小麥藍(lán)矮植原體(Wheat blue dwarf phytoplasma)屬于植原體暫定種16Sr I組(安鳳秋等2006),通過條沙葉蟬(Psammotettix striatus.)傳播,寄生于植物維管束細(xì)胞中。由小麥藍(lán)矮植原體引起的小麥藍(lán)矮病(Wheat blue dwarf disease,WBD),是一種主要發(fā)生在我國西北地區(qū)的重要病害,會(huì)引起小麥產(chǎn)生黃化、矮縮等癥狀,進(jìn)而造成減產(chǎn)甚至絕產(chǎn),嚴(yán)重威脅著我國小麥生產(chǎn)。本實(shí)驗(yàn)室前期研究發(fā)現(xiàn)WBD植原體可以編碼37個(gè)分泌蛋白,通過瞬時(shí)表達(dá)篩選出可以引起本氏煙(Nicotiana benthamiana)過敏性壞死的效應(yīng)蛋白SWP11,其對植物防止WBD植原體的增殖和擴(kuò)散具有重要意義。為深入了解SWP11引起寄主植物細(xì)胞壞死的機(jī)理,我們對SWP11進(jìn)行了生物信息學(xué)分析、亞細(xì)胞定位和表達(dá)壞死癥狀的寄主種類鑒定,然后以本氏煙為模式植物,篩選了與SWP11互作的因子,并進(jìn)行了鑒定,取得的主要結(jié)果如下:1.對SWP11蛋白進(jìn)行了生物信息學(xué)分析。明確SWP11基因全長為375bp,編碼氨基酸125個(gè)。SWP11蛋白不穩(wěn)定系數(shù)50.55,平均疏水...

【文章頁數(shù)】：70 頁

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
ABSTRACT
第一章 文獻(xiàn)綜述
    1.1 植原體研究現(xiàn)狀
        1.1.1 植原體及其發(fā)現(xiàn)
        1.1.2 植原體的傳播與寄主范圍
        1.1.3 植原體的癥狀與危害
        1.1.4 植原體分泌蛋白
    1.2 小麥藍(lán)矮植原體的研究現(xiàn)狀
        1.2.1 小麥藍(lán)矮病及其癥狀與危害
        1.2.2 小麥藍(lán)矮病的病原及傳播特性
        1.2.3 小麥藍(lán)矮病的傳播特性及寄主范圍
        1.2.4 小麥藍(lán)矮植原體基因組
        1.2.5 小麥藍(lán)矮植原體分泌蛋白
        1.2.6 過敏性壞死機(jī)理的研究
    1.3 本研究的目的與意義
第二章 SWP11蛋白的生物信息學(xué)分析
    2.1 實(shí)驗(yàn)材料與方法
    2.2 結(jié)果與分析
        2.2.1 SWP11蛋白的同源性分析
        2.2.2 SWP11蛋白的理化特性
        2.2.3 SWP11蛋白的信號(hào)肽預(yù)測
        2.2.4 SWP11蛋白的親水性分析
        2.2.5 SWP11蛋白的二級(jí)結(jié)構(gòu)、三級(jí)結(jié)構(gòu)
        2.2.6 SWP11蛋白跨膜結(jié)構(gòu)分析和亞細(xì)胞定位預(yù)測
    2.3 討論
第三章 SWP11蛋白的亞細(xì)胞定位與表達(dá)寄主種類鑒定
    3.1 實(shí)驗(yàn)材料與試劑
        3.1.1 植物材料
        3.1.2 菌株和質(zhì)粒
    3.2 SWP11蛋白的亞細(xì)胞定位
        3.2.1 SWP11基因的克隆
        3.2.2 亞細(xì)胞定位載體的構(gòu)建
        3.2.3 SWP11蛋白的亞細(xì)胞定位
        3.2.4 確定SWP11蛋白的亞細(xì)胞定位與誘導(dǎo)植物細(xì)胞壞死的關(guān)系
    3.3 SWP11誘導(dǎo)壞死癥狀產(chǎn)生的寄主種類鑒定
    3.4 結(jié)果與分析
        3.4.1 SWP11基因的擴(kuò)增
        3.4.2 SWP11蛋白的亞細(xì)胞定位及其與誘導(dǎo)植物細(xì)胞壞死的關(guān)系
        3.4.3 SWP11蛋白誘導(dǎo)壞死癥狀產(chǎn)生的寄主種類鑒定
    3.5 討論
第四章 篩選本氏煙中與SWP11互作的靶標(biāo)蛋白
    4.1 實(shí)驗(yàn)材料與試劑
        4.1.1 菌株和質(zhì)粒、載體
        4.1.2 實(shí)驗(yàn)試劑
    4.2 AP-SWATH篩選本氏煙中與SWP11 互作的蛋白
        4.2.1 農(nóng)桿菌介導(dǎo)的瞬時(shí)表達(dá)和樣品送出
        4.2.2 AP-SWATH結(jié)果分析
    4.3 分裂泛素酵母雙雜交膜系統(tǒng)篩選本氏煙中與SWP11互作的蛋白
        4.3.1 誘餌載體的構(gòu)建
        4.3.2 宿主菌株功能驗(yàn)證
        4.3.3 誘餌載體選擇
        4.3.4 3-AT篩選濃度的確定
        4.3.5 本氏煙文庫篩選互作靶標(biāo)
    4.4 結(jié)果與分析
        4.4.1 AP-SWATH結(jié)果分析
        4.4.2 誘餌載體的構(gòu)建
        4.4.3 宿主菌株功能驗(yàn)證
        4.4.4 誘餌載體選擇驗(yàn)證和3-AT篩選濃度的確定
        4.4.5 轉(zhuǎn)化效率的計(jì)算
        4.4.6 陽性克隆的篩選
    4.5 討論
第五章 SWP11與NbPrx03、NbPrx63 的互作研究
    5.1 實(shí)驗(yàn)材料與試劑
        5.1.1 菌株和質(zhì)粒、載體
        5.1.2 實(shí)驗(yàn)試劑
    5.2 實(shí)驗(yàn)方法
        5.2.1 序列分析和生物信息學(xué)分析
        5.2.2 基因擴(kuò)增與載體構(gòu)建
        5.2.3 酵母雙雜交驗(yàn)證
    5.3 結(jié)果與分析
        5.3.1 同源性分析與分類
        5.3.2 生物信息學(xué)分析
        5.3.3 酵母雙雜交驗(yàn)證
    5.4 討論
第六章 結(jié)論與展望
    6.1 結(jié)論
    6.2 展望
參考文獻(xiàn)
附錄
致謝
個(gè)人簡歷



本文編號(hào)：3986216