淀粉占食用稻米部分干重的90%以上。直鏈淀粉含量（Amylose content,AC）是決定和改良稻米蒸煮食味品質的關鍵內在因素,直鏈淀粉的合成及調控機理的研究是改良稻米品質的重要依據。淀粉積累重要時期在水稻灌漿成熟期,淀粉的合成與積累是一系列酶促反應的結果,參與淀粉合成的酶主要有ADP-焦磷酸化酶（AGPase）、淀粉合成酶（SS）、淀粉分支酶（SBE）及淀粉去分支酶（DBE）等四種酶。水稻淀粉合成調節(jié)因子Os RSR1是屬于AP2/EREBP類轉錄子,能夠調節(jié)淀粉合成酶基因的表達。本研究以籽粒直鏈淀粉含量超親變異的穩(wěn)定粳稻雜交子代和親本為供試材料,分析灌漿不同時期胚乳直鏈淀粉含量、ADGP、SSS和SBE淀粉合成酶活性和它們同工型基因表達量以及Os RSR1基因表達量,并克隆親本及后代Os RSR1基因,對其堿基序列和結構進行比對。利用RNA干擾技術,獲得了Os RSR1-RNAi的轉基因水稻材料,研究了OsRSR1對水稻淀粉合成相關酶基因表達量的影響及籽粒直鏈淀粉含量的影響,探討直鏈淀粉含量差異形成特點及遺傳變異的分子調控機理,就直鏈淀粉含量這一數量性狀產生超親變異的分子機理方... 

【文章頁數】：105 頁

【學位級別】：博士

【文章目錄】：
摘要
英文摘要
第一章 文獻綜述
    1 直鏈淀粉研究進展
        1.1 直鏈淀粉含量響與稻米蒸煮食味品質的關系
        1.2 直鏈淀粉的合成
        1.3 直鏈淀粉遺傳因素的研究
    2 淀粉合成酶研究進展
        2.1 ADP-葡萄糖焦磷酸化酶
        2.2 淀粉合成酶
        2.3 淀粉分支酶
    3 轉錄因子研究進展
        3.1 轉錄因子的結構
            3.1.1 DNA結合區(qū)
            3.1.2 轉錄調控區(qū)
            3.1.3 寡聚化區(qū)
            3.1.4 核定位信號區(qū)
        3.2 轉錄因子分類
        3.3 轉錄因子功能
            3.3.1 轉錄因子對胚乳的發(fā)育和貯藏物質的積累
            3.3.2 轉錄因子對淀粉生物合成基因的調節(jié)
            3.3.3 水稻淀粉調節(jié)因子研究進展
    4 研究的主要目的與意義
    5 本研究技術路線
第二章 淀粉合成關鍵酶基因及Os RSR1基因表達特性分析
    1 材料與方法
        1.1 供試材料
        1.2 試驗方法
        1.3 籽粒直鏈淀粉含量測定方法
        1.4 淀粉合成關鍵酶活性測定方法
            1.4.1 ADPG焦磷酸化酶和SSS可溶性淀粉合成酶活性測定方法
            1.4.2 淀粉分支酶活性測定方法
        1.5 淀粉合成關鍵酶基因及Os RSR1基因表達量測定
            1.5.1 試劑
            1.5.2 基因序列獲取
            1.5.3 熒光定量引物設計
            1.5.4 總RNA的提取
            1.5.5 c DNA第一條鏈合成
            1.5.6 熒光定量PCR（Quantitative real-time PCR ）
            1.5.7 RT-q PCR計算
        1.6 數據分析
    2 結果與分析
        2.1 不同灌漿時期籽粒RNA提取
        2.2 不同灌漿時期籽粒直鏈淀粉含量比較
        2.3 不同灌漿時期籽粒淀粉合成關鍵酶活性比較
        2.4 不同灌漿時期籽粒淀粉合成關鍵酶基因表達量比較
            2.4.1 不同灌漿時期籽粒Os AGP基因表達量比較
            2.4.2 不同灌漿時期籽淀粉合成酶基因表達量比較
            2.4.3 不同灌漿時期籽粒OsSBE3基因表達量比較
        2.5 不同灌漿時期籽粒Os RSR1因子表達量比較
        2.6 籽粒轉錄因子和淀粉合成相關基因表達量與酶活性及淀粉含量關系
    3 討論
        3.1 關于籽粒淀粉合成相關酶活性及其基因表達與直鏈淀粉含量關系
        3.2 關于籽粒Os RSR1因子與籽粒淀粉合成相關酶基因表達關系
第三章 水稻Os RSR1因子序列比較分析
    1 材料與方法
        1.1 試驗材料
            1.1.1 供試材料
            1.1.2 菌種與載體
            1.1.3 主要試劑
            1.1.4 PCR擴增Os RSR1基因全c DNA
            1.1.5 培養(yǎng)基
        1.2 試驗方法
            1.2.1 水稻總RNA的提取
            1.2.2 反轉錄c DNA鏈的合成
            1.2.3 c DNA全長基因的獲得
            1.2.4 DNA片段的回收
            1.2.5 DNA片段與克隆載體的連接
            1.2.6 DNA片段的轉化
            1.2.7 質粒DNA提�。ㄐ×糠ǎ�
            1.2.8 質粒酶切驗證
            1.2.9 c DNA序列分析
    2 結果與分析
        2.1 總RNA提取與第一鏈c DNA合成
        2.2 籽粒Os RSR1基因克隆及鑒定
        2.3 籽粒Os RSR1因子核苷酸及氨基酸序列
        2.4 籽粒Os RSR1基因全長c DNA序列比對
        2.5 水稻Os RSR1基因序列結構分析
    3 討論
第四章 Os RSR1基因沉默對淀粉合成關鍵酶基因表達及產量和品質性狀的影響
    1 試驗材料與方法
        1.1 試驗材料
            1.1.1 植物材料
            1.1.2 菌株
            1.1.3 質粒載體
            1.1.4 試劑盒
            1.1.5 試劑
            1.1.6 培養(yǎng)基
            1.1.7 PCR引物
        1.2 試驗方法
            1.2.1 Os RSR1-RNAi干擾載體構建
            1.2.2 水稻遺傳轉化及轉基因植株分子檢測
            1.2.3 轉基因株系性狀測定
    2 結果與分析
        2.1 Os RSR1-RNAi干擾載體構建
            2.1.1 Os RSR1-RNAi干擾載體的構建流程
            2.1.2 RT-PCR法擴增水稻Os RSR1基因干擾區(qū)段
        2.2 p BWA（V）HS-Os RSR1質粒轉化農桿菌
        2.3 Os RSR1 RNAi轉基因水稻植株的獲得
        2.4 轉基因植株T0代PCR檢測
        2.5 轉基因植株T1代抗性檢測
            2.5.1 抗性植株篩選
            2.5.2 轉基因植株T1代PCR檢測
        2.6 Os RSR1-RNAi對淀粉合成相關酶基因表達量的影響
        2.7 轉基因株系與野生型對照淀粉合成關鍵酶基因表達量比較
        2.8 Os RSR1 RNAi對產量和品質性狀的影響
    3 討論
        3.1 關于籽粒Os RSR1轉錄因子載體快速構建
        3.2 農桿菌介導的Os RSR1-RNAi干擾載體遺傳轉化
        3.3 Os RSR1基因沉默對淀粉合成關鍵酶基因表達及產量和品質性狀的影響
綜合討論
    1 關于籽粒 Os RSR1 轉錄因子序列變異及表達調控機理
    2 關于籽粒淀粉合成相關酶基因和 Os RSR1 轉錄因子表達調控以及直鏈淀粉含量超親變異
全文結論
致謝
參考文獻
附錄
縮略詞表
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【參考文獻】：
期刊論文
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博士論文
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本文編號：3692708