玉米(Zea mays L.)是世界上重要的糧食作物、飼料原料和能源作物。隨著生物技術(shù)的發(fā)展,通過轉(zhuǎn)基因方法培育抗蟲抗除草劑玉米新品種是解決蟲害和雜草問題和保障玉米產(chǎn)量的有效方法。本實(shí)驗(yàn)室以前獲得了抗蟲耐除草劑玉米轉(zhuǎn)化體ZD12-6。該轉(zhuǎn)化體是將Bt融合基因Cry1Ab/Cry2Aj和抗草甘膦基因G10evo-epsps構(gòu)建在一個(gè)T-DNA中并通過農(nóng)桿菌介導(dǎo)轉(zhuǎn)化獲得。與單個(gè)Bt蛋白相比,融合蛋白Cry1Ab/Cry2Aj可以擴(kuò)大殺蟲譜并減緩害蟲抗性的發(fā)生和發(fā)展,有利于轉(zhuǎn)基因玉米品種的長期使用。本研究對(duì)ZD12-6進(jìn)行了 Southern分析,結(jié)果表明ZD12-6是外源T-DNA單拷貝插入的轉(zhuǎn)化體。本研究進(jìn)一步通過TailPCR確定了插入位點(diǎn)的旁側(cè)DNA序列,并建立了 ZD12-6轉(zhuǎn)化體的PCR特異性檢測方法。這個(gè)方法為今后轉(zhuǎn)基因玉米的身份驗(yàn)證和監(jiān)控通過了技術(shù)保障。本研究檢測分析了抗蟲抗除草劑玉米ZD12-6的遺傳穩(wěn)定性及抗蟲抗除草劑的性能。通過PCR、Western blot和ELISA等方法對(duì)ZD12-6不同代次材料進(jìn)行檢測分析,結(jié)果顯示ZD12-6中的外源目標(biāo)基因在DNA水平和蛋白...

【文章頁數(shù)】：66 頁

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【部分圖文】：

圖１．３?Ｃｒｙ毒素作用機(jī)制：孔洞模型（Ｂｒａｖｏ?ｅｔａｌ．，２０１２）??Ｆｉｇｕｒｅ?１．３?Ｍｏｄｅ?ｏｆ?ａｃｔｉｏｎ?Ｃｒｙ?ｔｏｘｉｎｓ?ａｔ?ｔｈｅ?ｍｏｌｅｃｕｌａｒ?ｌｅｖｅｌ（Ｂｒａｖｏ?ｅｔ?ａｌ．，２０１２）??

膜上Ｇ蛋白亞基和腺苷酸環(huán)化酶（Ａｄｅｎｙｌａｔｅ?ｃｙｃｌａｓｅ，ＡＣ），使環(huán)磷酸腺苷（ｃＡＭＰ）水平提高，??進(jìn)一步激活蛋白激酶Ａ（Ｐｒｏｔｅｉｎ?ｋｉｎａｓｅｓ?Ａ，ＰＫＡ），ＰＫＡ調(diào)控細(xì)胞凋亡相關(guān)基因表達(dá)，導(dǎo)致細(xì)??胞膜離子通道紊亂離子外流和細(xì)胞骨架的重組，最終細(xì)胞死亡凋亡....

圖１．４?Ｃｒｙ毒素作用機(jī)制：信號(hào)傳導(dǎo)模型（Ｚｈａｎｇ?ｅｔ?ａｌ．，２００６）??Ｆｉｇｕｒｅ?１．４?Ｍｅｃｈａｎｉｓｍ?ｏｆ?Ｃｒｙ?ｔｏｘｉｎｓ：?Ｓｉｇｎａｌｉｎｇ?ｐａｔｈｗａｙ?ｍｏｄｅｌ?（Ｚｈａｎｇ?ｅｔ?ａｌ．，２００６）??

ＡＶ／?＝?２６７？Ｍ?ＡＪ－Ｉ０１？Ｍ?ＡＶ／＾．ＳｎＭ?ＡＶ／＝?０．６?ｎＭ??圖１．３?Ｃｒｙ毒素作用機(jī)制：孔洞模型（Ｂｒａｖｏ?ｅｔａｌ．，２０１２）??Ｆｉｇｕｒｅ?１．３?Ｍｏｄｅ?ｏｆ?ａｃｔｉｏｎ?Ｃｒｙ?ｔｏｘｉｎｓ?ａｔ?ｔｈｅ?ｍｏｌｅｃｕｌａｒ?ｌｅｖｅ....

圖２．２．插入序列功能區(qū)域結(jié)構(gòu)圖??

２．１．１楦物材料??供試玉米：本試驗(yàn)的轉(zhuǎn)基因玉米為轉(zhuǎn)化體“ＺＤ?１２－６”通過雜交和回交轉(zhuǎn)育到“鄭５８”自??交系后的第四第五第六代，如圖２．１。該轉(zhuǎn)化體是導(dǎo)入Ｇ／０ｅｖｏ－ｅ；ｗ；ｗ基因和ＯｙＬ＾／〇７２４／??融合基因的抗蟲耐草甘膦轉(zhuǎn)基因玉米，插入序列全長約ｌ〇．８ｋｂ，其....

圖３．１不同代次的轉(zhuǎn)基因玉米外源基因的ＰＣＲ鑒定??

檢測目的基因以６／０＾２４／和Ｇ川的整合情況，結(jié)果顯示在Ｔ４－Ｔ６代的不同植株中均檢??測到與預(yù)期大小一致的ＤＮＡ片段，Ｇ川基因擴(kuò)增到的片段大小為８００ｂｐ，Ｃ〇＾Ｚ）／〇７２４／??基因擴(kuò)增到的片段大小為１５００ｂｐ?（圖３．１）。由此說明插入的外源基因在不同代次的轉(zhuǎn)基??因植....

本文編號(hào)：3903204