本研究采用植物組織培養(yǎng)和多倍體誘導(dǎo)相結(jié)合的方法獲得了桔梗同源四倍體試管苗,并對桔梗二倍體與同源四倍體試管苗的生理特性、遺傳變異及DNA的甲基化差異做了初步探討,以期為桔梗四倍體優(yōu)良品種的選育提供理論依據(jù)。本論文的主要研究內(nèi)容如下:1、本研究以內(nèi)蒙古赤峰市生產(chǎn)的桔梗種子為試驗(yàn)材料,用0.1%的HgC12消毒后建立無菌系,并對桔梗無菌苗的增殖培養(yǎng)基及生根培養(yǎng)基進(jìn)行優(yōu)化,在建立桔梗無菌快繁體系的基礎(chǔ)上,利用0.05%、0.1%及0.2%的秋水仙素溶液浸泡不定芽誘導(dǎo)桔梗同源四倍體,采用形態(tài)鑒別、根尖染色體鑒定和流式細(xì)胞儀分析相結(jié)合的方法鑒定其倍性。結(jié)果表明,桔梗無菌苗增殖的最佳培養(yǎng)基為MS+6-BA 1.5 mg·L-1+NAA0.3 mg·L-1,最佳生根培養(yǎng)基為1/2MS+NAA0.6mg·L-1;桔梗同源四倍體誘導(dǎo)的最適條件是用0.2%的秋水仙素（加0.02 g.mL-1二甲基亞砜）混合液處理桔梗不定芽12 h,誘導(dǎo)率達(dá)到 32.0%。2、以桔梗二倍體及人工誘導(dǎo)的同源四倍體為試驗(yàn)材料,研究比較桔梗二倍體與同源四倍體的生長和生理特性。結(jié)果表明桔梗四倍體試管苗較粗壯,葉片大且厚,顏色較深,四... 

【文章來源】：南京農(nóng)業(yè)大學(xué)江蘇省 211工程院校 教育部直屬院校

【文章頁數(shù)】：84 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【部分圖文】：

圖２－１桔梗叢生芽（Ａ）和根（Ｂ）??Ｆｉｇ．２－１?Ｍｕｌｔｉｐｌｅ?ｓｈｏｏｔｓ?ｃｌｕｍｐｓ?（Ａ）?ａｎｄ?ｒｏｏｔｉｎｇ?（Ｂ）?ｏｆ?Ｐｌａｔｙｃｏｄｏｎ?＾ｒａｎｄｉｆｌｏｒｕｍ?Ａ．ＤＣ．??

??一般而言，四倍體植株具有巨型化特征，將形態(tài)變異明顯的植株（圖２－２）先經(jīng)??流式細(xì)胞儀分析后，再用根尖壓片法鑒定。結(jié)果表明，桔梗二倍體植株根尖染色體數(shù)??為２ｎ＝２ｘ＝１８?（圖２－３，?Ａ），ＤＮＡ相對含量在１５０處有１個單峰（圖２－３，?Ｃ）；同源四??倍體植株染色體數(shù)為２ｎ＝４ｘ＝３６?（圖２－３，?Ｂ），ＤＮＡ相對含量在３００處有１個單峰（圖??２－３，?Ｄ）。???？??Ａ?＾??ｌａ?Ｊ５?，，??＂?ｏ?Ｓ?＊＇??Ｍ?ｃ?＼?ｉ）??？?１?－??????？…ｉＶ＾Ａ－ｗ－丨“、．???．??—???——＿＿??Ｈ?２ＭＭ?４＊ＩＨ?ｆｉＨＨ?Ｈ（＊？?Ｉ?？？Ｈ?Ｈ?ｚ＂？?？＊Ｍ４？?？＞ＨＭ?＇？？？?＊?ＭＨＭ??圖２－３桔梗二倍體和四倍體鑒定圖??Ｆｉｇ．２－３?Ｉｄｅｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎ?ｏｆ?ｄｉｐｌｏｉｄ?ａｎｄ?ａｕｔｏｔｅｔｒａｐｌｏｉｄ?〇「尸??Ａ：：倍體染色體數(shù)（２丨尸２ｘ＝丨８）：?Ｂ：四倍體染色體數(shù)（２ｎ＝４ｘ＝３６）??Ｃ：二倍體ＤＮＡ相對含量；?Ｄ：四倍體ＤＮＡ相對含量??Ａ：?Ｔｈｅ?ｃｈｒｏｍｏｓｏｍｅ?ｏｆ?ｄｉｐｌｏｉｄ；?Ｂ：?Ｔｈｅ?ｃｈｒｏｉｎｏｓｏｉｎｅ?ｏｆ?ｔｅｔｒａｐｌｏｉｄ??Ｃ：?Ｔｈｅ?ｒｅｌａｔｉｖｅ?ｃｏｎｔｅｎｔ?ｏｆ?ＤＮＡ?ｏｆ?ｄｉｐｌｏｉｄ；?Ｄ：?Ｔｈｅ?ｒｅｌａｔｉｖｅ?ｃｏｎｔｅｎｔ?ｏｆ?ＤＮＡ?ｏｆ?ｔｅｔｒａｐｌｏｉｄ??２．３討論??２．３．１桔梗無菌快繁體系的建立和優(yōu)化??在植物組織培養(yǎng)中

?５?１?ＯＯｂｐ??ＳＯｔ＞ｐ＞??圖４－１桔梗二倍體及其同源四倍體ＳＲＡＰ的ＰＣＲ擴(kuò)增電泳圖譜??Ｆｉｇ．４－１?Ｔｈｅ?ＳＲＡＰ?ａｍｐｌｉｆｉｃａｔｉｏｎ?ｐｒｏｆｉｌｅ?ｏｆ?ｄｉｐｌｏｉｄ?ａｎｄ?ａｕｔｏｔｅｔｒａｐｌｏｉｄ?ｏｆ?Ｐｌａｔｙｃｏｄｏｎ?ｇｒａｎｄｉｆｈｒｕｍ?Ａ．ＤＣ??（ｐｌ－ｐｌ２為丨２條引物組合，２ｘ為二倍體，４ｘ為四倍體，Ｍ為Ｍａｒｋｅｒ：?ＤＬ２０００，圓圈為部分差??異條帶）??（ｐ?１?－ｐ?１２?ｉｓ?１２?ｐｒｉｍｅｒ?ｃｏｍｂｉｎａｔｉｏｎ，?２ｘ?ｉｓ?ｄｉｐｌｏｉｄ，?４ｘ?ｉｓ?ｔｅｔｒａｐｌｏｉｄ，?Ｍ?ｉｓ?ｍａｒｋｅｒ：?ＤＬ２０００，?ｃｉｒｃｌｅ?ｉｓ??ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｌ?ｂａｎｄｓ．）??４．２．２桔梗二倍體及同源四倍體基因組ＡＦＬＰ分析??采用２４對ＡＦＬＰ引物對桔梗二倍體及其同源四倍體的ＤＮＡ多態(tài)性進(jìn)行統(tǒng)計，結(jié)??災(zāi)見農(nóng)４－４。２４對引物共擴(kuò)增出４７７條位于８０？５００?ｂｐ的ＤＮＡ片段，平均每對引物擴(kuò)??培出２０條ＤＮＡ片段，其中多態(tài)性片段有１３條，９條為二倍體特有條帶，４條四倍體??特有條帶，多態(tài)性條帶數(shù)占總條帶數(shù)的２．７３％。由上述結(jié)果可以看出，桔梗不同倍性??之問人部分引物組合擴(kuò)增出的ＡＦＬＰ條帶沒有明顯差異，說明染色體加倍后，只有極??少部分ＤＮＡ堿基序列發(fā)生改變

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
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碩士論文
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本文編號：3052684