半夏（Pinellia ternata（Thunb.）Breit）屬天南星科多年生宿根草本植物,主要產(chǎn)地是中國和日本。半夏在中藥材中的使用排名是第22位,作為一種傳統(tǒng)的中草藥,其加工的產(chǎn)品具有多種藥理作用,如燥濕化痰,和胃,主治痰濕水飲,嘔吐,咳喘等。在自然生態(tài)條件下,野生半夏主要依賴塊莖、珠芽進(jìn)行無性繁殖,繁殖率偏低。為滿足用藥需求,人類長期依賴采集半夏野生資源,但由于環(huán)境污染和耕作制度改革,導(dǎo)致了市場上半夏野生資源供不應(yīng)求。為滿足市場需求,人工長期進(jìn)行半夏的無性繁殖和高密度種植,不僅造成危害半夏的植物病毒、內(nèi)生菌和致病微生物的快速橫向擴散,而且造成病毒垂直傳播在植株中大量積累,嚴(yán)重影響產(chǎn)量及品質(zhì)。同時調(diào)查發(fā)現(xiàn),田間雜草也同樣威脅著半夏產(chǎn)量。隨著生物技術(shù)的發(fā)展,使用植物組織培養(yǎng)技術(shù)可獲得大批量的半夏種苗,利用莖尖脫毒技術(shù)對半夏進(jìn)行脫毒,能夠有效保障半夏品質(zhì),利用基因工程技術(shù)得到抗草甘膦半夏新品種,可有效降低半夏的栽培管理成本。本研究選用半夏葉柄為研究材料,探索不同培養(yǎng)基配方對半夏無菌苗葉柄誘導(dǎo)脫分化、愈傷組織增殖及分化、生根的影響。結(jié)果表明:半夏葉柄誘導(dǎo)脫分化最佳培養(yǎng)基是MS+1.0... 

【文章頁數(shù)】：60 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【文章目錄】：
中文摘要
ABSTRACT
第一章 緒論
    1.1 半夏的生物學(xué)特征
        1.1.1 半夏的形態(tài)特征
        1.1.2 半夏的生態(tài)習(xí)性
        1.1.3 半夏繁殖方式
        1.1.4 半夏的化學(xué)成分
        1.1.5 半夏藥用價值
        1.1.6 半夏面臨的資源危機
    1.2 國內(nèi)外半夏組織培養(yǎng)及快繁技術(shù)研究進(jìn)展
        1.2.1 半夏外植體的選擇
        1.2.2 半夏培養(yǎng)條件的研究
        1.2.3 半夏再生方式的研究
    1.3 半夏脫毒研究進(jìn)展
        1.3.1 半夏病毒研究進(jìn)展
        1.3.2 半夏脫毒方法研究進(jìn)展
    1.4 植物遺傳轉(zhuǎn)化研究進(jìn)展
        1.4.1 農(nóng)桿菌介導(dǎo)單子葉植物遺傳轉(zhuǎn)化研究進(jìn)展
        1.4.2 半夏遺傳轉(zhuǎn)化研究進(jìn)展
    1.5 抗草甘磷半夏的獲得及其草甘膦篩選體系的建立
        1.5.1 草甘膦除草劑理化性質(zhì)及作用機理
        1.5.2 抗除草劑基因來源及抗性機理
    1.6 研究目的、意義和技術(shù)路線
第二章 半夏再生體系的建立
    2.1 實驗材料與試劑
        2.1.1 植物材料
        2.1.2 實驗試劑的配制
    2.2 實驗過程與方法
        2.2.1 半夏無菌組培苗的獲得
        2.2.2 半夏葉柄的脫分化
        2.2.3 半夏愈傷組織增殖
        2.2.4 半夏愈傷組織分化
        2.2.5 半夏愈傷組織的生根
        2.2.6 半夏一步成苗的研究
        2.2.7 煉苗和移栽
    2.3 結(jié)果與分析
        2.3.1 滅菌時間對半夏珠芽和種子的影響
        2.3.2 半夏葉柄的脫分化
        2.3.3 半夏愈傷組織的增殖
        2.3.4 半夏愈傷組織的分化
        2.3.5 半夏愈傷組織的生根
        2.3.6 半夏一步成苗的研究
        2.3.7 半夏組織培養(yǎng)總體生長過程
        2.3.8 煉苗與移栽
    2.4 討論
第三章 半夏脫毒研究
    3.1 實驗材料與試劑
        3.1.1 實驗材料
        3.1.2 實驗試劑的配制
        3.1.3 PCR所用引物
    3.2 實驗過程與方法
        3.2.1 半夏脫毒組織擴繁的技術(shù)路線
        3.2.2 病毒RNA模板的制備
        3.2.3 cDNA的合成和PCR的擴增
        3.2.4 18srRNA為內(nèi)參照的RT-PCR方法檢測半夏SMV和CMV病毒
    3.3 結(jié)果與分析
        3.3.1 半夏脫毒過程
        3.3.2 RNA的提取和cDNA的合成
        3.3.3 半夏脫毒苗SMV和CMV病毒檢測
    3.4 討論
第四章 半夏遺傳轉(zhuǎn)化體系的建立
    4.1 材料與試劑
        4.1.1 植物材料
        4.1.2 菌株及質(zhì)粒載體
        4.1.3 主要工具酶及試劑
        4.1.4 試劑盒
        4.1.5 引物
        4.1.6 農(nóng)桿菌培養(yǎng)基YP培養(yǎng)基配制
        4.1.7 半夏遺傳轉(zhuǎn)化所用溶液
        4.1.8 CTAB法提取半夏DNA
        4.1.9 瓊脂糖凝膠電泳
    4.2 實驗過程與方法
        4.2.1 受體材料預(yù)培養(yǎng)
        4.2.2 農(nóng)桿菌的培養(yǎng)
        4.2.3 菌種的保存
        4.2.4 農(nóng)桿菌質(zhì)粒DNA提取及檢測
        4.2.5 質(zhì)粒DNA濃度及純度測量
        4.2.6 酶切反應(yīng)
        4.2.7 草甘膦篩選壓選擇
        4.2.8 葉盤法轉(zhuǎn)化
        4.2.9 CTAB法提取半夏基因組DNA
        4.2.10 PCR檢測CP4目的基因
    4.3 結(jié)果與分析
        4.3.1 農(nóng)桿菌質(zhì)粒載體鑒定
        4.3.2 抗除草劑草甘膦的選擇
        4.3.3 葉盤法轉(zhuǎn)化
        4.3.4 轉(zhuǎn)基因植株的PCR檢測
    4.4 討論
第五章 討論
    5.1 半夏組織培養(yǎng)體系的建立
    5.2 半夏脫毒快繁體系的建立
    5.3 半夏遺傳轉(zhuǎn)化體系的建立
參考文獻(xiàn)
攻讀學(xué)位期間取得的研究成果
致謝
個人簡況及聯(lián)系方式


【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
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碩士論文
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