土壤鹽漬化是農(nóng)業(yè)生產(chǎn)中的一個(gè)重要的非生物脅迫因素,如何提高作物的耐鹽性已經(jīng)成為作物遺傳育種領(lǐng)域的重要研究課題之一。紫花苜蓿是一種被譽(yù)為“牧草之王”的多年生優(yōu)良豆科牧草,在生態(tài)環(huán)境治理、固土護(hù)坡、防止水土流失等方面具有非常重要的作用。如何進(jìn)一步提高其抗逆性和產(chǎn)量,擴(kuò)大其種植規(guī)模,是當(dāng)前紫花苜蓿研究領(lǐng)域的重點(diǎn)。目前,基因工程的發(fā)展和應(yīng)用為紫花苜�？鼓孢z傳育種開辟了一條新的途徑。吉林省農(nóng)業(yè)科學(xué)院牧草生物技術(shù)育種研究室前期利用同源克隆結(jié)合RT-PCR的方法在吉農(nóng)朝鮮堿茅(Puccinellia chinampoensis)中分離到一個(gè)過(guò)氧化氫酶基因,命名為:PuCAT,并構(gòu)建了其p3300-35s-PuCAT-NOS植物表達(dá)載體。本研究以“公農(nóng)5號(hào)”紫花苜蓿作為受體材料,首先對(duì)已有的紫花苜蓿遺傳轉(zhuǎn)化系統(tǒng)進(jìn)行了優(yōu)化,接著利用農(nóng)桿菌介導(dǎo)法將上述PuCAT基因轉(zhuǎn)入紫花苜蓿,以期培育出抗鹽堿轉(zhuǎn)基因紫花苜蓿新種質(zhì)。1.試驗(yàn)選擇培育7d的無(wú)菌苗子葉作為外植體,選用UM+2,4-D 2 mg·L-1+KT 0.25mg·L-1作為愈傷培養(yǎng)基,后將培育出的愈傷組織在不同配比的分化培養(yǎng)基進(jìn)行分化分析,結(jié)果發(fā)現(xiàn),最...

【文章頁(yè)數(shù)】：38 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【部分圖文】：

圖2-1植物表達(dá)載體p3300-35s-PuCAT-NOS植物表達(dá)載體

桿菌介導(dǎo)的紫花苜蓿遺傳轉(zhuǎn)化體菌介導(dǎo)紫花苜蓿的遺傳轉(zhuǎn)化體系，本試驗(yàn)開銨膦的濃度選擇、農(nóng)桿菌的濃度確定、預(yù)培養(yǎng)基中所加頭孢霉素的濃度等。農(nóng)5號(hào)MedicagesativaL.cv.GongnongNo.室提供）含Bar基因的pCAMBIA3300和農(nóng)桿菌為植物表....

圖3-1bar基因的PCR鑒定圖

.精確的稱取0.8g瓊脂糖，并加入0.5×TBE緩沖液，加熱使其充分的溶.等待溶液冷卻到60℃的時(shí)候需要戴手套加入1μl的EB替代染料后搖.將瓊脂糖倒入制膠模具中，厚度一般為0.3～0.6cm插入梳子。.在室溫下靜止放置30min以上，等到瓊脂糖完全凝固....

圖3-2PuCAT基因的PCR鑒定圖

圖3-2PuCAT基因的PCR鑒定圖Fig.3-2PuCATgeneforPCRidentification注：Maker為DNAMakerDL15000plus；“+”為質(zhì)粒p3300-35s-PuCAT-NOS陽(yáng)性對(duì)照-”為野生型植株陰性對(duì)照；編號(hào)....

本文編號(hào)：4035071