發(fā)布時(shí)間：2020-12-16 09:32

　　金線蓮（Anoectochilus roxburghii）藥用價(jià)值極高。其黃酮,甾醇,多糖,三萜等成分均有廣泛的開(kāi)發(fā)前景。甾醇類(lèi)物質(zhì)的藥用價(jià)值已被用于治療高膽固醇、粥樣動(dòng)脈硬化等。金線蓮已被證明含有多種甾醇,研究表明其甾醇提取物有一定的抗腫瘤效果。在金線蓮甾醇合成關(guān)鍵基因表達(dá)和甾醇含量變化之間尋找一定的相關(guān)性和調(diào)控機(jī)理,以提高組織培養(yǎng)或人工栽培金線蓮甾醇化合物積累量,對(duì)高甾醇品種選育以及未來(lái)通過(guò)細(xì)胞工程技術(shù)等手段工廠化生產(chǎn)甾醇也有一定的意義。本研究對(duì)金線蓮分子水平調(diào)控和產(chǎn)物含量進(jìn)行研究,以甾醇測(cè)定為核心,對(duì)金線蓮甾醇合成路徑上的關(guān)鍵酶基因進(jìn)行克隆,以相關(guān)基因的相對(duì)表達(dá)量測(cè)定為輔助,通過(guò)生物信息學(xué)分析和亞細(xì)胞定位,對(duì)金線蓮甾醇生物合成途徑進(jìn)行探討,從而進(jìn)一步了解其次生代謝物合成的機(jī)理。本研究的主要結(jié)果如下:1.運(yùn)用超聲波輔助提取和高效液相色譜的手段,摸索了金線蓮甾醇的提取及檢測(cè)方法,對(duì)受到100 mmol·L^-1鹽（NaCl）誘導(dǎo)的金線蓮植株在0 h（空白對(duì)照）,6 h,12 h三個(gè)不同時(shí)間點(diǎn)進(jìn)行植物的三種甾醇（分別是麥角甾醇,豆甾醇,β-谷甾醇）進(jìn)行提取及含量測(cè)定... 

【文章來(lái)源】：福建農(nóng)林大學(xué)福建省

【文章頁(yè)數(shù)】：64 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【部分圖文】：

植物類(lèi)異戊二烯物質(zhì)生物合成途徑示意圖

圖 1-2 酵母 FPS 蛋白的二聚體模型Figure 1-2 Dimer model of yeast FPS protein所有已純化的 FPS 蛋白都是同源二聚體結(jié)構(gòu)，范圍為 32-45 kDa[69,70]。磷酸合成酶基因(GPPS)酸合成酶(Geranyl pyrophosphate synthase)也是酶[71]，其產(chǎn)物可指向 FPS，已經(jīng)克隆的部分植等植物中，GPPS 蛋白的結(jié)構(gòu)域保守區(qū)表現(xiàn)出出，植物 GPPS 基因開(kāi)放閱讀框長(zhǎng)度范圍為 1度的氨基酸殘基。徑中，牻牛兒基焦磷酸位于法呢基焦磷酸上游成通道進(jìn)行轉(zhuǎn)向的關(guān)鍵。是植物合成是否向甾

圖 2-1 三種甾醇的混合標(biāo)準(zhǔn)品色譜圖Figure 2-1 Chromatogram of mixed standards for three sterols標(biāo)準(zhǔn)品標(biāo)準(zhǔn)曲線上述方法進(jìn)行標(biāo)準(zhǔn)樣的配制及上樣，檢測(cè)后得到三種甾醇的回,可以看出標(biāo)準(zhǔn)曲線的線性相關(guān)性極好，相關(guān)系數(shù)均高于 0.999（2-4）。因此可以根據(jù)繪制的標(biāo)準(zhǔn)曲線來(lái)計(jì)算甾醇含量。表 2-2 三種甾醇標(biāo)準(zhǔn)品的線性回歸方程Table2-2 Linear regression equation for three sterol standards甾醇種類(lèi) 線性回歸方程 r麥角甾醇 y = 3027.3C - 44.823 0.999豆甾醇 y = 1322.8C - 9.2995 0.999

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]珠子參中法尼基焦磷酸合酶(FPS)對(duì)皂苷生物合成的影響研究[J]. 劉美佳,于怡琳,姜森,張翔,劉迪秋,葛鋒.  植物研究. 2018(04)
[2]胡黃連GPPS基因的生物信息學(xué)分析[J]. 鄭雪,王慧娜,朱彥秋,丁衛(wèi)凱,李嬌嬌,周延清,段紅英.  河南農(nóng)業(yè)科學(xué). 2018(06)
[3]瀕危藥用植物茅蒼術(shù)法呢基焦磷酸合酶基因克隆及其表達(dá)分析[J]. 蔣玲,谷巍,巢建國(guó),桑曉華,韓赟,劉青芝,席彩彩.  中草藥. 2017(04)
[4]半仿生-回流法提取金線蓮中黃酮的研究[J]. 呂鑒泉,黃健如,魏曉旋,葉韻斯,陳曉榆,鄒林江.  廣東化工. 2016(11)
[5]基于轉(zhuǎn)錄組信息的艾納香牻牛兒基焦磷酸合成酶基因(BbGPPS)的克隆及序列分析[J]. 官玲亮,夏奇峰,石小兵,藍(lán)惠萍,陳振夏,趙致,龐玉新.  熱帶作物學(xué)報(bào). 2016(05)
[6]金線蓮研究進(jìn)展[J]. 郭慧慧,蔣元斌,林叢發(fā),周麗英.  福建農(nóng)業(yè)科技. 2016(03)
[7]光照強(qiáng)度與栽培模式對(duì)金線蓮生長(zhǎng)及品質(zhì)影響[J]. 何碧珠,鄒雙全,劉江楓,朱萍,鄒小興.  中國(guó)現(xiàn)代中藥. 2015(12)
[8]燕麥鹽脅迫響應(yīng)基因的差異表達(dá)與生理響應(yīng)的關(guān)系[J]. 高彩婷,劉景輝,徐壽軍,張玉芹,于華榮.  西北植物學(xué)報(bào). 2015(07)
[9]光照強(qiáng)度對(duì)金線蓮生長(zhǎng)及產(chǎn)量的影響[J]. 魏翠華,謝宇,秦建彬,陳沁.  北方園藝. 2015(12)
[10]金線蓮研究現(xiàn)狀及展望[J]. 韓武章,陳小玲,黃阿鳳.  福建熱作科技. 2015(01)

博士論文
[1]熱脅迫下丹參次生代謝比較轉(zhuǎn)錄組學(xué)研究[D]. 李東.四川農(nóng)業(yè)大學(xué) 2011
[2]兩種金線蓮生長(zhǎng)及與內(nèi)生真菌共生培養(yǎng)的研究[D]. 趙玥.北京協(xié)和醫(yī)學(xué)院 2009
[3]棉花細(xì)胞質(zhì)雄性不育恢復(fù)基因的圖位克隆及PPR基因家族的分析[D]. 楊路明.南京農(nóng)業(yè)大學(xué) 2009

碩士論文
[1]富硒對(duì)丹參次生代謝產(chǎn)物含量的影響及多糖提取研究[D]. 粟敏.成都理工大學(xué) 2017
[2]不同栽培模式金線蓮藥材中微量元素、植物激素和甾醇的分析[D]. 林晨.福建醫(yī)科大學(xué) 2015
[3]三七、西洋參中三萜皂苷合成關(guān)鍵酶基因的克隆及表達(dá)模式分析[D]. 牛云云.北京協(xié)和醫(yī)學(xué)院 2013
[4]鉀肥對(duì)白樺三萜合成關(guān)鍵酶基因表達(dá)的影響[D]. 姬曉明.東北林業(yè)大學(xué) 2013
[5]小麥法呢基焦磷酸合酶（FPPS）基因克隆及功能分析[D]. 李永波.山東師范大學(xué) 2012
[6]金線蓮化學(xué)成分及脫氧鬼臼衍生物活性研究[D]. 徐靜.蘭州大學(xué) 2011
[7]植物甾醇合成關(guān)鍵酶基因OsSQS遺傳轉(zhuǎn)化水稻的研究[D]. 馬丹.福建農(nóng)林大學(xué) 2011
[8]8種園林花卉植物耐鹽性基礎(chǔ)研究[D]. 景璐.內(nèi)蒙古農(nóng)業(yè)大學(xué) 2010
[9]辣椒應(yīng)答UV-B的轉(zhuǎn)錄組差異分析及相關(guān)功能基因的分離[D]. 徐波.福建農(nóng)林大學(xué) 2008
[10]金線蓮中甾醇和三萜類(lèi)化合物提取分析及其抑制人慢性白血病粒細(xì)胞K562活性研究[D]. 鐘添華.福建醫(yī)科大學(xué) 2007



本文編號(hào)：2919939