【摘要】：凡納濱對(duì)蝦(Litopenaeus vannamei),舊稱南美白對(duì)蝦,因其廣鹽性特征,近年淡化養(yǎng)殖發(fā)展迅猛。凡納濱對(duì)蝦淡化養(yǎng)殖中,水體鹽度大多低于5‰,該鹽度對(duì)對(duì)蝦而言是種脅迫,直接影響凡納濱對(duì)蝦的滲透壓調(diào)節(jié)和能量代謝,進(jìn)而影響機(jī)體生長(zhǎng)和健康,而對(duì)蝦機(jī)體健康與肝腸健康密切相關(guān)。本文以低鹽度3‰作為脅迫因子,以凡納濱對(duì)蝦體液等滲點(diǎn)鹽度25‰作為對(duì)照,研究低鹽脅迫對(duì)凡納濱對(duì)蝦肝腸的影響,并選擇3種功能物質(zhì)作為添加劑,探究營(yíng)養(yǎng)調(diào)控對(duì)緩解凡納濱對(duì)蝦低鹽應(yīng)激的效果和機(jī)制。主要結(jié)果如下:1、低鹽度脅迫對(duì)凡納濱對(duì)蝦肝腸健康的影響為探究低鹽度脅迫對(duì)凡納濱對(duì)蝦肝胰腺和腸道的影響,選取蝦苗(0.080±0.003 g)分別以25‰鹽度和3‰鹽度養(yǎng)殖8周。結(jié)果顯示:生長(zhǎng)上,3‰鹽度下對(duì)蝦的增重率下降,餌料系數(shù)上升,全蝦灰分下降(P0.05)。低鹽脅迫對(duì)凡納濱對(duì)蝦的肝胰腺和腸道造成了明顯的氧化損傷,肝胰腺和腸道中丙二醛含量顯著上升,且腸道中還原型谷胱甘肽含量顯著下降(P0.05)。同時(shí),低鹽脅迫下凡納濱對(duì)蝦肝胰腺消化酶活性有升高趨勢(shì),而腸道消化酶有下降趨勢(shì)。與25‰鹽度相比,3‰鹽度下對(duì)蝦肝胰腺中酸性磷酸酶活性顯著上升,酚氧化酶活性顯著下降,腸道中溶菌酶活性顯著下降(P0.05)。與對(duì)照組25‰鹽度相比,3‰鹽度養(yǎng)殖的凡納濱對(duì)蝦肝胰腺中分泌細(xì)胞數(shù)量增多且體積增大,吸收細(xì)胞數(shù)量減少,肝小管排列疏松,基底膜略有破損;腸道肌肉層變薄且絨毛變短,上皮細(xì)胞游離面有部分微絨毛脫落。腸道菌群分析表明,在門水平,低鹽脅迫下凡納濱對(duì)蝦腸道中的的Saccharibacteria、綠彎菌(Chloroflexi)和Gracilibacteria顯著上升;在屬水平,低鹽組對(duì)蝦腸道中假單胞菌(Pseudomonas)、黃桿菌(Flavobacterium)和希瓦氏菌(Shewanella)等潛在致病菌明顯增多(P0.05),增加了低鹽度下對(duì)蝦爆發(fā)疾病的可能。腸道菌群16S功能預(yù)測(cè)分析表明,與25‰鹽度相比,低鹽脅迫下對(duì)蝦腸道菌群的KEGG pathway豐度在三個(gè)等級(jí)的多個(gè)代謝通路均有顯著變化,包括氨基酸代謝、能量代謝、脂代謝和多糖合成、消化代謝和免疫系統(tǒng)通路豐度明顯下降,而分泌系統(tǒng)、細(xì)菌趨藥性、無(wú)機(jī)離子運(yùn)輸和代謝、蛋白激酶等通路豐度明顯富集(P0.05)。本研究表明,極低鹽度3‰脅迫下,凡納濱對(duì)蝦肝胰腺會(huì)發(fā)生適應(yīng)性變化,但低鹽度仍會(huì)對(duì)肝胰腺和腸道結(jié)構(gòu)造成損傷,繼而造成生長(zhǎng)性能和免疫酶活的下降,這些變化可能與腸道菌群的代謝功能變化密切相關(guān)。而低鹽度下,凡納濱對(duì)蝦腸道中致病菌豐度的升高增加了疾病爆發(fā)的可能。2、功能性添加劑水飛薊素緩解凡納濱對(duì)蝦低鹽應(yīng)激的效應(yīng)研究為探究水飛薊素緩解凡納濱對(duì)蝦低鹽應(yīng)激的效應(yīng),設(shè)計(jì)水飛薊素添加量分別為0(對(duì)照組)、0.01%、0.02%和0.04%的四組飼料,選取蝦苗(0.080±0.003g)以3‰鹽度的水體養(yǎng)殖8周,結(jié)果顯示:飼料中添加水飛薊素(0.01%~0.04%)后,凡納濱對(duì)蝦的增重率顯著上升,餌料系數(shù)顯著下降(P0.05)。0.04%水飛薊素添加組對(duì)蝦的肝胰腺淀粉酶活性顯著上升,0.02%和0.04%水飛薊素添加組對(duì)蝦的腸道蛋白酶和淀粉酶活性顯著上升(P0.05)。飼料中添加0.04%水飛薊素能顯著提高凡納濱對(duì)蝦肝胰腺中超氧化物歧化酶和過(guò)氧化氫酶活性,同時(shí)提高還原型谷胱甘肽含量(P0.05)。0.02%水飛薊素能顯著提高腸道中酸性磷酸酶和堿性磷酸酶活性(P0.05)。飼料中添加水飛薊素后,肝胰腺基底膜完整,肝小管排列緊密,分泌細(xì)胞和吸收細(xì)胞數(shù)量增多。飼料中添加0.02%和0.04%水飛薊素能顯著增加凡納濱對(duì)蝦腸道絨毛的長(zhǎng)度。比較對(duì)照組和0.04%水飛薊素添加組凡納濱對(duì)蝦的腸道菌群,發(fā)現(xiàn)0.04%水飛薊素添加組對(duì)蝦的腸道Gracilibacteria豐度(門水平)顯著下降,在屬水平,Iamia、土微菌(Pedomicrobium)、生絲微菌(Hyphomicrobium)、紅球菌(Rhodococcus)、申氏桿菌(Shinella)、不動(dòng)桿菌(Acinetobacter)、軍團(tuán)桿菌(Legionella)、迪茨菌(Dietzia)豐度顯著升高(P0.05),但腸道細(xì)菌代謝通路豐度無(wú)顯著變化。本研究表明,0.01~0.04%的水飛薊素均能有效降低凡納濱對(duì)蝦的肝腸氧化損傷,提高生長(zhǎng)性能,但水飛薊素對(duì)腸道菌群影響有限,對(duì)腸道細(xì)菌代謝通路豐度無(wú)顯著影響。3、功能性添加劑菊粉緩解凡納濱對(duì)蝦低鹽應(yīng)激的效應(yīng)研究為探究菊粉緩解凡納濱對(duì)蝦低鹽應(yīng)激的效應(yīng),設(shè)計(jì)菊粉添加量分別為0(對(duì)照組)、0.1%、0.2%和0.4%的飼料,選取蝦苗(0.020±0.005 g)以低鹽度3‰養(yǎng)殖8周。結(jié)果發(fā)現(xiàn),與對(duì)照組相比,飼料中添加0.2%和0.4%菊粉能顯著提高對(duì)蝦的增重率,添加0.4%菊粉全蝦灰分顯著升高(P0.05)。同時(shí),0.2%和0.4%的菊粉能有效提高腸道絨毛長(zhǎng)度和凸起數(shù)量,0.4%的菊粉能顯著提高腸道的淀粉酶活性(P0.05)。0.2%和0.4%菊粉能顯著提高肝胰腺的抗氧化水平和酸性磷酸酶活性,而且0.4%菊粉能顯著提高酚氧化酶含量(P0.05)。比較對(duì)照組和0.4%菊粉添加組對(duì)蝦的腸道菌群,在門水平,0.4%菊粉添加組對(duì)蝦腸道的厚壁菌(Firmicutes)和藍(lán)藻(Cyanobacteria)顯著高于對(duì)照組,浮霉菌(Planctomycetes)顯著低于對(duì)照組(P0.05)。低鹽脅迫下,飼料中添加0.4%菊粉能顯著降低腸道中假單胞菌(Pseudomonas)和纖維弧菌(Cellvibrio)的豐度,這降低了對(duì)蝦疾病爆發(fā)的風(fēng)險(xiǎn)。同時(shí),包括芽孢桿菌(Bacillus)、土芽孢桿菌(Geobacillus)、鏈球菌(Streptococcus)和乳球菌(Lactococcus)在內(nèi)的多種益生菌豐度顯著上升(P0.05)。本研究表明,菊粉(0.2%~0.4%)能有效提高肝胰腺和腸道消化酶活力,增強(qiáng)機(jī)體抗氧化能力,而這些作用可能與腸道內(nèi)多種益生菌豐度的上升有關(guān)。4、功能性添加物β-葡聚糖緩解凡納濱對(duì)蝦低鹽應(yīng)激效應(yīng)的研究探究β-葡聚糖緩解凡納濱對(duì)蝦低鹽應(yīng)激效應(yīng)的作用,設(shè)計(jì)β-葡聚糖添加量分別為0(對(duì)照組)、0.01%、0.02%和0.04%的飼料,選取蝦苗(0.020±0.005 g)以低鹽度3‰養(yǎng)殖8周。結(jié)果發(fā)現(xiàn),0.02%和0.04%添加組的對(duì)蝦增重率顯著升高,餌料系數(shù)顯著下降(P0.05);0.04%組對(duì)蝦的肥滿度顯著高于對(duì)照組(P0.05)。0.02%添加組對(duì)蝦肝胰腺的淀粉酶活力顯著高于對(duì)照組(P0.05);腸道蛋白酶和淀粉酶活力均隨β-葡聚糖添加量的增加而升高。在肝胰腺中,丙二醛含量隨β-葡聚糖添加量的增加而降低;過(guò)氧化氫酶活力和超氧化物歧化酶活力均隨β-葡聚糖添加量的增加而增加,且0.02%和0.04%添加組的超氧化物歧化酶活力顯著高于對(duì)照組(P0.05);0.02%和0.04%的β-葡聚糖添加量都能顯著提高對(duì)蝦谷胱甘肽過(guò)氧化物酶和酚氧化酶的活力(P0.05)。檢測(cè)6種基因(Toll樣受體、IMD、Hsp70、MSTN、TNF-α、CTL3)在肝胰腺和腸道中的表達(dá)情況。隨著β-葡聚糖添加量的增加,在兩種組織中Toll樣受體、MSTN的mRNA表達(dá)量均升高,TNF-α、CTL3的mRNA表達(dá)量均降低,IMD和Hsp70的mRNA表達(dá)量分別在腸道和肝胰腺中升高。綜上,與25‰鹽度相比,極低鹽度3‰會(huì)對(duì)凡納濱對(duì)蝦肝胰腺和腸道顯微結(jié)構(gòu)造成損傷,同時(shí)氧化損傷加重,機(jī)體免疫力下降。低鹽度3‰的8周養(yǎng)殖實(shí)驗(yàn)表明,飼料中添加適量水飛薊素(0.01%~0.04%)、菊粉(0.2%~0.4%)、β-葡聚糖(0.02%~0.04%)能有效緩解低鹽應(yīng)激對(duì)凡納濱對(duì)蝦造成的負(fù)面影響,改善對(duì)蝦生長(zhǎng)性能。
【圖文】：

圖 1 T-2 凡納濱對(duì)蝦肝胰腺對(duì)照組和 T-2 毒素處理組的組織切片觀察[46]對(duì)照組，BL 表示基底膜，LU 星形管腔；II：0.5mg/kg T 2 毒素處理組，*標(biāo)示 B 細(xì)胞數(shù)顯著增加；III：1.2 mg/kg T 2 毒素處理組，*標(biāo)示液泡，ALU 表示不正常的基底膜，NU示細(xì)胞核變暗；IV：2.4mg/kgT 2 毒素處理組，*標(biāo)示液泡，NU 表示受損細(xì)胞核；V：4.8/kgT 2 毒素處理組，NU 表示細(xì)胞核破裂；VI:12.2mg/kgT 2 毒素處理組，基底膜溶解，，胞壞死。ate I) Control shrimp. The basal lamina (BL) is clearly seen, an indication of cellular integrity.fferent hepatopancreas cellular types were clearly visible: B cell = vacuolated cells, R cell =orptive cells; LU = lumen. (plate II) Shrimp fed 0.5 mg/kg T 2 in the diet. Increased number ofcells and slight vacuolization (asterisk [*]). (plate III) Shrimp fed 1.2 mg/kg T 2. Markeduolization (*) and abnormal lumen (ALU) were observed and the cell nucleus (NU) was darker.ate IV) Shrimp fed 2.4 mg/kg T 2. Marked vacuolization (*), abnormal lumen (ALU), andcleus (NU) damage were observed. (plate V) Shrimp fed 4.8 mg/kg T 2. Vacuolization in cells,s of cells, and nucleus (NU) fragmentation were observed. (plate VI): Shrimp fed 12.2 mg/kg T Large vacuoles probably due to fusion of small vacuoles, dissolved lumen and cytoplasmicative of necrosis, and lysis (autophagy) were observed.All plates, 400× (bar = 10×).

（4）疾病肝胰腺是對(duì)蝦重要的組織器官之一，當(dāng)機(jī)體感染細(xì)菌病或病毒病后，肝胰腺就會(huì)受損。對(duì)蝦急性肝胰腺壞死綜合癥（actuehepatopancreasnecrosissyndrome，AHPNS）曾被稱為早期死亡綜合癥(early mortality syndrome, EMS)，對(duì)蝦感染該病后，肝胰腺明顯萎縮，呈白色或灰色，有時(shí)會(huì)見黑點(diǎn)或黑色條紋，組織發(fā)生纖維化病變[51]。組織切片顯示肝胰腺盲管上皮細(xì)胞壞死，細(xì)胞核腫大，B 細(xì)胞、F細(xì)胞和 R 細(xì)胞功能紊亂，E 細(xì)胞有死分裂能力顯著降低，在后期肝胰腺盲管內(nèi)和盲管間發(fā)生血細(xì)胞浸潤(rùn)，并出現(xiàn)繼發(fā)性細(xì)菌感染[52,53]。當(dāng)凡納濱對(duì)蝦患白便綜合癥后，對(duì)蝦的肝胰腺會(huì)萎縮、腫大、增生、壞死，乃至崩解[54]。能夠造成凡納濱對(duì)蝦肝胰腺組織損傷的細(xì)菌和病毒有多種，如白斑綜合癥病毒、對(duì)蝦桿狀病毒、嗜水氣單胞菌、豚鼠氣單胞菌等，這些病菌多會(huì)造成肝胰腺的腫大、消解、變黑和壞死[55,56]。
【學(xué)位授予單位】：華東師范大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2019
【分類號(hào)】：S917.4

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3 王文華;凡納濱對(duì)蝦LvJNK沉默的轉(zhuǎn)錄組比較和3種lvp38亞型的功能分析[D];國(guó)家海洋局第三海洋研究所;2018年

4 周雙艷;凡納濱對(duì)蝦（Litopenaeus vannamei）幼蝦銅、硒、鈷營(yíng)養(yǎng)生理研究[D];廣東海洋大學(xué);2014年

5 李軍亮;兩種益生菌對(duì)凡納濱對(duì)蝦幼蝦和石斑魚幼魚生長(zhǎng)和抗病力的影響[D];廣東海洋大學(xué);2018年

6 歐榮華;凡納濱對(duì)蝦NADPH（NOX）基因的克隆及功能分析[D];廣東海洋大學(xué);2018年

7 還殿宇;蛋白酶、有機(jī)酸（鹽）對(duì)奧尼羅非魚和凡納濱對(duì)蝦生長(zhǎng)、消化酶活性和營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)消化率的影響[D];上海海洋大學(xué);2018年

8 閆洋洋;豆粕部分替代魚粉飼料中幾種添加劑對(duì)凡納濱對(duì)蝦生長(zhǎng)、免疫和腸道健康的影響[D];集美大學(xué);2015年

9 路晶晶;家禽副產(chǎn)物酶解肽在凡納濱對(duì)蝦飼料中的應(yīng)用研究[D];河北農(nóng)業(yè)大學(xué);2018年

10 楊品賢;不同糖源在饑餓和不同投喂頻率下凡納濱對(duì)蝦生長(zhǎng)的影響[D];河北農(nóng)業(yè)大學(xué);2018年

本文編號(hào)：2609043