiáng)、成本低、收益大、操作簡(jiǎn)易、不易形成二次污染等諸多優(yōu)勢(shì)在養(yǎng)殖業(yè)廣泛應(yīng)用,但也存在菌劑的專一性不強(qiáng)、不適宜海洋環(huán)境、活菌數(shù)降低、菌株配伍不適等問(wèn)題。鑒于此現(xiàn)狀,本研究篩選了適應(yīng)海洋環(huán)境的益生菌,對(duì)其生長(zhǎng)特點(diǎn)、對(duì)以弧菌為主的病原菌群的抑制作用及其對(duì)養(yǎng)殖水體的凈化能力進(jìn)行研究。根據(jù)各單菌特點(diǎn),構(gòu)建復(fù)合菌群,開(kāi)發(fā)新型微生態(tài)制劑,減少海參腐皮病的發(fā)生,解決海參養(yǎng)殖過(guò)程中的水體污染問(wèn)題。首先,從A、B、C三組液態(tài)樣品及海參養(yǎng)殖池塘底泥樣品中篩選出的8株益生菌,經(jīng)生理生化實(shí)驗(yàn)及16S rRNA基因測(cè)序分別確定為:Lactobacillus buchneri Y1、Acetobacter pasteurianus Y2、Sphingomonas sp.Y3、Lactobacillus casei Y4、Bacillus subtilis Y5、Bacillus velezensis Y6、Kerstersia gyiorum Y7、Pediococcus pentosaceus Y8�？疾炝�8株菌與海洋來(lái)源的Bacillus subtilis DL11-11在基礎(chǔ)培養(yǎng)基及簡(jiǎn)化海水培養(yǎng)基中的菌體濃度及活菌數(shù)變化規(guī)律并對(duì)其生長(zhǎng)參數(shù)進(jìn)行動(dòng)力學(xué)分析,Acetobacter pasteurianus Y2極不適宜用簡(jiǎn)化海水基培養(yǎng),其他海洋益生菌均可用簡(jiǎn)化海水培養(yǎng)基培養(yǎng),特別是Sphingomonas sp.Y3、Lactobacillus casei Y4、Bacillus subtilis Y5、Bacillus velezensis Y6。其次,從高溫爆發(fā)后海參養(yǎng)殖池塘水樣中富集病源菌群且經(jīng)TCBS選擇性培養(yǎng)基篩選并純化,確定病源菌群中主要由Vibrio alginolyticus strain和Vibrio parahaemolyticus strain組成,為我國(guó)海域常見(jiàn)的海參腐皮病的致病菌。紙片法確定了Y2、Y4、Y5、Y6、Y8和DL 11-11對(duì)病原菌有明顯抑制作用。隨后,比較了培養(yǎng)基對(duì)海洋益生菌凈化水質(zhì)的能力的影響。基礎(chǔ)培養(yǎng)基培養(yǎng),Kerstersia gyiorum Y7亞硝態(tài)氮去除效率最高,為2.62 mg/L·d·10~8cfu。Bacillus subtilis DL11-11的氨氮去除效率最高,為0.11 mg/L·d·10~8cfu。Kerstersia gyiorum Y7的COD去除率最高。經(jīng)簡(jiǎn)化海水培養(yǎng)基培養(yǎng)后,Sphingomonas sp.Y3亞硝態(tài)氮去除效率及氨氮去除效率最高,分別為3.82 mg/L·d·10~8cfu、0.37 mg/L·d·10~8cfu,同時(shí)COD去除率高。最后,根據(jù)前期對(duì)各海洋益生菌在基礎(chǔ)培養(yǎng)基以及簡(jiǎn)化海水培養(yǎng)基中的生長(zhǎng)特點(diǎn)及其相互作用、對(duì)病原菌群的抑制作用以及對(duì)氨氮、亞硝態(tài)氮、COD、濁度的影響設(shè)計(jì)兩組不同的菌種組合。其中,基于基礎(chǔ)培養(yǎng)基實(shí)驗(yàn)結(jié)果設(shè)計(jì)的4號(hào)復(fù)合菌群(Y1:Y3:Y4:Y5:DL11-11=5:3:3:2:1)通過(guò)基礎(chǔ)培養(yǎng)基培養(yǎng)后,投入養(yǎng)殖廢水后能有效降低氨氮、亞硝態(tài)氮及COD,且亞硝態(tài)氮去除效率和氨氮去除率最高,其中亞硝態(tài)氮去除效率可達(dá)3.35 mg/L·d·10~8cfu,較單菌處理可達(dá)到的最高去除效率(Kerstersia gyiorum Y7)提高了27.86%;氨氮去除效率可達(dá)0.14 mg/L·d·10~8cfu,較單菌處理可達(dá)到的最高去除效率(Bacillus subtilis DL11-11)提高了27.27%�；诤�(jiǎn)化海水培養(yǎng)基實(shí)驗(yàn)結(jié)果設(shè)計(jì)的B組合(Y1:Y3:Y4:DL11-11=3:1:1:5)能有效降解亞硝態(tài)氮及COD,A組合(Y3:Y4:Y5:Y6:Y7=2:5:3:3:5)能有效降解亞硝態(tài)氮及氨氮。但在亞硝態(tài)氮去除效率方面,A、B組合區(qū)別不大,處理5天的平均去除效率均可達(dá)4.26mg/L·d·10~8cfu,較單菌處理可達(dá)到的最高去除效率(Sphingomonas sp.Y3)提高了11.52%,較4號(hào)復(fù)合菌群提高了27.16%。A組合氨氮去除效率可達(dá)0.40 mg/L·d·108cfu,較單菌處理可達(dá)到的最高去除效率(Sphingomonas sp.Y3)提高了8.10%,較4號(hào)復(fù)合菌群提高了1.86倍,效率差異明顯。可見(jiàn),適應(yīng)海洋環(huán)境的益生菌在水質(zhì)凈化方面較淡水培養(yǎng)的益生菌具有顯著優(yōu)勢(shì)。
【學(xué)位授予單位】：大連理工大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2019
【分類號(hào)】：S968.9

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本文編號(hào)：2615285