灰葡萄胞菌(Botrytis cinerea),即灰霉菌,是一種腐生病原真菌,它的營(yíng)養(yǎng)方式為死體營(yíng)養(yǎng)型,能夠侵染上百種單子葉及雙子葉植物引起灰霉病,嚴(yán)重危害作物生產(chǎn)、蔬菜質(zhì)量以及水果保鮮。為了進(jìn)一步探究番茄對(duì)灰霉菌的抗病機(jī)制,我們?cè)诒緦?shí)驗(yàn)中采用病毒誘導(dǎo)的基因沉默(virus-induced gene silencing,VIGS)、基因過(guò)表達(dá)等技術(shù),研究了一個(gè)輔助分子伴侶調(diào)節(jié)因子蛋白家族SlBAG在番茄對(duì)灰霉菌抗性反應(yīng)中的功能以及可能的作用機(jī)制。分子伴侶(molecularchaperones)可以在蛋白質(zhì)折疊、蛋白質(zhì)質(zhì)量控制、多亞基蛋白復(fù)合體的組裝以及蛋白質(zhì)的運(yùn)輸?shù)冗^(guò)程中發(fā)揮重要作用。BAG(Bcl-2-associated athanogene)家族是一個(gè)進(jìn)化上高度保守的輔助分子伴侶蛋白家族,在多種植物、哺乳動(dòng)物以及酵母菌中均已經(jīng)發(fā)現(xiàn)了其同系物的存在。BAG家族蛋白具有共同的保守結(jié)構(gòu)域,可以調(diào)控?zé)峒さ鞍椎墓δ?也可以與一系列轉(zhuǎn)錄因子和信號(hào)蛋白等形成復(fù)合體從而在各種生理過(guò)程中發(fā)揮作用。人們?cè)诓溉閯?dòng)物中關(guān)于BAG家族的研究開(kāi)始較早并且已經(jīng)非常的廣泛和深入;在擬南芥和水稻中已經(jīng)分別鑒定到...

【文章頁(yè)數(shù)】：80 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【文章目錄】：
致謝
摘要
Abstract
第一章 文獻(xiàn)綜述
    1.1 植物與B.cinerea的互作機(jī)制
        1.1.1 B.cinerea的侵染機(jī)制
        1.1.2 植物PTI和ETI對(duì)B.cinerea的抗性研究
        1.1.3 植物細(xì)胞壞死調(diào)節(jié)機(jī)制對(duì)B.cinerea的抗性研究
    1.2 分子伴侶調(diào)節(jié)因子BAG家族研究進(jìn)展
        1.2.1 BAG家族的發(fā)現(xiàn)
        1.2.2 植物BAG蛋白結(jié)構(gòu)特征
        1.2.3 BAG蛋白在植物抗病中的作用
        1.2.4 BAG蛋白在植物生長(zhǎng)發(fā)育中的作用
        1.2.5 BAG蛋白在植物脅迫響應(yīng)中的作用
    1.3 本研究的主要目的和主要內(nèi)容
第二章 材料與方法
    2.1 實(shí)驗(yàn)材料
        2.1.1 植物材料
        2.1.2 植物材料的培養(yǎng)及處理
        2.1.3 生化試劑
        2.1.4 載體與菌株
    2.2 實(shí)驗(yàn)方法
        2.2.1 SlBAG家族基因的鑒定與命名
        2.2.2 植物總RNA的提取與反轉(zhuǎn)錄
        2.2.3 基因的克隆鑒定
        2.2.4 熒光實(shí)時(shí)定量PCR表達(dá)分析
        2.2.5 VIGS體系、依賴病毒的過(guò)表達(dá)番茄體系的構(gòu)建
            2.2.5.1 病毒介導(dǎo)的基因沉默載體和過(guò)表達(dá)載體構(gòu)建
            2.2.5.2 利用農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法構(gòu)建基因沉默或過(guò)表達(dá)體系
        2.2.6 本氏煙瞬時(shí)過(guò)表達(dá)體系的建立
            2.2.6.1 瞬時(shí)過(guò)表達(dá)載體的構(gòu)建
            2.2.6.2 用農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法構(gòu)建本氏煙瞬時(shí)過(guò)表達(dá)體系
        2.2.7 蛋白質(zhì)免疫印跡分析(Western blot)
        2.2.8 灰霉菌的培養(yǎng)與接種
            2.2.8.1 灰霉菌的培養(yǎng)
            2.2.8.2 灰霉菌的接種
            2.2.8.3 灰霉菌病斑大小的統(tǒng)計(jì)
            2.2.8.4 灰霉菌菌量的測(cè)定
        2.2.9 DAB染色檢測(cè)活性氧產(chǎn)生情況
        2.2.10 臺(tái)酚藍(lán)染色檢測(cè)細(xì)胞壞死情況
        2.2.11 亞細(xì)胞定位
        2.2.12 酵母篩庫(kù)
        2.2.13 酵母雙雜驗(yàn)證
        2.2.14 雙分子熒光互補(bǔ)試驗(yàn)
        2.2.15 Luciferase實(shí)驗(yàn)
        2.2.16 免疫共沉淀(Co-IP)試驗(yàn)
        2.2.17 化學(xué)發(fā)光法ROS測(cè)定
第三章 番茄SlBAG5在番茄對(duì)B.cinerea抗性中的作用
    3.1 SlBAG家族基因的鑒定和生物信息學(xué)分析
        3.1.1 SlBAG家族基因的鑒定
        3.1.2 SlBAG家族成員的系統(tǒng)進(jìn)化樹(shù)構(gòu)建
        3.1.3 SlBAG家族成員的序列分析
        3.1.4 SlBAG家族成員的蛋白結(jié)構(gòu)域分析
    3.2 SlBAG家族基因的表達(dá)模式分析
        3.2.1 SlBAG家族基因組織特異性表達(dá)分析
        3.2.2 SlBAG家族基因在激素誘導(dǎo)下的表達(dá)模式分析
        3.2.3 SlBAG家族基因在灰霉菌誘導(dǎo)下的表達(dá)模式分析
    3.3 SlBAG家族成員的亞細(xì)胞定位
    3.4 SlBAG家族基因的抗病功能研究
        3.4.1 沉默SlBAG5基因增強(qiáng)灰霉菌誘導(dǎo)的番茄抗病反應(yīng)
        3.4.2 在本氏煙中瞬時(shí)過(guò)表達(dá)SlBAG5基因減弱灰霉菌誘導(dǎo)的抗性反應(yīng)
        3.4.3 過(guò)表達(dá)SlBAG5基因減弱灰霉菌誘導(dǎo)的番茄抗病反應(yīng)
        3.4.4 SlBAG5基因沉默或過(guò)表達(dá)改變了灰霉菌誘導(dǎo)的SA、JA/ET途徑響應(yīng)基因的表達(dá)
        3.4.5 SlBAG5基因沉默或過(guò)表達(dá)影響chitin介導(dǎo)的PTI反應(yīng)
        3.4.6 SlBAG5互作蛋白的篩選
第四章 小結(jié)與討論
    4.1 討論
    4.2 展望
參考文獻(xiàn)
附錄Ⅰ 本文引物序列



本文編號(hào)：3844021