【摘要】：羅非魚(Tilapia)是世界性的養(yǎng)殖魚類,被很多國家廣泛養(yǎng)殖,是聯(lián)合國糧農(nóng)組織向全世界推廣養(yǎng)殖的品種。銅對羅非魚的影響研究大多數(shù)都是有關(guān)飼料中添加高含量銅,而水體銅暴露對羅非魚的生理毒性研究較少,且水體中的銅暴露更符合自然環(huán)境中水體受到銅污染的情況。本實(shí)驗(yàn)采用ICP-MS質(zhì)譜分析方法測定吉富羅非魚在銅暴露后,銅在各組織內(nèi)的累積;采用了酶聯(lián)免疫法測定抗氧化酶的活性;用熒光定量PCR檢測了免疫相關(guān)基因的表達(dá)。本研究水體中添加銅更貼近自然條件,探究銅對羅非魚的組織狀態(tài)的規(guī)律及免疫相關(guān)基因表達(dá),為健康養(yǎng)殖可食用羅非魚提供良好依據(jù),為羅非魚免疫學(xué)研究提供了一些數(shù)據(jù)。主要結(jié)果如下:1.銅在吉富羅非魚組織的累積研究硫酸銅在水產(chǎn)養(yǎng)殖中運(yùn)用廣泛,防治寄生蟲病時潑灑濃度可以達(dá)到1 mg/L。本實(shí)驗(yàn)設(shè)置0(對照組)和實(shí)驗(yàn)組(1 mg/L、2 mg/L、4 mg/L、6 mg/L)不同濃度銅含量的養(yǎng)殖水體,對吉富羅非魚進(jìn)行為期40天的暴露實(shí)驗(yàn),對羅非魚的生長指標(biāo)進(jìn)行了測定,實(shí)驗(yàn)組和對照組生長沒有顯著性差異。同時取鰓、肝、腎、肌肉和腸組織,測定各組織中銅離子的積累。結(jié)果顯示:各實(shí)驗(yàn)組羅非魚的肝體比都顯著高于對照組。在同一濃度下,組織富集銅離子的能力從高到低依次為肝臟、腸道、腎臟、鰓、肌肉。在高濃度的銅暴露后,肝臟中累積的銅較多而肌肉中累積銅很少。2.銅對吉富羅非魚組織氧化酶活性的影響取不同濃度銅暴露組實(shí)驗(yàn)魚的鰓、肝臟、腎臟和腸道組織,采用酶聯(lián)免疫法,測定SOD、CAT、GSH、GSSG和MDA的活性。結(jié)果顯示,肝臟中SOD的活性在2 mg/L組有明顯下降,而腎臟內(nèi)2 mg/L組SOD的活性變強(qiáng)。腎臟中CAT在2 mg/L銅暴露下活性最強(qiáng)。MDA在4 mg/L銅暴露下肝臟內(nèi)酶活性明顯變?nèi)?在6 mg/L銅暴露下的鰓中也明顯表達(dá)下降。GSH、GSSG的氧化性酶活和對照組差別不大,且各組織內(nèi)酶活性差異性不明顯。組織內(nèi)的抗氧化酶活性在含有銅離子水體環(huán)境下產(chǎn)生了變化。3.銅對吉富羅非魚免疫相關(guān)基因表達(dá)的影響取各濃度組的肝臟和腎臟,提取RNA后做熒光定量PCR。測定免疫相關(guān)基因(IL-1β、IFN-γ、CCL3、TNF-α、Hsp70、MT)的表達(dá)量。結(jié)果顯示,腎臟內(nèi)與炎癥反應(yīng)有關(guān)的的IL-1β,CCL3兩種免疫因子表達(dá)下調(diào),銅對羅非魚機(jī)體會產(chǎn)生損傷,導(dǎo)致魚體參與炎癥反應(yīng)有關(guān)基因表達(dá)下調(diào),免疫能力降低;抵御病原微生物的有關(guān)基因IFN-γ表達(dá)增強(qiáng),抵抗病原微生物能力增強(qiáng)。TNF-α在兩組織內(nèi)均未見明顯變化,銅對抗腫瘤因子影響不大。肝臟中IL-1β在銅暴露后表達(dá)上調(diào),而IFN-γ和CCL3則出現(xiàn)表達(dá)下調(diào)趨勢。金屬硫蛋白在肝臟中的表達(dá)顯著高于腎臟,且金屬硫蛋白在銅暴露后表達(dá)在肝臟明顯上調(diào),在腎臟內(nèi)表達(dá)下調(diào)。Hsp70在長時間銅暴露環(huán)境下肝臟的表達(dá)水平下調(diào)。
【圖文】：

開始前 對照組（0mg/L）暴露實(shí)驗(yàn)組1 mg/L 2 mg/L 4 mg/L 6 mg/L體長(cm) 18.15±1.68 19.33±1.09 20.52±1.05 19.82±1.08 18.90±1.141 19.71±1.1全長(cm) 22.34±1.99 24±1.44 24.29±1.03 23.64±1.39 23.05±1.39 24.14±1.體重(g) 180.12±20.1 224.33±39.5 226.57±37.1 207.91±37.2 185.5±32.1 219.71±3肝體比(%) 0.327±0.11 0.654±0.18a0.750±0.22a0.876±0.24a0.670±0.1a 表示處理組與對照組有顯著性差異(P< 0.05)。a shows the significant difference between the treatment and the control (P < 0.05).2.2.2 銅離子在各組織中積累在相同暴露時間下，1 mg/L、2 mg/L、4 mg/L 和 6 mg/L 不同銅濃度暴露組與對照組比較，肌肉組織中銅離子的含量相差不明顯，沒有顯著性差異。在肝臟、腎臟、腸道和鰓組織，實(shí)驗(yàn)組的組織中的銅離子含量顯著高于對照組中的含量。在 4 mg/L 的銅暴露組，，各組織內(nèi)（除肌肉）銅含量都是最高的（圖 2-1）。

圖 3-1 不同濃度的銅暴露組中羅非魚不同組織的 SOD 活性Fig. 3-1 The activity of SOD in different tissues of tilapia exposed to different copperconcentrations不同字母（a,b）之間差異性顯著。Different letters (a,b) indicate significant differences among treatments3.2.2 銅離子對羅非魚各組織 CAT 酶活性的影響CAT 酶活性在腎臟中最高，然后依次是腸道、肝臟和鰓組織。在腎臟中，CAT 酶活性在 2 mg/L 銅濃度的實(shí)驗(yàn)組中，比對照組的 CAT 酶性高，其它實(shí)驗(yàn)組與對照組沒有顯著性差異。在肝臟中，在 6 mg/L 的銅濃度下，CAT 酶活性顯著高于對照組中的活性其它實(shí)驗(yàn)組與對照組沒有顯著性差異。在腸道和鰓組織中，CAT 酶活性在實(shí)驗(yàn)組和對照組中沒有顯著性差異。果如圖 3-2 所示。
【學(xué)位授予單位】：上海海洋大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號】：S943

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本文編號：2608234