柑橘潰瘍病(Citrus canker)為世界檢疫性病害,是柑橘重要的病害之一,在我國(guó)主要由柑橘黃單胞柑橘亞種(Xanthomonas citri subsp.citri,Xcc)引起。為了明確湛江地區(qū)柑橘潰瘍病的病原類型并篩選出有效的防治藥劑,本研究以染病檸檬葉片為材料進(jìn)行病原菌的分離鑒定,利用Nanopore三代測(cè)序技術(shù)平臺(tái)進(jìn)行病原菌全基因組測(cè)序,采用平板稀釋分離、形態(tài)學(xué)觀察和16S序列分析對(duì)病葉內(nèi)生菌分離鑒定后進(jìn)行平板對(duì)峙試驗(yàn),檢測(cè)內(nèi)生細(xì)菌與柑橘黃單胞的相互作用,并通過(guò)抑菌圈法檢測(cè)了幾種常用藥劑對(duì)柑橘潰瘍病菌的抑制效果。1.從疑似柑橘潰瘍病的檸檬病葉上分離到病原菌菌株zlm1908,通過(guò)形態(tài)學(xué)觀察、生理生化指標(biāo)測(cè)定及分子生物學(xué)鑒定,確定該病原菌為柑橘黃單胞柑橘亞種(Xcc),離體接種在檸檬和紅江橙葉片上,均產(chǎn)生典型的潰瘍癥狀。2.全基因組測(cè)序結(jié)果表明菌株zlm1908的基因組大小為5.19 Mb,含有1條5,192,880 bp的染色體和2條長(zhǎng)度分別為34,099 bp和119,114 bp的環(huán)狀質(zhì)粒,GC含量為64.67%。比較基因組研究發(fā)現(xiàn)菌株zlm1908與源自江西的jx-...

【文章頁(yè)數(shù)】：73 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
1 文獻(xiàn)綜述
    1.1 柑橘潰瘍病及其病原菌研究進(jìn)展
        1.1.1 柑橘潰瘍病的癥狀特點(diǎn)
        1.1.2 柑橘潰瘍病病原的特征
        1.1.3 柑橘潰瘍病病原的分類和命名
    1.2 柑橘潰瘍病的防治研究進(jìn)展
        1.2.1 檢疫防控
        1.2.2 農(nóng)業(yè)防治
        1.2.3 化學(xué)防治
    1.3 內(nèi)生菌及其應(yīng)用研究進(jìn)展
        1.3.1 內(nèi)生菌的概述
        1.3.2 內(nèi)生菌的拮抗作用機(jī)理
        1.3.3 芽孢桿菌在柑橘潰瘍病生物防治中的應(yīng)用
    1.4 基因組學(xué)的研究進(jìn)展
        1.4.1 全基因組測(cè)序技術(shù)的發(fā)展
        1.4.2 細(xì)菌全基因組測(cè)序的應(yīng)用
        1.4.3 柑橘潰瘍病菌基因組學(xué)研究
    1.5 技術(shù)路線
    1.6 本研究的目的及意義
2 材料與方法
    2.1 材料
        2.1.1 試驗(yàn)材料
        2.1.2 供試培養(yǎng)基
        2.1.3 主要儀器
        2.1.4 主要試劑
    2.2 方法
        2.2.1 病原菌的分離純化
        2.2.2 病原菌的形態(tài)學(xué)觀察
        2.2.3 病原菌的分子生物學(xué)鑒定
        2.2.4 病原菌的致病性測(cè)定
        2.2.5 病原菌的生理生化測(cè)定
        2.2.6 病原菌的全基因組測(cè)序
        2.2.7 比較基因組學(xué)
        2.2.8 內(nèi)生細(xì)菌的分離與鑒定
        2.2.9 拮抗菌株篩選及抑菌試驗(yàn)
        2.2.10 殺菌劑對(duì)柑橘潰瘍病菌的室內(nèi)毒力測(cè)定
        2.2.11 數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)分析
3 結(jié)果與分析
    3.1 病原菌的分離純化
    3.2 病原菌的形態(tài)學(xué)觀察
        3.2.1 鞭毛及莢膜觀察
        3.2.2 革蘭氏染色觀察
    3.3 病原菌的分子生物學(xué)鑒定
    3.4 病原菌的致病性測(cè)定
    3.5 病原菌的生理生化測(cè)定
    3.6 病原菌的全基因組測(cè)序
        3.6.1 數(shù)據(jù)過(guò)濾統(tǒng)計(jì)
        3.6.2 基因組組裝
        3.6.3 基因組組分分析與預(yù)測(cè)
        3.6.4 基因組功能注釋
        3.6.5 蛋白亞細(xì)胞定位分析
        3.6.6 基因組圈圖分析
    3.7 柑橘潰瘍病菌的比較基因組學(xué)分析
    3.8 內(nèi)生菌的分離與鑒定
        3.8.1 內(nèi)生菌的分離純化及菌落形態(tài)觀察
        3.8.2 內(nèi)生菌的分子鑒定
    3.9 拮抗菌株篩選及抑菌試驗(yàn)
        3.9.1 平板抑菌試驗(yàn)
        3.9.2 拮抗菌株菌落形態(tài)觀察
    3.10 殺菌劑對(duì)柑橘潰瘍病菌的室內(nèi)毒力測(cè)定
        3.10.1 供試藥劑對(duì)柑橘潰瘍病菌的室內(nèi)毒力測(cè)定
        3.10.2 供試藥劑對(duì)柑橘潰瘍病菌的毒力回歸方程
4 結(jié)論與討論
    4.1 結(jié)論
    4.2 討論
    4.3 有待進(jìn)一步研究的問(wèn)題
參考文獻(xiàn)
附錄1
附錄2
致謝
作者簡(jiǎn)介
導(dǎo)師簡(jiǎn)介



本文編號(hào)：3872254