蛇足石杉（Huperzia serrata（Thunb.ex Murray）Trev.）是一種多年生藥用蕨類植物,生活史漫長而復(fù)雜。其體內(nèi)的生物堿—石杉堿甲（Hup-A）是世界上治療阿爾茲海默癥的重要藥物之一。蛇足石杉生長緩慢,且石杉堿甲含量極低,隨著巨大的需求壓力和持續(xù)的采挖,導(dǎo)致蛇足石杉野生資源枯竭,瀕臨滅絕。已有的研究表明蛇足石杉含有豐富的內(nèi)生真菌,內(nèi)生真菌在蛇足石杉的生長發(fā)育與石杉堿甲的代謝合成途徑中具有重要作用。本研究建立蛇足石杉內(nèi)生真菌資源庫,探究蛇足石杉內(nèi)生真菌不同組織部位多樣性差異、不同月份的菌群動態(tài)變化,分析蛇足石內(nèi)生真菌與石杉堿甲含量之間的關(guān)聯(lián)性,為調(diào)控蛇足石杉生長季節(jié)中石杉堿甲的生物合成提供依據(jù)。本研究的研究內(nèi)容和結(jié)論如下:（1）采集一年中不同月份蛇足石杉的根、莖、葉,從中分離出95株內(nèi)生真菌。根部分離出19株,莖部分離出43株,葉片分離出33株,莖分離出的內(nèi)生真菌最多;鑒定到種水平的有64株,鑒定到屬水平的有21株,鑒定到科水平的有7株,其余的鑒定到綱水平及以上;67.37%的菌株鑒定到種,22.11%的菌株鑒定到屬。其中,鐮刀菌屬（Fusarium spp.）... 

【文章來源】：西北大學(xué)陜西省 211工程院校

【文章頁數(shù)】：115 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【部分圖文】：

Hup-A和ZT-1的結(jié)構(gòu)式

西北大學(xué)碩士學(xué)位論文12圖2.1蛇足石杉植株2.1.2實驗試劑蒸餾水、75%酒精、0.1%升汞、PDA培養(yǎng)基（粉末）、土豆、硫酸鏈霉素、氨芐青霉素、石杉堿甲標準品、乙酸銨、色譜甲醇、色譜乙腈等。2.1.3儀器耗材超凈工作臺、高壓滅菌鍋、電子分析天平、培養(yǎng)皿、酒精燈、鑷子、生化培養(yǎng)箱、多功能搖床、磁珠菌種保存管、電泳槽、凝膠成像儀、PCR儀、細胞超聲破碎儀、旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀、高效液相色譜儀（島津）等。2.2實驗方法與步驟2.2.1樣品滅菌處理將新鮮的蛇足石杉的植物，整株在用自來水連續(xù)沖洗2-3h，清洗組織表面，直至看不到泥沙等雜質(zhì)。沖洗干凈后，用無菌的濾紙吸干組織表面的水分，使用手術(shù)刀將其分割為根段、葉片、莖部三個部分，根和莖分成2cm的小段。將根、莖、葉取出，進行表面滅菌處理。用滅菌的蒸餾水沖洗30s，75%酒精處理2min，然后無菌的蒸餾水沖洗3次，每次處理1min，再將組織塊置于0.1%升汞中滅菌處理8min，無菌水沖洗5次，每次2min，后用無菌的濾紙吸干組織表面的水分，滅菌材料備用。

真菌基因組DNA提取流程圖

【參考文獻】：
期刊論文
[1]寧前胡內(nèi)生真菌Fusarium tricinctum固體發(fā)酵代謝產(chǎn)物研究[J]. 王國凱,劉海濤,劉叢彬,楊家欣,王剛,劉勁松.  熱帶亞熱帶植物學(xué)報. 2020(02)
[2]西雙版納5種附生蘭非菌根內(nèi)生真菌多樣性研究[J]. 馮曉曉,陳家杰,劉峰,胡衛(wèi)珍,林福呈,章初龍.  菌物學(xué)報. 2019(11)
[3]3種有毒赤潮微藻對海岸底泥微生物群落多樣性的影響[J]. 劉仁沿,宋珊珊,宮常寶,李冬梅,劉磊,梁玉波,隋世峰.  應(yīng)用與環(huán)境生物學(xué)報. 2020(02)
[4]海南廣藿香內(nèi)生真菌分離鑒定及拮抗菌株篩選[J]. 易天鳳,吳友根,于靖,張軍鋒,楊東梅.  熱帶作物學(xué)報. 2019(08)
[5]山豆根內(nèi)生真菌的分離與鑒定[J]. 納秋霞,舒燕,張毅,蔡樂,趙景云,宋娜麗.  中國現(xiàn)代醫(yī)生. 2019(21)
[6]蛇足石杉內(nèi)生真菌的分離鑒定及其代謝產(chǎn)物乙酰膽堿酯酶抑制活性及抗炎活性研究[J]. 齊博文,莫婷,張鑫,閆雅如,徐溪平,楊洪蕓,王曉暉,李軍,史社坡,劉曉.  中國中藥雜志. 2019(15)
[7]川芎內(nèi)生真菌Cladosporium sp.次級代謝產(chǎn)物及抗菌活性研究[J]. 馬川,蒙春旺,彭成,熊亮,周勤梅.  天然產(chǎn)物研究與開發(fā). 2019(01)
[8]海洋紅樹林植物鹵蕨內(nèi)生真菌Cladosporium perangustum MA-318中一個新的鏈烯酸酐衍生物methylate cordyanhydride A[J]. 李衍荷,李曉明,徐蕊,李洪雷,王斌貴.  海洋科學(xué). 2017(09)
[9]蛇足石杉中產(chǎn)石杉堿甲內(nèi)生真菌的分離和鑒定[J]. 韓文霞,李偉澤,李小峰,張寒,楊時珍,杜江鳳,景歡,程傳彬.  微生物學(xué)通報. 2017(09)
[10]藥用植物蛇足石杉內(nèi)生菌研究進展[J]. 唐承晨,張純,王吉永,王莉莉,胡之璧,黎萬奎.  江蘇農(nóng)業(yè)科學(xué). 2017(07)

博士論文
[1]南方紅豆杉內(nèi)生真菌多樣性、次生代謝產(chǎn)物及其與宿主的相關(guān)性研究[D]. 吳令上.第二軍醫(yī)大學(xué) 2012
[2]蛇足石杉內(nèi)生真菌的促寄主生長作用及發(fā)酵產(chǎn)物研究[D]. 李娜.江蘇大學(xué) 2007

碩士論文
[1]酸棗仁總皂苷的腸道菌群體外代謝轉(zhuǎn)化研究[D]. 崔小芳.山西中醫(yī)藥大學(xué) 2020
[2]蛇足石杉內(nèi)生真菌多樣性及生物活性研究[D]. 崔靈利.華中農(nóng)業(yè)大學(xué) 2019
[3]蛇足石杉內(nèi)生真菌的分離鑒定及菌株Cercospora lagenariae化學(xué)成分研究[D]. 張鑫.北京中醫(yī)藥大學(xué) 2018
[4]蛇足石杉內(nèi)生真菌Shiraia sp.Slf14中LDC和CAO基因的克隆及表達[D]. 彭思露.江西師范大學(xué) 2016
[5]蛇足石杉的離體培養(yǎng)及內(nèi)生真菌的分離與鑒定[D]. 劉江海.中南林業(yè)科技大學(xué) 2016
[6]藥用植物紅豆杉和蛇足石杉內(nèi)生真菌多樣性及其生物活性產(chǎn)物的研究[D]. 楊迎迎.華東理工大學(xué) 2013
[7]石杉屬植物內(nèi)生菌的多樣性及其次生代謝產(chǎn)物的乙酰膽堿酯酶抑制活性研究[D]. 徐海杰.華中農(nóng)業(yè)大學(xué) 2013
[8]產(chǎn)石杉堿甲蛇足石杉內(nèi)生菌的篩選和鑒定[D]. 徐曉苗.華中農(nóng)業(yè)大學(xué) 2011
[9]產(chǎn)石杉堿甲蛇足石杉內(nèi)生真菌的分離與鑒定[D]. 汪涯.江西師范大學(xué) 2011
[10]福建蛇足石杉內(nèi)生真菌的分離鑒定與石杉堿甲的HPLC檢測[D]. 謝丹鳳.福建農(nóng)林大學(xué) 2009



本文編號：3212304