灰霉病是由半知菌亞門(mén)灰葡萄孢菌(Botrytis cinema)引起的侵染性疾病,已成為近幾年危害最大的病害之一,是我國(guó)蔬菜水果生產(chǎn)地的主要病害。目前還沒(méi)有有效地防治方法,因此尋找出安全有效的生物防治菌株來(lái)防治灰霉病具有重要的意義。實(shí)驗(yàn)室前期分離了六株對(duì)灰霉菌有抑菌效果的菌株J-1、J-2、J-3、J-4、J-5和J-6,本論文通過(guò)抑制菌絲生長(zhǎng)速率法篩選到一株對(duì)灰霉病抑制作用最強(qiáng)的生防菌株J-5。通過(guò)對(duì)該菌株進(jìn)行觀察培養(yǎng)形態(tài)特征、了解其生理生化實(shí)驗(yàn)、16S rDNA編碼序列以及結(jié)合系統(tǒng)發(fā)育樹(shù)的分析最終確定該菌株為枯草芽孢桿菌,該菌的中國(guó)微生物菌種保藏號(hào)為CGMCCNo.11750,16S rDNA GenBank登錄號(hào)為KY357320。首先對(duì)菌株J-5最適培養(yǎng)條件和產(chǎn)抑菌物質(zhì)的最適條件進(jìn)行研究,通過(guò)改變溫度、pH、裝液量和培養(yǎng)時(shí)間確定J-5菌株的最適培養(yǎng)條件和最適產(chǎn)生抑菌物質(zhì)的條件,實(shí)驗(yàn)結(jié)果證明培養(yǎng)條件與產(chǎn)生抑菌物質(zhì)的的條件是相同的,最適溫度為37℃,最適裝液量為50 mL,最適培養(yǎng)時(shí)間為24 h,最適pH值為7。本研究采用抑制菌絲生長(zhǎng)速率法對(duì)菌株J-5發(fā)酵上清液進(jìn)行研究,平板實(shí)驗(yàn)和...

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【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
ABSTRACT
第一章 緒論
    1.1 番茄灰霉病防治研究現(xiàn)狀
        1.1.1 番茄灰霉病概述
        1.1.2 番茄灰霉病的防治研究
    1.2 枯草芽孢桿菌的研究進(jìn)展
        1.2.1 枯草芽孢桿菌的概述
        1.2.2 枯草芽孢桿菌的防病機(jī)制
    1.3 枯草芽孢桿菌產(chǎn)生的脂肽類(lèi)物質(zhì)的概述
        1.3.1 脂肽類(lèi)抗生素的類(lèi)型和結(jié)構(gòu)
        1.3.2 脂肽類(lèi)抗生素的應(yīng)用
    1.4 測(cè)序技術(shù)發(fā)展及應(yīng)用
        1.4.1 第一代測(cè)序技術(shù)
        1.4.2 第二代測(cè)序技術(shù)
        1.4.3 第三代測(cè)序技術(shù)
        1.4.4 基因組測(cè)序在枯草芽孢桿菌中的應(yīng)用
    1.5 本研究的目的和意義
    1.6 技術(shù)路線
第二章 拮抗枯草芽孢桿菌的篩選與鑒定
    2.1 引言
    2.2 實(shí)驗(yàn)材料
        2.2.1 供試菌株
        2.2.2 供試培養(yǎng)基
        2.2.3 實(shí)驗(yàn)儀器
    2.3 實(shí)驗(yàn)方法
        2.3.1 拮抗菌的篩選
        2.3.2 抑菌活性物質(zhì)胞外分泌的鑒定
        2.3.3 菌株的鑒定
            2.3.3.1 培養(yǎng)特征的鑒定
            2.3.3.2 生理生化特征鑒定
            2.3.3.3 分子生物學(xué)特征的鑒定
            2.3.3.4 菌株進(jìn)化發(fā)育樹(shù)的構(gòu)建
    2.4 結(jié)果與分析
        2.4.1 拮抗菌株的篩選
        2.4.2 抑菌活性物質(zhì)胞外分泌的鑒定
        2.4.3 菌株的鑒定
            2.4.3.1 培養(yǎng)特征的鑒定
            2.4.3.2 生理生化特征鑒定
            2.4.3.3 分子生物學(xué)特征的鑒定
            2.4.3.4 系統(tǒng)發(fā)育樹(shù)的構(gòu)建
    2.5 小結(jié)
第三章 枯草芽孢桿菌J-5的培養(yǎng)條件及上清液的穩(wěn)定性的研究
    3.1 引言
    3.2 實(shí)驗(yàn)材料
        3.2.1 供試菌株
        3.2.2 供試培養(yǎng)基
        3.2.3 上清液的制備
        3.2.4 蛋白酶的制備
    3.3 實(shí)驗(yàn)方法
        3.3.1 培養(yǎng)條件對(duì)菌的生長(zhǎng)以及抑菌活性的影響
            3.3.1.1 培養(yǎng)時(shí)間對(duì)菌的生長(zhǎng)和抗菌物質(zhì)生成的影響
            3.3.1.2 培養(yǎng)溫度對(duì)菌的生長(zhǎng)和抗菌物質(zhì)生成的影響
            3.3.1.3 裝液量對(duì)菌的生長(zhǎng)和抗菌物質(zhì)生成的影響
            3.3.1.4 pH對(duì)菌的生長(zhǎng)和抗菌物質(zhì)生成的影響
        3.3.2 上清液中抗菌物質(zhì)的穩(wěn)定性
            3.3.2.1 抗菌物質(zhì)對(duì)溫度的穩(wěn)定性
            3.3.2.2 抗菌物質(zhì)對(duì)酸堿的穩(wěn)定性
            3.3.2.3 抗菌物質(zhì)對(duì)紫外的穩(wěn)定性
            3.3.2.4 抗菌物質(zhì)對(duì)蛋白酶的穩(wěn)定性
            3.3.2.5 抗菌物質(zhì)的儲(chǔ)存穩(wěn)定性
    3.4 結(jié)果與分析
        3.4.1 培養(yǎng)條件對(duì)菌的生長(zhǎng)以及抑菌活性的影響
            3.4.1.1 培養(yǎng)時(shí)間對(duì)菌的生長(zhǎng)和抗菌物質(zhì)生成的影響
            3.4.1.2 培養(yǎng)溫度對(duì)菌的生長(zhǎng)和抗菌物質(zhì)生成的影響
            3.4.1.3 裝液量對(duì)菌的生長(zhǎng)和抗菌物質(zhì)生成的影響
            3.4.1.4 pH對(duì)菌的生長(zhǎng)和抗菌物質(zhì)生成的影響
        3.4.2 上清液中抗菌物質(zhì)的穩(wěn)定性
            3.4.2.1 抗菌物質(zhì)對(duì)溫度的穩(wěn)定性
            3.4.2.2 抗菌物質(zhì)對(duì)酸堿的穩(wěn)定性
            3.4.2.3 抗菌物質(zhì)對(duì)紫外不同時(shí)間處理的穩(wěn)定性
            3.4.2.4 抗菌物質(zhì)對(duì)蛋白酶的穩(wěn)定性
            3.4.2.5 抗菌物質(zhì)的儲(chǔ)存穩(wěn)定性
    3.5 小結(jié)
第四章 上清液及揮發(fā)性物質(zhì)抑菌活性測(cè)定
    4.1 引言
    4.2 實(shí)驗(yàn)材料
        4.2.1 供試菌株
        4.2.2 供試培養(yǎng)基
        4.2.3 上清液的制備
    4.3 實(shí)驗(yàn)方法
        4.3.1 上清液對(duì)離體葉片的抑菌效果
        4.3.2 上清液對(duì)離體果實(shí)的抑菌效果
        4.3.3 揮發(fā)性物質(zhì)對(duì)灰霉菌平板的抑菌效果
        4.3.4 揮發(fā)性物質(zhì)對(duì)離體葉片的抑菌效果
    4.4 實(shí)驗(yàn)結(jié)果
        4.4.1 上清液對(duì)離體葉片的抑菌效果
        4.4.2 上清液對(duì)離體果實(shí)的抑菌效果
        4.4.3 揮發(fā)性物質(zhì)對(duì)灰霉菌平板的抑菌效果
        4.4.4 揮發(fā)性物質(zhì)對(duì)離體葉片的抑菌效果
    4.5 小結(jié)
第五章 脂肽類(lèi)抑菌物質(zhì)的提取、分離與抗生素合成基因的檢測(cè)
    5.1 引言
    5.2 實(shí)驗(yàn)材料
        5.2.1 供試菌株
        5.2.2 供試培養(yǎng)基
        5.2.3 上清液的制備
    5.3 實(shí)驗(yàn)方法
        5.3.1 抗生素合成基因的檢測(cè)
        5.3.2 脂肽類(lèi)物質(zhì)的提取
        5.3.3 脂肽類(lèi)物質(zhì)的分離
        5.3.4 純化組分的抑菌活性測(cè)定
    5.4 實(shí)驗(yàn)結(jié)果
        5.4.1 抗生素合成基因的檢測(cè)
        5.4.2 脂肽類(lèi)物質(zhì)的提取
        5.4.3 脂肽類(lèi)物質(zhì)的分離
        5.3.4 純化組分的抑菌活性測(cè)定
    5.5 小結(jié)
第六章 枯草芽孢桿菌J-5全基因組測(cè)序及比較分析
    6.1 引言
    6.2 實(shí)驗(yàn)材料
        6.2.1 供試菌株
        6.2.2 軟件及數(shù)據(jù)庫(kù)
    6.3 實(shí)驗(yàn)方法
        6.3.1 菌株培養(yǎng)
        6.3.2 基因組測(cè)序及分析步驟
    6.4 實(shí)驗(yàn)結(jié)果
        6.4.1 全基因組測(cè)序結(jié)果
        6.4.2 功能基因注釋
    6.5 小結(jié)
第七章 結(jié)論與展望
    7.1 結(jié)論
    7.2 展望
參考文獻(xiàn)
攻讀學(xué)位期間所取得的相關(guān)科研成果
致謝



本文編號(hào)：3931725