小麥藍矮植原體(Wheat blue dwarf phytoplasma)屬于植原體暫定種16Sr I組(安鳳秋等2006),通過條沙葉蟬(Psammotettix striatus.)傳播,寄生于植物維管束細胞中。由小麥藍矮植原體引起的小麥藍矮病(Wheat blue dwarf disease,WBD),是一種主要發(fā)生在我國西北地區(qū)的重要病害,會引起小麥產(chǎn)生黃化、矮縮等癥狀,進而造成減產(chǎn)甚至絕產(chǎn),嚴重威脅著我國小麥生產(chǎn)。本實驗室前期研究發(fā)現(xiàn)WBD植原體可以編碼37個分泌蛋白,通過瞬時表達篩選出可以引起本氏煙(Nicotiana benthamiana)過敏性壞死的效應(yīng)蛋白SWP11,其對植物防止WBD植原體的增殖和擴散具有重要意義。為深入了解SWP11引起寄主植物細胞壞死的機理,我們對SWP11進行了生物信息學分析、亞細胞定位和表達壞死癥狀的寄主種類鑒定,然后以本氏煙為模式植物,篩選了與SWP11互作的因子,并進行了鑒定,取得的主要結(jié)果如下:1.對SWP11蛋白進行了生物信息學分析。明確SWP11基因全長為375bp,編碼氨基酸125個。SWP11蛋白不穩(wěn)定系數(shù)50.55,平均疏水...

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【學位級別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
ABSTRACT
第一章 文獻綜述
    1.1 植原體研究現(xiàn)狀
        1.1.1 植原體及其發(fā)現(xiàn)
        1.1.2 植原體的傳播與寄主范圍
        1.1.3 植原體的癥狀與危害
        1.1.4 植原體分泌蛋白
    1.2 小麥藍矮植原體的研究現(xiàn)狀
        1.2.1 小麥藍矮病及其癥狀與危害
        1.2.2 小麥藍矮病的病原及傳播特性
        1.2.3 小麥藍矮病的傳播特性及寄主范圍
        1.2.4 小麥藍矮植原體基因組
        1.2.5 小麥藍矮植原體分泌蛋白
        1.2.6 過敏性壞死機理的研究
    1.3 本研究的目的與意義
第二章 SWP11蛋白的生物信息學分析
    2.1 實驗材料與方法
    2.2 結(jié)果與分析
        2.2.1 SWP11蛋白的同源性分析
        2.2.2 SWP11蛋白的理化特性
        2.2.3 SWP11蛋白的信號肽預(yù)測
        2.2.4 SWP11蛋白的親水性分析
        2.2.5 SWP11蛋白的二級結(jié)構(gòu)、三級結(jié)構(gòu)
        2.2.6 SWP11蛋白跨膜結(jié)構(gòu)分析和亞細胞定位預(yù)測
    2.3 討論
第三章 SWP11蛋白的亞細胞定位與表達寄主種類鑒定
    3.1 實驗材料與試劑
        3.1.1 植物材料
        3.1.2 菌株和質(zhì)粒
    3.2 SWP11蛋白的亞細胞定位
        3.2.1 SWP11基因的克隆
        3.2.2 亞細胞定位載體的構(gòu)建
        3.2.3 SWP11蛋白的亞細胞定位
        3.2.4 確定SWP11蛋白的亞細胞定位與誘導植物細胞壞死的關(guān)系
    3.3 SWP11誘導壞死癥狀產(chǎn)生的寄主種類鑒定
    3.4 結(jié)果與分析
        3.4.1 SWP11基因的擴增
        3.4.2 SWP11蛋白的亞細胞定位及其與誘導植物細胞壞死的關(guān)系
        3.4.3 SWP11蛋白誘導壞死癥狀產(chǎn)生的寄主種類鑒定
    3.5 討論
第四章 篩選本氏煙中與SWP11互作的靶標蛋白
    4.1 實驗材料與試劑
        4.1.1 菌株和質(zhì)粒、載體
        4.1.2 實驗試劑
    4.2 AP-SWATH篩選本氏煙中與SWP11 互作的蛋白
        4.2.1 農(nóng)桿菌介導的瞬時表達和樣品送出
        4.2.2 AP-SWATH結(jié)果分析
    4.3 分裂泛素酵母雙雜交膜系統(tǒng)篩選本氏煙中與SWP11互作的蛋白
        4.3.1 誘餌載體的構(gòu)建
        4.3.2 宿主菌株功能驗證
        4.3.3 誘餌載體選擇
        4.3.4 3-AT篩選濃度的確定
        4.3.5 本氏煙文庫篩選互作靶標
    4.4 結(jié)果與分析
        4.4.1 AP-SWATH結(jié)果分析
        4.4.2 誘餌載體的構(gòu)建
        4.4.3 宿主菌株功能驗證
        4.4.4 誘餌載體選擇驗證和3-AT篩選濃度的確定
        4.4.5 轉(zhuǎn)化效率的計算
        4.4.6 陽性克隆的篩選
    4.5 討論
第五章 SWP11與NbPrx03、NbPrx63 的互作研究
    5.1 實驗材料與試劑
        5.1.1 菌株和質(zhì)粒、載體
        5.1.2 實驗試劑
    5.2 實驗方法
        5.2.1 序列分析和生物信息學分析
        5.2.2 基因擴增與載體構(gòu)建
        5.2.3 酵母雙雜交驗證
    5.3 結(jié)果與分析
        5.3.1 同源性分析與分類
        5.3.2 生物信息學分析
        5.3.3 酵母雙雜交驗證
    5.4 討論
第六章 結(jié)論與展望
    6.1 結(jié)論
    6.2 展望
參考文獻
附錄
致謝
個人簡歷



本文編號：3986216