大麗輪枝菌(Verticilluium dahliae Kleb.)是能夠引起包括苜蓿和三葉草等豆科牧草以及重要經(jīng)濟(jì)作物棉花在內(nèi)諸多植物黃萎病的兼性寄主植物病原真菌,難以防治,在世界范圍內(nèi)均造成重大經(jīng)濟(jì)損失。近年來,隨著大麗輪枝菌基因組數(shù)據(jù)的公布以及尋求黃萎病防治方法的迫切性。大量潛在的致病相關(guān)基因得到了科學(xué)家和研究人員的關(guān)注并展開研究。本論文研究了一個可能與大麗輪枝菌致病性相關(guān)的第VII類含有肌動蛋白頭結(jié)構(gòu)域(MMD)的幾丁質(zhì)合成酶基因VdCHS7(VDAG-00419)。利用以同源重組為原理的基因敲除法,使VdCHS7的基因組上下游DNA片段之間連接潮霉素抗性基因,再將VdCHS7的同源重組DNA片段通過根癌農(nóng)桿菌介導(dǎo)真菌(ATMT法)的方法轉(zhuǎn)入野生型大麗輪枝菌V592中,通過同源區(qū)基因片段的重組,潮霉素抗性基因會替換掉野生型的VdCHS7基因,從而獲得敲除突變菌株ΔVdCHS7。并在便于遺傳分析的模式植物擬南芥上研究其致病性,對野生型擬南芥分別接種V592和突變體菌株ΔVdCHS7,發(fā)現(xiàn)敲除體致病力下降,再次通過相同的技術(shù)手段獲得敲除菌株的功能互補型菌株,接種擬南芥,致病力回補。...

【文章頁數(shù)】：49 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
第一章 引言
    1.1 黃萎病概況
        1.1.1 黃萎病危害
        1.1.2 黃萎病病癥及防治進(jìn)展
    1.2 大麗輪枝菌簡介
        1.2.1 大麗輪枝菌概述
        1.2.2 大麗輪枝菌致病機(jī)理研究進(jìn)展
    1.3 真菌細(xì)胞壁及大麗輪枝菌幾丁質(zhì)合成酶(CHS)
        1.3.1 真菌細(xì)胞壁
        1.3.2 幾丁質(zhì)合成酶分類
        1.3.3 幾丁質(zhì)合成酶的生物學(xué)功能
    1.4 肌球蛋白概述
    1.5 農(nóng)桿菌介導(dǎo)轉(zhuǎn)化絲狀真菌技術(shù)(ATMT)
        1.5.1 農(nóng)桿菌介導(dǎo)的絲狀真菌遺傳轉(zhuǎn)化及其特點
        1.5.2 農(nóng)桿菌介導(dǎo)遺傳轉(zhuǎn)化的機(jī)理
    1.6 本研究的目的與意義
第二章 實驗材料與方法
    2.1 實驗材料
        2.1.1 菌株質(zhì)粒植物材料抗生素引物
        2.1.2 培養(yǎng)基
        2.1.3 常用試劑
        2.1.4 主要儀器
    2.2 實驗方法
        2.2.1 敲除載體的構(gòu)建
        2.2.2 農(nóng)桿菌介導(dǎo)的大麗輪枝菌遺傳轉(zhuǎn)化(ATMT)
        2.2.3 敲除突變菌株的驗證
        2.2.4 Southern印跡雜交
        2.2.5 敲除體生物學(xué)性狀的觀察及測定
        2.2.6 致病性測定 敲除突變體的致病性測定
        2.2.7 互補載體的構(gòu)建及驗證
第三章 結(jié)果與分析
    3.1 敲除突變體載體構(gòu)建以及突變體菌株的獲得
        3.1.1 目的基因上下游的獲得
        3.1.2 敲除突變體的獲得
        3.1.3 T-DNA插入拷貝數(shù)分析
    3.2 互補載體構(gòu)建以及互補
        3.2.1 互補載體構(gòu)建
        3.2.2 互補突變菌株的獲得
    3.3 敲除體和功能互補體的體生物學(xué)性狀的觀察與測定
        3.3.1 菌落生長速度測定
        3.3.2 孢子和菌絲形態(tài)
        3.3.3 菌落孢子大小測定
        3.3.4 孢子萌發(fā)速率
    3.4 敲除菌株與互補菌株致病性測定比較
結(jié)論
參考文獻(xiàn)
個人簡介
導(dǎo)師簡介
致謝



本文編號：3910806