【摘要】：截短側(cè)耳素是一類廣譜抗生素,是由高等真菌產(chǎn)生的三環(huán)二萜烯類化合物。而通過截短側(cè)耳素類前體合成的抗生素主要包括沃尼妙林(Valnemulin,VLM)及泰妙菌素(Tiamulin,TML)等,以上抗生素的結(jié)構(gòu)上有五元環(huán)、八元環(huán)上的羰基、C-14位上的�；癈-11位上的羥基等基團。沃尼妙林主要是通過在家禽、水產(chǎn)品等體內(nèi)與病原微生物核糖體的50S亞基相結(jié)合,從而與病原體23SrRNA的V區(qū)位作用,阻止病原體的肽基轉(zhuǎn)移酶在CCA-末端的正確定位,進而抑制蛋白質(zhì)的生成,達到使病原體死亡的目的。泰妙菌素主要對支原體、豬密螺旋型痢疾、脲原體感染、豬放線菌性胸膜肺炎、腸道螺旋體病、豬肺炎霉形體等具有良好效果。沃尼妙林的毒性低,無致癌、致畸、致突變及繁殖毒性,且無免疫系統(tǒng)損害。因截短側(cè)耳素類抗生素能夠有效作用于腸道螺旋體、支原體及革蘭氏陽性菌,所以目前被廣泛用于魚類等水產(chǎn)品及豬、牛等陸地家禽疾病的預(yù)防與治療。本文的受試動物為鯽魚(Carassius auratus)。在實驗條件下建立了適用于魚體內(nèi)沃尼妙林和泰妙菌素殘留的檢測方法,并進一步探究了這兩種截短側(cè)耳素類抗生素在鯽魚體內(nèi)富集與釋放的規(guī)律。主要研究內(nèi)容如下:1.通過對提取試劑的比較,凈化條件的優(yōu)化,色譜條件以及質(zhì)譜條件的優(yōu)化,建立了適用于魚體內(nèi)沃尼妙林和泰妙菌素殘留的檢測方法。鯽魚各組織樣品用2%甲酸-乙腈超聲提取后,經(jīng)Oasis MCX SPE小柱凈化,采用超高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜(ultra performance liquid chromatography-tandem mass spectrometry,UPLC-MS/MS)測定,沃尼妙林和泰妙菌素分別采用外標(biāo)法定量,內(nèi)標(biāo)法定量。以含有0.05%甲酸的乙酸銨水溶液作為流動相,梯度洗脫分離,電噴霧正離子多反應(yīng)監(jiān)測模式監(jiān)測。結(jié)果表明,這兩種截短側(cè)耳素類抗生素在5~1000 ng/mL內(nèi)呈現(xiàn)良好的線性關(guān)系。沃尼妙林和泰妙菌素的檢出限和定量限分別為0.03μg/kg和0.1μg/kg。在0.1、1.0、5.0、10.0、50.0μg/kg五種添加水平條件下,成年鯽魚肌肉中沃尼妙林和泰妙菌素的平均回收率為96.72%~113.78%,相對標(biāo)準偏差為1.02%~3.68%;肝臟中沃尼妙林和泰妙菌素的平均回收率為99.23%~115.43%,相對標(biāo)準偏差為2.60%~7.06%;腸中沃尼妙林和泰妙菌素的平均回收率為80.35%~111.41%,相對標(biāo)準偏差為1.68%~7.24%;批間相對標(biāo)準偏差為2.26%~9.10%,均小于10.0%,符合實驗的要求。本方法操作簡單,耗時少,重復(fù)性好,靈敏度高,實樣檢測結(jié)果表明該方法適合鯽魚體內(nèi)沃尼妙林和泰妙菌素的實際測定。2.應(yīng)用腹腔注射的給藥方式,分別在不同的時間節(jié)點取出鯽魚各組織,經(jīng)超高效液相色譜串聯(lián)四級桿及飛行時間質(zhì)譜(UPLC/Q TOF MS)分析,結(jié)合各代謝物的相對分子質(zhì)量以及相關(guān)文獻,確定泰妙菌素在鯽魚體內(nèi)產(chǎn)生五種代謝物,分別是M1(510.2908,C_(28)H_(48)NO_5S~+)、M2(510.2908,C_(28)H_(48)NO_5S~+)、M3(466.2750,C_(26)H_(44)NO_4S~+)、M4(482.2663,C_(26)H_(44)NO_5S~+)和M5(482.2663,C_(26)H_(44)NO_5S~+)。M1和M2是同分異構(gòu)體;M4和M5也是同分異構(gòu)體,但同時也是M3的代謝物,是泰妙菌素的二級代謝產(chǎn)物。沃尼妙林在鯽魚體內(nèi)產(chǎn)生三種代謝物V1(581.3182,C_(31)H_(52)N_2O_6S)、V2(581.3182,C_(31)H_(52)N_2O_6S)和V3(597.0903,C_(31)H_(52)N_2O_7S),V1和V2是同分異構(gòu)體;因文獻以及實驗儀器的局限性,具體結(jié)構(gòu)還未確定。沃尼妙林和泰妙菌素的靶器官均為肝臟,經(jīng)膽囊排出體外。代謝物在其他各組織中也都存在。沃尼妙林的三種代謝物更多的出現(xiàn)在膽囊和皮膚中。除此之外,沃尼妙林和泰妙菌素在不同物種之間產(chǎn)生的代謝物也不同。3.應(yīng)用藥浴方法,探究沃尼妙林和泰妙菌素以及兩者的代謝物在鯽魚苗體內(nèi)的富集和代謝規(guī)律。結(jié)果表明,泰妙菌素主要的代謝產(chǎn)為M1(8α-OH-TML)、M3(N-deethly-TML)和M4(8α-OH-N-deethly-TML),沃尼妙林主要的代謝產(chǎn)物為V1(8α-OH-VLM或2β-OH-VLM)和V2(2β-OH-VLM或8α-OH-VLM),主要代謝途徑是母核羥基化。由此斷定,泰妙菌素在鯽魚體內(nèi)的潛在標(biāo)志殘留物是8α-OH-TML、N-deethly-TML和8α-OH-N-deethly-TML;沃尼妙林在鯽魚體內(nèi)的潛在標(biāo)志殘留物是8α-OH-VLM和2β-OH-VLM。在富集階段,沃尼妙林和泰妙菌素的含量都是呈現(xiàn)鋸齒狀升高,在飽和階段呈現(xiàn)波動性平穩(wěn),在最后的釋放階段呈現(xiàn)下降的趨勢。整個過程呈現(xiàn)先上升后下降的趨勢。沃尼妙林和泰妙菌素在鯽魚苗體內(nèi)的生物富集系數(shù)分別為1.23,3.01,泰妙菌素的生物富集系數(shù)大于沃尼妙林的生物富集系數(shù),泰妙菌素的富集速率更快一些,但是兩種物質(zhì)在2天之內(nèi)都能達到飽和。沃尼妙林和泰妙菌素在鯽魚體內(nèi)的半衰期分別為4.28天,3.74天,泰妙菌素的消除速率要快于沃尼妙林。且兩種藥物凈化的第二周,都沒有消除完全;腹腔注射兩種藥物,其在各組織中的藥物基本都能在一天之內(nèi)消除完全。結(jié)果表明,不同種給藥途徑,兩種藥物在體內(nèi)的代謝規(guī)律不一樣,腹腔注射的給藥途徑要比藥浴第七天停藥后代謝快得多。
【圖文】：

圖 1-1 沃尼妙林結(jié)構(gòu)式Fig. 1.1 The structure of valnemulin沙星、泰樂菌素等藥物，更不易產(chǎn)葡萄球菌、雞敗血霉形體、牛霉形疾短螺旋體等均有較好的作用[12,13疾、腹瀉等疾病具有良好防治作用理主要是通過在家禽、水產(chǎn)品等體病原體 23SrRNA 的 V 區(qū)位作用，，進而抑制蛋白質(zhì)的生成，，達到使林是通過結(jié)合病原體的 23 位 S 基，在列腺素 E2、一氧化氮、腫瘤壞死因化酶 2 等，引起白細胞介素-6 的表氨基末端激酶等的正常作用，從而尼妙林的毒性低，無致癌、致畸、、雄性小鼠、雌性小鼠的半數(shù)致死

圖 1-2 泰妙菌素結(jié)構(gòu)式Fig. 1.2 The structure of tiamulin、豬密螺旋型痢疾、脲原體感染體、雞敗血霉形體、金黃色葡萄節(jié)炎等具有良好效果。其結(jié)構(gòu)上基及 C-14 位上的�；鶎ζ淇咕_規(guī)定泰妙菌素及其代謝物質(zhì)別為 100 μg/kg、500 μg/kg，而 8量分別為 100 μg/kg、1000 μg物脂肪、肝臟、肌肉中的最高殘留
【學(xué)位授予單位】：浙江海洋大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2019
【分類號】：S948

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本文編號：2609017