煙草叢頂病(Tobacco bushy top disease,TBTD)是一種毀滅性很大的煙草病害,在我國云南省多個煙區(qū)流行并造成了嚴(yán)重的經(jīng)濟(jì)損失。煙草叢頂病也是我國目前發(fā)現(xiàn)的僅此一例由黃癥病毒科(Luteoviridae)和幽影病毒屬(Umbravirus)病毒復(fù)合侵染引起的病害,并且是植物病毒病害。該病害的病毒復(fù)合體成分復(fù)雜,包含了 5種RNA成分,除了一個尚未定性的病毒RNA之外,其他4種分別是煙草脈扭病毒(Tobacco vein distorting virus,TVDV)、煙草叢頂病毒(Tobacco bushy top virus,TBTV)這兩者為主要致病病毒,以及煙草叢頂病毒衛(wèi)星RNA(Tobacco bushy top virus satellite RNA,TBTV SatRNA)和煙草脈扭病毒伴隨 RNA(Tobacco vein distorting virus associate RNA,TVDVaRNA)。為了研究該病害病原病毒復(fù)合體各組分的傳播特性,增加對該植物病毒的各個RNA組分相互作用關(guān)系的進(jìn)一步理解,本文從以下幾方面進(jìn)行了深入的研究:首次明確了 T...

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【學(xué)位級別】：碩士

【文章目錄】：
中文摘要
Abstract
一、前言
    1.1 煙草叢頂病研究概況
        1.1.1 煙草叢頂病的發(fā)生與分布
        1.1.2 煙草叢頂病的病原物
        1.1.3 煙草叢頂病的分子生物學(xué)特性
    1.2 煙草叢頂病癥狀和傳播途徑
        1.2.1 煙草叢頂病癥狀
        1.2.2 煙草叢頂病的寄主范圍
        1.2.3 煙草叢頂病的傳播特性
    1.3 幽影病毒屬相關(guān)研究進(jìn)展
        1.3.1 幽影病毒屬的基本特性
        1.3.2 幽影病毒屬代表病害及基因組特性
            1.3.2.1 花生叢簇病
            1.3.2.2 胡蘿卜斑駁病毒
    1.4 黃癥病毒科研究進(jìn)展
        1.4.1 馬鈴薯卷葉病毒屬代表病毒及生物學(xué)特性
        1.4.2 馬鈴薯卷葉病毒
        1.4.3 大麥黃矮病毒
    1.5 植物病毒互作機(jī)制的研究
        1.5.1 植物病毒傳播特性
        1.5.2 黃癥病毒科與幽影病毒屬病毒及其衛(wèi)星RNA在傳播中的關(guān)系
    1.6 農(nóng)桿菌介導(dǎo)的病毒侵染性克隆
        1.6.1 農(nóng)桿菌
        1.6.2 農(nóng)桿菌滲濾
    1.7 目的與意義
二、材料與方法
    2.1 材料
        2.1.1 供試材料
        2.1.2 相關(guān)試劑及儀器
        2.1.3 儀器設(shè)備
        2.1.4 溶液配制
    2.2 病毒復(fù)合體組分互作研究
        2.2.1 農(nóng)桿菌浸潤實驗
            2.2.1.1 質(zhì)粒提取
            2.2.1.2 GV3101感受態(tài)細(xì)胞制備
            2.2.1.3 電擊轉(zhuǎn)化GV3101感受態(tài)細(xì)胞
    2.3 TVDV、TBTV、TBTV SatRNA、TVDVaRNA不同組合接種實驗
        2.3.1 單菌落培養(yǎng)
        2.3.2 擴(kuò)大培養(yǎng)
        2.3.3 滲濾Buffer液重懸浮
        2.3.4 農(nóng)桿菌滲濾接種病毒方法
        2.3.5 植物總RNA的提取
        2.3.6 去除基因組DNA
        2.3.7 RT-PCR檢測
        2.3.8 蚜蟲傳播實驗
        2.3.9 提取蚜傳煙樣總RNA
        2.3.10 RT-PCR檢測
    2.4 未定性病毒RNA組分序列鑒定
        2.4.1 制備煙草叢頂病侵染的煙草樣品
        2.4.2 病毒粒體的提純方法:
        2.4.3 未定性病毒RNA組分測序鑒定
            2.4.3.1 RNA質(zhì)檢、定量及純化
            2.4.3.2 建庫
三 結(jié)果與分析
    3.1 煙草叢頂病病原病毒復(fù)合體各個RNA組分的蚜蟲傳播關(guān)系
        3.1.1 農(nóng)桿菌滲濾接種侵染實驗
            3.1.1.1 各種不同侵染組合總RNA RT-PCR驗證
            3.1.1.2 不同侵染組合在本氏煙上的癥狀
        3.1.2 蚜蟲傳播實驗
            3.1.2.1 本氏煙蚜傳烤煙總RNA RT-PCR驗證
            3.1.2.2 不同病毒組合經(jīng)蚜蟲從本氏煙向其他烤煙傳播后植株癥狀
            3.1.2.3 不同病毒組合經(jīng)蚜蟲從烤煙向烤煙傳播
    3.2 病毒組分RNA5序列鑒定
        3.2.1 病毒提純
        3.2.2 RNA質(zhì)檢、定量及純化
四 結(jié)論和討論
    4.1 煙草叢頂病病原病毒復(fù)合體各組分不同組合在植物上引起的癥狀
    4.2 煙草叢頂病病原病毒復(fù)合體中各組分的不同組合的蚜蟲傳播特征
    4.3 在煙草上發(fā)現(xiàn)的一種新的呼腸孤病毒
附錄一、英文縮略表
附錄二、候選序列
參考文獻(xiàn)
致謝



本文編號：4014305