殺配子染色體（GC）是指在小麥（Triticum aestivum L.）遺傳背景下附加來自山羊草屬（Aegilops Linn.）的某些染色體,這種外源染色體具有優(yōu)先傳遞效應(yīng),并能誘導(dǎo)其它染色體斷裂和重組,從而產(chǎn)生缺失、易位等染色體結(jié)構(gòu)變異,在小麥的遺傳育種中發(fā)揮著十分重要的作用,但是殺配子染色體的分子作用機(jī)制至今仍不清楚。在我們的前期研究中,通過高用量測序分析發(fā)現(xiàn),miR2118b-5p在小麥-殺配子染色體3C單體附加系（CS-3C）花藥里差異表達(dá)。本研究克隆小麥miR2118b-5p前體（MIR2118b-5p）,并對其進(jìn)行功能研究。主要研究結(jié)果如下:1.根據(jù)miRNA前體基因的結(jié)構(gòu)特點(diǎn),設(shè)計(jì)引物,利用PCR法從小麥基因組克隆獲得MIR2118b-5p基因,對該前體序列進(jìn)行二級結(jié)構(gòu)預(yù)測,可形成頸環(huán)結(jié)構(gòu)。2.成功構(gòu)建了其植物表達(dá)載體,pOx-MIR2118b-5p,含有pUbi啟動子,具有潮霉素抗性。3.通過農(nóng)桿菌介導(dǎo)法對水稻進(jìn)行遺傳轉(zhuǎn)化,獲得潮霉素（Hyg）抗性水稻植株13株。4.通過PCR對抗性植株進(jìn)行了分子生物學(xué)檢測,得到6株轉(zhuǎn)MIR2118b-5p基因水稻。利用Stem-l... 

【文章頁數(shù)】：69 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
第1章 緒論
    1.1 殺配子染色體及其在小麥遺傳育種中的應(yīng)用
        1.1.1 殺配子染色體
        1.1.2 殺配子染色體的應(yīng)用
    1.2 植物microRNA
        1.2.1 植物mi RNA的發(fā)現(xiàn)
        1.2.2 植物mi RNA的合成及作用機(jī)制
        1.2.3 植物mi RNA的預(yù)測和鑒定
        1.2.4 植物mi RNA靶基因的預(yù)測和鑒定
    1.3 植物microRNA的生物學(xué)功能
        1.3.1 miRNA與植物生長發(fā)育
        1.3.2 miRNA參與多種植物激素信號傳遞過程
        1.3.3 miRNA在環(huán)境脅迫中的調(diào)節(jié)作用
    1.4 miR2118的功能及研究進(jìn)展
    1.5 本研究的目的和意義
第2章 小麥MIR2118b-5p基因的克隆
    2.1 引言
    2.2 實(shí)驗(yàn)材料與方法
        2.2.1 實(shí)驗(yàn)材料
        2.2.2 實(shí)驗(yàn)方法
    2.3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果
        2.3.1 小麥MIR21118b-5p基因的克隆
        2.3.2 pMD18T-MIR2118b-5p克隆載體的構(gòu)建
        2.3.3 序列的生物信息學(xué)分析
    2.4 本章小結(jié)
第3章 MIR2118b-5p基因?qū)λ镜倪z傳轉(zhuǎn)化
    3.1 引言
    3.2 實(shí)驗(yàn)材料與方法
        3.2.1 實(shí)驗(yàn)材料
        3.2.2 實(shí)驗(yàn)方法
    3.3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果
        3.3.1 小麥MIR2118b-5p基因植物表達(dá)載體的構(gòu)建
        3.3.2 pOx-MIR2118b-5p轉(zhuǎn)化農(nóng)桿菌
        3.3.3 轉(zhuǎn)基因水稻植株的獲得
        3.3.4 轉(zhuǎn)基因水稻的PCR檢測
    3.4 本章小結(jié)
第4章 轉(zhuǎn)基因水稻的功能分析
    4.1 引言
    4.2 實(shí)驗(yàn)材料與方法
        4.2.1 實(shí)驗(yàn)材料
        4.2.2 實(shí)驗(yàn)方法
    4.3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果
        4.3.1 水稻RNA的提取
        4.3.2 MIR2118b-5p過表達(dá)水稻中miR2118b-5p和OsSAUR36的qRT-PCR分析
        4.3.3 miR2118b-5p過表達(dá)轉(zhuǎn)基因水稻的育性及農(nóng)藝性狀分析
        4.3.4 對轉(zhuǎn)基因及野生型水稻柱頭花粉活力的觀察
        4.3.5 其它育性相關(guān)基因的表達(dá)量分析
    4.4 本章小結(jié)
第5章 討論
    5.1 殺配子染色體對小麥遺傳育種的重要性
    5.2 microRNA對植物生長發(fā)育具有重要意義
    5.3 MIR2118b-5p過表達(dá)轉(zhuǎn)基因植株及其靶基因的表達(dá)分析
    5.4 轉(zhuǎn)MIR2118b-5p基因植株的其它育性相關(guān)基因的表達(dá)分析
    5.5 下一步工作及展望
結(jié)論
參考文獻(xiàn)
攻讀碩士學(xué)位期間所發(fā)表的學(xué)術(shù)論文
致謝


【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
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[2]植物生長素響應(yīng)基因SAUR的研究進(jìn)展[J]. 朱宇斌,孔瑩瑩,王君暉.  生命科學(xué). 2014(04)
[3]殺配子染色體在小麥-黑麥異代換系中的作用研究[J]. 于洪濤,郭長虹.  中國農(nóng)學(xué)通報. 2009(24)
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[6]植物微小RNA（microRNA）研究進(jìn)展[J]. 王磊,范云六.  中國農(nóng)業(yè)科技導(dǎo)報. 2007(03)
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本文編號：3697688