弱毒株交叉保護作用是防治植物病毒病的重要手段。如何獲得有效弱毒株是交叉保護作用的關(guān)鍵因素。本研究通過對馬鈴薯Y病毒屬病毒(強、弱毒株)的全長及部分氨基酸序列比對分析,篩選出在親本強毒株P(guān)RSV-LM的P1和HC-Pro基因上的8個可能與致病性相關(guān)的氨基酸突變位點(1309、K481、K598、R728、F753、L754、N787和D944)。采用定點突變技術(shù)和Gibson拼接法,分別構(gòu)建了 4種含有2個突變位點(L754和N787)、4個突變位點(I309、K481、F753和D944)、6個突變位點(1309、K481、F753、L754、N787 和 D944)和 8 個突變位點(1309、K481、K598、R728、F753、L754、N787 和 D944)的 PRSV-LM 全長 cDNA 克隆突變體:pGprsvm2、pGprsvm4、pGprsvm6和pGprsvm8。并在強毒株pPRSV-LM的HC-Pro和CP基因之間插入gfp基因,構(gòu)建含gfp基因的強毒株pPRSV-LM-GFP/CP。構(gòu)建的5種PRSV-LM全長cDNA克隆經(jīng)人工接種、病癥觀察和RT-PCR檢測...

【文章頁數(shù)】：64 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【部分圖文】：

圖133個馬鈴擠Y病毒屬病毒在8個候選突變位點的氮簽成序列比對圈

毒：８個候選位點在ＰＲＳＶ－ＬＭ上對應(yīng)的氨基酸位點為第３０９位異寫氨酸（Ｉ）、第４８１位賴??氨酸（Ｋ）、第５９８位賴氨酸（Ｋ）、第７２８位精氨酸（Ｒ）、第７５３位苯丙氨酸（Ｆ）、第乃４??位亮氨酸（Ｌ）、第７８７位天冬醜胺（Ｎ）、第９４４位天冬氨酸（Ｄ）；弱毒株；夏威夷ＰＲＳＶ....

圖2構(gòu)建亞克隆pMD-MI-3,pMD-M4-6和pMD-MI-6的PCR擴增電泳圖

Ｍｌ：?ＤＮＡ?ｍａｒｋｅｒ?ＤＬ?２０００；?Ｍ２：?ＤＮＡ?ｍａｒｋｅｒ?ＤＬ?１５０００??Ｆｉｇ?２?ＰＣＲ?ａｍｐｌｉｆｉｃａｔｉｏｎ?ｏｆ?化６?ｆｒａｇｍｅｎｔｓ?ａｐｐｌｉｅｄ?化?ｃｌｏｎｉｎｇ?ｃｏｎｓ化ｕｃｔｉｏｎｓ?ｏｆ?ｐＭＤ－ＩＶｎ－３，??ｐＭＤ－Ｍ....

圖９強巧株ｐＰＲＳＶ－ＬＭ間巧２０天攻巧后的癥狀圖??保護病毒與攻擊病壽接種的間隔時間為２０天

Ｈ組弱毒突變體ｐＧｐｒｓｖｍ４、ｐＧｐｒｓｖｍ６和ｐＧｐｒｓｖｍＳ分別保護接種非轉(zhuǎn)基因番??木瓜苗２０天后，用強毒株ｐＰ民ＳＶ－ＬＭ二次接種，進斤攻毒。非轉(zhuǎn)基因番木瓜苗攻??毒后０天、１４天、２１天、３０天、５０天的癥狀表現(xiàn)見圖９，攻毒后的番木瓜苗均有??較輕微的葉片黃化發(fā)生，接....

圖１３強毒株ｐＰＲＳＶ－ＬＭ－ＧＦＰ／ＣＰ間巧１０天攻毒后的癥狀圖??ｐＰＲＳＶ－ＬＭ－ＧＦＰ／ＣＰ在保護接種后１０天進行攻毒

兩組弱毒突變體ｐＧｐｒｓｖｍ６和ｐＧｐｒｓｖｍＳ分別接種非轉(zhuǎn)基因番木瓜苗１０天后，??用強毒株ｐＰＲＳＶ－ＬＭ－ＧＦＰ／ＣＰ二次接種，進行攻毒。兩個實驗組在攻毒后０天、１４??天、２１天、３０天、５０天的癥狀表現(xiàn)見圖１３，在兩個實驗組的整個攻毒過程中，后??期均發(fā)生了輕微的葉片黃....

本文編號：4019789