組蛋白修飾是表觀遺傳調(diào)控的重要方式之一,包括組蛋白乙酰化、甲基化、磷酸化等多種組蛋白共價修飾,對于動植物和人類的生長發(fā)育至關(guān)重要。組蛋白乙酰化修飾是由組蛋白乙酰轉(zhuǎn)移酶（HATs）和去乙�；福℉DACs）共同調(diào)控的一種動態(tài)可逆的修飾過程,能夠參與生物體內(nèi)基因轉(zhuǎn)錄活性的調(diào)控和重塑染色質(zhì)結(jié)構(gòu)狀態(tài)等重要過程,進(jìn)而影響到動植物的生長發(fā)育。水稻作為單子葉植物的模式生物,一直是科學(xué)家重要的研究材料。然而在水稻發(fā)育過程中的組蛋白乙�；揎椪{(diào)控基因表達(dá)和響應(yīng)逆境脅迫的機(jī)制研究還有待進(jìn)一步完善。因此,本研究主要以組蛋白乙酰化修飾作為研究對象,全面定性分析水稻葉片全蛋白的乙�；揎椞卣鳌⒔Y(jié)合鹽脅迫處理重點(diǎn)解析組蛋白H4K5ac和H4K8ac修飾在全基因組的分布變化特征以及組蛋白乙酰轉(zhuǎn)移酶基因GCN5和p300的功能分析。本研究的主要工作包括:1水稻全蛋白組賴氨酸乙�；揎椀亩ㄐ苑治鲭S著蛋白組學(xué)分析技術(shù)的發(fā)展,對于蛋白功能的確定,翻譯后修飾的鑒定以及蛋白結(jié)構(gòu)的分析研究也越來越深入。本研究利用LC-MS/MS技術(shù)在水稻葉片中定性出1353個賴氨酸乙酰化修飾位點(diǎn),涉及866個蛋白,包括了多個新的組蛋白乙�；揎�... 

【文章來源】：揚(yáng)州大學(xué)江蘇省

【文章頁數(shù)】：129 頁

【學(xué)位級別】：博士

【部分圖文】：

圖１．３ｐ３００／ＣＢＰ蛋白的結(jié)構(gòu)域組成［６５］??Ｆｉｇｕｒｅ?１．３?Ｄｏｍａｉｎ?ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ?

長三周的幼苗葉片全蛋白組的乙�；揎椷M(jìn)行定性分析。通過利用泛賴氨酸乙酰化抗體??（ａｎｔｉ－ｐａｎ－Ｋａｃ）對水稻根尖細(xì)胞的蛋白免疫熒光試驗，結(jié)果顯示賴氨酸乙�；贵w在細(xì)胞??核里廣泛分布（圖２．１ａ）。在利用抗體獲得富集多肽后，我們對所有鑒定的多肽質(zhì)量進(jìn)行誤??差分析，發(fā)現(xiàn)整體誤差分布位于０值附近，并且大多數(shù)的峰值小于０．０２Ｄａ?（圖２．１ｂ），說??明質(zhì)譜數(shù)據(jù)質(zhì)量的準(zhǔn)確度可信。此外，大多數(shù)肽段的長度集年在８－２０個氨基酸之間（圖??２．１ｃ），與預(yù)測的胰蛋白酶酶切后片段長度范圍一致，說明多肽樣本制備的質(zhì)量高。定性分??析總計鑒定到８６６個蛋白被乙酰化，包括１３５３個賴氨酸乙�；揎椢稽c(diǎn)，其中多達(dá)５４．３％??的多肽是被乙�；摹榱朔治鲆阴；揎椢稽c(diǎn)在所有鑒定蛋白上的分布情況，我們統(tǒng)計??了每個蛋白上的修飾位點(diǎn)數(shù)目，其中６９％的蛋白（５９４個）只包含了?１個乙酰化修飾位點(diǎn)，??剩余３１％的蛋白包含了?２個或以上的修飾位點(diǎn)（圖２．１ｄ）。我們選擇部分蛋白（Ｈ３、Ｈ４和??Ｑ０ＤＷＺ７）多肽生成質(zhì)譜圖進(jìn)行分析，發(fā)現(xiàn)與最終鑒定得到肽段間的修飾位點(diǎn)是匹配的（圖??２．２）。??

飾抗體的特異性結(jié)合。我們檢測了挑選的４組多肽經(jīng)過酶聯(lián)免疫后的４５０ｎｍ處的吸光度??〇Ｄ４５Ｑ值，與陰性對照的吸光值相比，不同多肽濃度反應(yīng)結(jié)果顯示試驗組／對照組的值均大??于２．１，認(rèn)為試驗結(jié)果為陽性（圖２．３ｂ）。結(jié)果表明使用的賴氨酸乙�；揎椀姆嚎贵w能夠??特異結(jié)合多肽上的乙酰基團(tuán)，同時也驗證通過質(zhì)譜定性鑒定出的乙�；亩我彩强尚诺摹�??（ａ）?Ｐｒｏｔｅｉｎ?Ｐｅｐｔｉｄｅ?Ｓｅｑｕｅｎｃｅ???Ｑ６Ｈ６Ｃ７?ＣＰＴＭ－１６１?ＧＶＴＰ－（ａｃｅｔｙｌ）Ｋ－ＹＳＬＫ???ＣＣＴＭ－１６１?ＧＶＴＰＫＹＳＬＫ???Ｑ９ＬＧＨ８?ＣＰＴＭ－１６３?ＩＹＩＦ－（ａｃｅｔｙｌ）Ｋ－ＶＬＫ???ＣＣＴＭ－１６３?ＩＹＩＦＫＶＬＫ???Ｑ９ＬＧＨ８?ＣＰＴＭ－１６４?ＬＶＬＰＧＥＬＡ－（ａｃｅｔｙｌ

【參考文獻(xiàn)】：
博士論文
[1]擬南芥組蛋白去乙�；富蚣易宸治黾癆tSRT2在鹽脅迫下調(diào)控種子萌發(fā)的分子機(jī)制[D]. 鐘理.中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院 2015
[2]組蛋白乙�；瘜λ净ㄆ凇⒒虮磉_(dá)以及雜種優(yōu)勢的表觀調(diào)控機(jī)制[D]. 李晨.華中農(nóng)業(yè)大學(xué) 2011
[3]水稻組蛋白去乙�；富虻姆蛛x和功能鑒定[D]. 黃利民.華中農(nóng)業(yè)大學(xué) 2008



本文編號：2919862