【目的】棉花黃萎病是由土壤傳播的植物維管束真菌病害,導(dǎo)致每年棉花產(chǎn)量和品質(zhì)的嚴(yán)重?fù)p失。本研究通過鑒定抗病基因,研究抗病機(jī)制,為棉花多抗種質(zhì)資源創(chuàng)新提供理論基礎(chǔ)。【方法】利用酵母單雜交(Yeast one hybrid)篩選到1個(gè)Gh Lac1上游的調(diào)節(jié)因子,并通過構(gòu)建系統(tǒng)進(jìn)化樹、氨基酸序列多重比對、定量逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈反應(yīng)(Reverse transcription-quantitative polymerase chain reaction, RT-qPCR)、煙草瞬時(shí)轉(zhuǎn)化、雙熒光素酶檢測系統(tǒng)、病毒誘導(dǎo)的基因沉默技術(shù)、棉花遺傳轉(zhuǎn)化技術(shù)等對該轉(zhuǎn)錄因子相關(guān)功能進(jìn)行驗(yàn)證�！窘Y(jié)果】Gh_D12G0544與擬南芥(Arabidopsis thaliana)中At MYB43同源性最高,將其編碼基因命名為GhMYB43。GhMYB43位于陸地棉D(zhuǎn)t亞組第12號染色體上,編碼1個(gè)含376個(gè)氨基酸的蛋白質(zhì),含有2個(gè)MYB結(jié)構(gòu)域;RT-qPCR分析發(fā)現(xiàn)GhMYB43在莖中優(yōu)勢轉(zhuǎn)錄,受水楊酸和過氧化氫誘導(dǎo)上調(diào)表達(dá),而受茉莉酸甲酯誘導(dǎo)下調(diào)表達(dá),轉(zhuǎn)錄水平會受大麗輪枝菌(Verticiliu...

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圖4GhMYB43亞細(xì)胞定位

為了進(jìn)一步鑒定GhMYB43在棉花響應(yīng)黃萎病菌侵染中的功能，構(gòu)建了GhMYB43的VIGS載體，通過特異干涉棉花中GhMYB43基因的表達(dá)考察棉花植株對病原菌抗性的變化。棉花CLA基因參與葉綠素的形成，VIGS抑制CLA的表達(dá)后會造成棉花植株葉片白化（圖7a），因此可作為陽....

圖5GhMYB43棉花原生質(zhì)體中的轉(zhuǎn)錄激活活性的分析

圖4GhMYB43亞細(xì)胞定位2.6GhMYB43是木質(zhì)素合成中的負(fù)調(diào)節(jié)因子

圖6超表達(dá)GhMYB43抑制了轉(zhuǎn)基因材料對黃萎病菌的抗性

在前期研究中，發(fā)現(xiàn)木質(zhì)素代謝在棉花抵御黃萎病菌入侵的過程中發(fā)揮重要作用[21]。而多有文獻(xiàn)報(bào)道，木質(zhì)素代謝主要由NAC、MYB等其他轉(zhuǎn)錄因子調(diào)控。據(jù)此筆者猜測GhMYB43可能也參與調(diào)節(jié)木質(zhì)素合成通路[24-26]。因此，首先對超表達(dá)GhMYB43轉(zhuǎn)基因材料和對照材料（WT）....

圖7VIGS抑制棉花GhMYB43的表達(dá)情況及其對黃萎病菌的抗性鑒定結(jié)果

圖6超表達(dá)GhMYB43抑制了轉(zhuǎn)基因材料對黃萎病菌的抗性圖8超表達(dá)GhMYB43棉花的木質(zhì)素含量情況

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