發(fā)布時(shí)間：2023-10-15 16:33

　　馬鈴薯是世界第四大糧食作物,在糧食安全方面發(fā)揮著重要的作用。由致病疫霉引起的馬鈴薯晚疫病是一種卵菌病害,威脅著馬鈴薯的生產(chǎn),被譽(yù)為世界上第一大作物病害。在致病疫霉侵染寄主植物的過程中,分泌大量的RXLR效應(yīng)分子來抑制和破壞寄主植物的免疫反應(yīng),達(dá)到成功侵染的目的。因此,鑒定重要的RXLR效應(yīng)分子并挖掘致病機(jī)制,對有效防治馬鈴薯晚疫病具有重要意義。本研究通過篩選實(shí)驗(yàn)室前期構(gòu)建的251個(gè)RXLR類效應(yīng)分子的基因庫,鑒定了致病疫霉HLJ菌株的一個(gè)重要效應(yīng)分子PITG₁6427.2^HLJ,獲得了以下研究成果:(1)通過瞬時(shí)表達(dá)的方法,在本氏煙中驗(yàn)證效應(yīng)分子PITG₁6427.2^HLJ能夠抑制INF1誘導(dǎo)的過敏性細(xì)胞壞死反應(yīng)(Hypersensitive cell death Response,HR)。同時(shí)發(fā)現(xiàn),該基因還能夠抑制包括Bax、PsojNIP、SFI2、Avh238和Avh241誘導(dǎo)的HR,說明該基因能夠廣譜抑制植物的PTI和ETI。(2)以致病疫霉標(biāo)準(zhǔn)菌株T30-4中的效應(yīng)分子PITG_1...

【文章頁數(shù)】：66 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【文章目錄】：
中文摘要
英文摘要
1 前言
    1.1 馬鈴薯產(chǎn)業(yè)與現(xiàn)狀
        1.1.1 馬鈴薯的來源與特性
        1.1.2 馬鈴薯的發(fā)展現(xiàn)狀
        1.1.3 馬鈴薯產(chǎn)業(yè)所面臨的問題
    1.2 馬鈴薯晚疫病
        1.2.1 致病疫霉的基本特征
        1.2.2 馬鈴薯晚疫病的田間癥狀
        1.2.3 馬鈴薯晚疫病爆發(fā)的適宜條件
        1.2.4 致病疫霉的遺傳變異
        1.2.5 馬鈴薯晚疫病的防治措施
    1.3 植物與病原互作模型
        1.3.1 病原相關(guān)分子模式觸發(fā)的免疫反應(yīng)
        1.3.2 效應(yīng)分子觸發(fā)的免疫反應(yīng)
    1.4 效應(yīng)分子的研究進(jìn)展
        1.4.1 質(zhì)外體效應(yīng)分子
        1.4.2 細(xì)胞質(zhì)效應(yīng)分子
    1.5 RXLR效應(yīng)分子與寄主互作的靶標(biāo)及其功能
    1.6 效應(yīng)分子與植物激素
    1.7 本研究的目的與意義
2 材料與方法
    2.1 實(shí)驗(yàn)材料
    2.2 實(shí)驗(yàn)方法
        2.2.1 卵菌基因組的提取
        2.2.2 基因的克隆及載體的構(gòu)建
            2.2.2.1 引物的設(shè)計(jì)
            2.2.2.2 目的片段的擴(kuò)增
            2.2.2.3 DNA凝膠回收
            2.2.2.4 酶切和連接
            2.2.2.5 大腸桿菌的熱激轉(zhuǎn)化
            2.2.2.6 菌落PCR檢測
            2.2.2.7 質(zhì)粒的提取
        2.2.3 效應(yīng)分子多態(tài)性和功能域的分析
        2.2.4 農(nóng)桿菌的電擊轉(zhuǎn)化
        2.2.5 農(nóng)桿菌介導(dǎo)的瞬時(shí)表達(dá)
        2.2.6 植物總RNA的提取
        2.2.7 反轉(zhuǎn)錄PCR
        2.2.8 熒光定量PCR分析
        2.2.9 Gataway載體的構(gòu)建
        2.2.10 致病疫霉的培養(yǎng)和孢子懸浮液的制備
        2.2.11 馬鈴薯晚疫病菌的接種
            2.2.11.1 本氏煙的接種
            2.2.11.2 馬鈴薯離體葉片法接種
        2.2.12 DAB染色
        2.2.13 亞細(xì)胞定位的觀察
3 結(jié)果與分析
    3.1 PITG₁6427.2^HLJ抑制INF1 誘導(dǎo)的HR
    3.2 PITG₁6427.2^HLJ抑制植物的PTI和 ETI
    3.3 不同卵菌中PITG₁6427.2 的擴(kuò)增及表達(dá)載體的構(gòu)建
    3.4 不同卵菌中的PITG₁6427.2 的基因序列分析
    3.5 不同卵菌的PITG₁6427.2 抑制INF1和Avh241 誘導(dǎo)的HR
    3.6 PITG₁6427.2^HLJ在致病疫霉侵染馬鈴薯早期被大量誘導(dǎo)表達(dá)
    3.7 PITG₁6427.2^HLJ超量表達(dá)載體的構(gòu)建
    3.8 PITG₁6427.2^HLJ促進(jìn)致病疫霉在本氏煙的侵染
    3.9 PITG₁6427.2^HLJ促進(jìn)致病疫霉對馬鈴薯的侵染
    3.10 PITG₁6427.2^HLJ降低本氏煙中過氧化氫的積累
    3.11 PITG₁6427.2^HLJ影響植物激素相關(guān)基因的表達(dá)
    3.12 PITG₁6427.2^HLJ的亞細(xì)胞定位
4 討論
    4.1 PITG₁6427.2^HLJ抑制細(xì)胞死亡功能分析
    4.2 PITG₁6427.2^HLJ在致病疫霉與馬鈴薯互作中的表達(dá)模式
    4.3 PITG₁6427.2^HLJ致病性功能的探究
    4.4 RXLR效應(yīng)分子的亞細(xì)胞定位與功能的關(guān)系
5 結(jié)論
參考文獻(xiàn)
附錄 Ⅰ
附錄 Ⅱ
附錄 Ⅲ
附錄 Ⅳ
附錄 Ⅴ
致謝
攻讀學(xué)位期間發(fā)表論文情況



本文編號：3854260