瘤毛獐牙菜Swertia pseudochinensis Hara為龍膽科獐牙菜屬植物,是重要的蒙藥,具有清濕熱、健胃的功效。商品主要來自野生,由于野生資源的急劇減少,已無法滿足市場需求。植物組織培養(yǎng)已廣泛用于藥用植物的快繁,并為中藥資源的可持續(xù)利用提供了確實可行的途徑。開展瘤毛獐牙菜組培快繁及相關(guān)技術(shù)能有效解決該藥材資源短缺的問題。環(huán)境變量是影響瘤毛獐牙菜分布的重要因素,對其產(chǎn)地關(guān)鍵環(huán)境因子進(jìn)行分析有助于瘤毛獐牙菜的栽培引種工作。為此,本課題采用隨機(jī)森林回歸分析,得到影響瘤毛獐牙菜分布的環(huán)境變量主要為年降水量,其次為年均溫,表明濕度和溫度是瘤毛獐牙菜生長發(fā)育的重要條件。植物組培苗快繁體系的建立,首要條件是消毒。瘤毛獐牙菜以成熟種子為外植體建立快繁體系時,其消毒條件是用70%的84消毒液消毒3 min;然后以MS為基本培養(yǎng)基,在溫度為(25±1)℃、光照強(qiáng)度為1500 lx、光照時間為12h/d的條件下培養(yǎng)30 d,即可獲得無菌苗。通過對瘤毛獐牙菜脫分化以及再分化條件的篩選,最終結(jié)果表明:不同外植體對愈傷組織的誘導(dǎo)效果差異顯著。嫩莖的誘導(dǎo)效果較好,其出愈時間早,誘導(dǎo)率高。光照培養(yǎng)下,最適誘導(dǎo)培養(yǎng)基為MS+2.0 mg/L 2,4-D+0.3 mg/L ZT+1.0mg/L 6-BA;黑暗條件下,最適誘導(dǎo)培養(yǎng)基為MS+1.0 mg/L 2,4-D+0.5 mg/L6-BA+0.3 mg/L ZT。瘤毛獐牙菜愈傷組織最適增殖培養(yǎng)基為MS+1.0 mg/L 6-BA+0.3 mg/L NAA;最適分化培養(yǎng)基為MS+0.1 mg/L NAA+1.0 mg/L 6-BA。通過對瘤毛獐牙菜組培過程中出現(xiàn)的不同愈傷組織生理生化特征進(jìn)行比較發(fā)現(xiàn):胚性愈傷組織中的蛋白質(zhì)含量與可溶性糖含量分別為41.11mg/g、15.91mg/g,均顯著高于非胚性愈傷組織中所含有的量;CAT活性為顯著高于非胚性愈傷組織;SOD含量低于非胚性愈傷組織,但未達(dá)到顯著,POD含量顯著低于非胚性愈傷組織。表明胚性愈傷組織分生快,組織代謝旺盛,有利于再分化的發(fā)生。通過對瘤毛獐牙菜體細(xì)胞胚胎發(fā)生過程中生理生化變化的研究發(fā)現(xiàn):可溶性糖含量的變化為先降低后升高再降低;可溶性蛋白含量的變化為28-35 d時急劇升高,其余時間相對平穩(wěn);SOD活性和POD活性總體呈上升趨勢;PPO活性先降低然后升高。表明體細(xì)胞胚胎發(fā)生過程中,各生理生化指標(biāo)在愈傷組織不同階段其含量和活性發(fā)生相應(yīng)變化,為后期愈傷組織的再分化以及組培苗培養(yǎng)條件的優(yōu)化奠定重要的理論基礎(chǔ)。通過對瘤毛獐牙菜愈傷組織及再生植株中主要藥效成分進(jìn)行初步測定,結(jié)果發(fā)現(xiàn):原植物中獐牙菜苷含量為0.028%,獐牙菜苦苷含量為0.68%;愈傷組織與組培苗中含量均較低,表明不同材料中的藥效成分尚存在差異,引起差異的原因有待作進(jìn)一步的研究。綜上,通過對瘤毛獐牙菜組培快繁中相關(guān)生理生化變化的研究,為下一步建立瘤毛獐牙菜組培快繁體系奠定了科學(xué)的基礎(chǔ)。
【學(xué)位單位】：成都中醫(yī)藥大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位年份】：2018
【中圖分類】：S567.219
【部分圖文】：

圖 1.1 瘤毛獐牙菜區(qū)域分布圖Fig.1.1Regional distribution map of Swertia pseudochinensis Hara

圖 1.1 瘤毛獐牙菜區(qū)域分布圖Fig.1.1Regional distribution map of Swertia pseudochinensis Hara

成都中醫(yī)藥大學(xué) 2018 屆碩士研究生畢業(yè)論文重要系數(shù)為 22.5，海拔其次，重要系數(shù)為 15，仍以年日照時數(shù)重要性最低，重要系數(shù)僅 10。以置換檢驗的標(biāo)準(zhǔn)誤差（Standard Errors）為評價標(biāo)準(zhǔn)，仍以年降水量重要性最高，重要系數(shù)為 0.015，以年日照時數(shù)重要性最低，重要系數(shù)僅 0.008。綜上，各環(huán)境因子對瘤毛獐牙菜的影響程度依次可能為年降水量>年均溫>海拔>無霜期>年日照時數(shù)。
【參考文獻(xiàn)】

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本文編號：2837331