實(shí)驗(yàn)動(dòng)物與人類醫(yī)學(xué)發(fā)展息息相關(guān),豚鼠作為實(shí)驗(yàn)動(dòng)物,在人類醫(yī)學(xué)研究中起重要作用,UGT1A1、UGT1A3和UGT1A8是人類疾病相關(guān)的重要基因。本研究以豚鼠實(shí)驗(yàn)材料,通過RT-PCR方法克隆了豚鼠的UGT1A1基因(GenBank登錄號(hào):KT160222)、UGT1A3基因(GenBank登錄號(hào):KT160224)和UGT1A8基因(GenBank登錄號(hào):KT160223),并在此基礎(chǔ)上,依據(jù)生物信息學(xué)工具分析了三個(gè)基因的核苷酸及氨基酸序列特性。利用實(shí)時(shí)熒光定量PCR分析,對(duì)這三個(gè)基因在豚鼠不同組織部位的表達(dá)情況進(jìn)行了分析。主要實(shí)驗(yàn)結(jié)果如下:1.UDP-葡萄糖醛酸轉(zhuǎn)移酶1家族多肽A1(UDP glucuronosyltransferase 1family,polypeptide A1,UGT1A1)是重要的人類疾病相關(guān)基因,本研究采用RT-PCR的方法獲得UGT1A1基因cDNA序列全長,該基因開放閱讀框全長為1602bp,編碼533個(gè)氨基酸,該基因編碼蛋白與Degu、達(dá)馬拉鼴鼠、人、北部白頰長臂猿、疣猴、川金絲猴的UGT1A1蛋白分別具有84%、84%、80%、80%、80%、79%...

【文章頁數(shù)】：62 頁

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
ABSTRACT
縮略詞
1 前言
    1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物與人類醫(yī)學(xué)發(fā)展息息相關(guān)
    1.2 豚鼠作為實(shí)驗(yàn)動(dòng)物，在醫(yī)學(xué)研究中起重要作用
    1.3 UGT1A1、UGT1A3和UGT1A8是與人類疾病相關(guān)的重要基因
        1.3.1 UGT1A1基因功能研究進(jìn)展
            1.3.1.1 UGT1A1與黃疸
            1.3.1.2 UGT1A1與Gilbert綜合征
            1.3.1.3 UGT1A1與伊立替康
            1.3.1.4 UGT1A1與小細(xì)胞肺癌
            1.3.1.5 UGT1A1與結(jié)直腸癌
        1.3.2 UGT1A3基因功能研究進(jìn)展
            1.3.2.1 UGT1A3與糖尿病
            1.3.2.2 UGT1A3與癌癥、腫瘤
            1.3.2.3 UGT1A3與黃酮類藥物
        1.3.3 UGT1A8基因功能研究進(jìn)展
            1.3.3.1 UGT1A8與黃酮
            1.3.3.2 UGT1A8與雷洛昔芬
            1.3.3.3 UGT1A8與霉酚酸
            1.3.3.4 UGT1A8與二氫睪酮
    1.4 研究目的及意義
        1.4.1 研究目的
        1.4.2 研究意義
2 材料與方法
    2.1 試驗(yàn)材料
        2.1.1 供試材料
        2.1.2 主要儀器設(shè)備
        2.1.3 主要藥品試劑及試劑盒
    2.2 試驗(yàn)方法
        2.2.1 總RNA的提取與檢測(cè)
        2.2.2 cDNA第一鏈合成
        2.2.3 UGT1A1基因的克隆
        2.2.4 UGT1A3基因的克隆
        2.2.5 UGT1A8基因的克隆
        2.2.6 目的片段的回收及測(cè)序
        2.2.7 基因的序列分析
        2.2.8 UGT1A1、UGT1A3和UGT1A8基因表達(dá)的熒光定量分析
            2.2.8.1 熒光定量PCR引物
            2.2.8.2 實(shí)時(shí)熒光定量PCR
            2.2.8.3 熒光定量PCR數(shù)據(jù)分析
3 結(jié)果與分析
    3.1 豚鼠UGT1A1基因的克隆、序列鑒定結(jié)果
        3.1.1 豚鼠UGT1A1基因編碼區(qū)cDNA序列的克隆
        3.1.2 豚鼠UGT1A1基因的生物信息學(xué)分析
            3.1.2.1 豚鼠UGT1A1基因核苷酸及氨基酸序列分析
            3.1.2.2 豚鼠UGT1A1蛋白序列的多重比對(duì)分析
            3.1.2.3 豚鼠UGT1A1基因進(jìn)化分析
        3.1.3 豚鼠UGT1A1蛋白的跨膜結(jié)構(gòu)分析
        3.1.4 豚鼠UGT1A1基因結(jié)構(gòu)分析
        3.1.5 豚鼠UGT1A1基因組織表達(dá)譜分析
    3.2 豚鼠UGT1A3基因的克隆、序列鑒定結(jié)果
        3.2.1 豚鼠UGT1A3基因編碼區(qū)cDNA序列的克隆
        3.2.2 豚鼠UGT1A3基因的生物信息學(xué)分析
            3.2.2.1 豚鼠UGT1A3基因核苷酸及氨基酸序列分析
            3.2.2.2 豚鼠UGT1A3蛋白序列的多重比對(duì)分析
            3.2.2.3 豚鼠UGT1A3基因進(jìn)化分析
        3.2.3 豚鼠UGT1A3蛋白的跨膜結(jié)構(gòu)分析
        3.2.4 豚鼠UGT1A3基因結(jié)構(gòu)分析
        3.2.5 豚鼠UGT1A3基因組織表達(dá)譜分析
    3.3 豚鼠UGT1A8基因的克隆、序列鑒定結(jié)果
        3.3.1 豚鼠UGT1A8基因編碼區(qū)cDNA序列的克隆
        3.3.2 豚鼠UGT1A8基因的生物信息學(xué)分析
            3.3.2.1 豚鼠UGT1A8基因核苷酸及氨基酸序列分析
            3.3.2.2 豚鼠UGT1A8蛋白序列的多重比對(duì)分析
            3.3.2.3 豚鼠UGT1A8基因進(jìn)化分析
        3.3.3 豚鼠UGT1A8蛋白的跨膜結(jié)構(gòu)分析
        3.3.4 豚鼠UGT1A8基因組織表達(dá)譜分析
4 討論
    4.1 保證總RNA質(zhì)量，防止降解
    4.2 豚鼠UGT1A1、UGT1A3和UGT1A8基因編碼區(qū)克隆策略
    4.3 豚鼠UGT1A1基因的克隆對(duì)人類相關(guān)疾病研究的價(jià)值
    4.4 豚鼠UGT1A3基因的克隆對(duì)人類相關(guān)疾病研究的價(jià)值
    4.5 豚鼠UGT1A8基因的克隆對(duì)人類相關(guān)疾病研究的價(jià)值
5 結(jié)論
參考文獻(xiàn)
致謝



本文編號(hào)：3880991