甜瓜(Cucumis melo)是我國重要的經(jīng)濟作物之一。近年來,新突發(fā)病毒病嚴(yán)重影響甜瓜產(chǎn)業(yè)發(fā)展。中國南瓜曲葉病毒(squash leaf curl China virus)和甜瓜壞死斑點病毒(melon necrotic spot virus)是中國新近報道為害甜瓜的種。為闡明兩種病毒的致病機理,構(gòu)建了SLCCNV和MNSV兩種甜瓜病毒的侵染性克隆,分析了病毒編碼的病毒致病因子,以期為防控該病毒病奠定基礎(chǔ)。目前取得以下結(jié)果:1、鑒定了甜瓜是SLCCNV的新寄主,構(gòu)建了SLCCNV侵染性克隆并進行了煙粉虱傳染試驗。測定了SLCCNV-HN全基因組序列并進行了系統(tǒng)進化分析,結(jié)果表明SLCCNV-HN甜瓜分離物與SLCCNV-Hn南瓜分離物、SLCCNV-Hn61和SLCCNV-SY西葫蘆分離物聚為一類。構(gòu)建了SLCCNV-HN侵染性克隆載體,接種甜瓜后植株矮化、葉片皺縮。進行了煙粉虱傳染試驗,發(fā)現(xiàn)煙粉虱接種的植株表現(xiàn)出與接種野生型一致的癥狀。2、明確了AC5基因是SLCCNV的致病因子,證實了AC5是SLCCNV編碼的沉默抑制子,其沉默抑制活性與核定位信號相關(guān)。將表達AC5基因的PVX...

【文章頁數(shù)】：137 頁

【學(xué)位級別】：博士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
第一章 文獻綜述
    1.1 侵染我國葫蘆科作物病毒種類
    1.2 SLCCNV研究背景
        1.2.1 雙生病毒的發(fā)生與為害
        1.2.2 雙生病毒分類及基因組結(jié)構(gòu)
        1.2.3 Begomovirus基因組特征及為害
        1.2.4 SLCCNV生物學(xué)特征及研究現(xiàn)狀
    1.3 MNSV研究背景
        1.3.1 分類地位、特性與分布
        1.3.2 病毒編碼的基因及其致病性
        1.3.3 病毒在細(xì)胞間的移動
        1.3.4 病毒傳播因素
        1.3.5 植物抗病毒研究
        1.3.6 寄主植物響應(yīng)MNSV入侵的應(yīng)答反應(yīng)
    1.4 侵染性克隆載體的構(gòu)建及應(yīng)用
        1.4.1 植物病毒侵染性克隆載體構(gòu)建
        1.4.2 植物病毒侵染性克隆的應(yīng)用
    1.5 病毒編碼的沉默抑制子
        1.5.1 基因沉默
        1.5.2 病毒編碼的RNA沉默抑制子及其作用原理
    1.6 本研究的意義及內(nèi)容
第二章 SLCCNV侵染性克隆的構(gòu)建
    2.1 前言
    2.2 材料與方法
        2.2.1 材料
        2.2.2 方法
    2.3 結(jié)果與分析
        2.3.1 田間甜瓜病葉檢測
        2.3.2 基因組結(jié)構(gòu)
        2.3.3 基因重組分析
        2.3.4 系統(tǒng)進化分析
        2.3.5 侵染性克隆致病性鑒定及煙粉虱傳染
    2.4 討論
第三章 AC5是SLCCNV編碼的致病因子
    3.1 前言
    3.2 材料與方法
        3.2.1 材料
        3.2.2 方法
    3.3 結(jié)果與分析
        3.3.1 AC5系統(tǒng)進化分析
        3.3.2 AC5的C端激發(fā)過敏性壞死反應(yīng)
        3.3.3 AC5是SLCCNV的致病因子
    3.4 討論
第四章 SLCCNV AC5沉默抑制功能及其沉默機制
    4.1 前言
    4.2 材料與方法
        4.2.1 材料
        4.2.2 方法
    4.3 結(jié)果與分析
        4.3.1 AC5抑制局部沉默
        4.3.2 AC5抑制沉默信號的系統(tǒng)運輸
        4.3.3 AC5的C端決定沉默活性
        4.3.4 AC5不抑制雙鏈dsRNA沉默
        4.3.5 AC5沉默在蛋白水平起作用
        4.3.6 核定位信號與PTGS關(guān)系
    4.4 討論
第五章 攜帶GFP的 MNSV侵染性克隆重組載體構(gòu)建
    5.1 前言
    5.2 材料與方法
        5.2.1 材料
        5.2.2 方法
    5.3 結(jié)果與分析
        5.3.1 5'端和3'端序列分析
        5.3.2 MNSV基因組序列及編碼蛋白
        5.3.3 MNSV基因組聚類分析
        5.3.4 侵染性克隆載體的構(gòu)建
        5.3.5 攜帶GFP的 MNSV侵染性克隆重組載體
    5.4 討論
第六章 MNSV p42與寄主因子互作篩選
    6.1 前言
    6.2 材料與方法
        6.2.1 材料
        6.2.2 方法
    6.3 結(jié)果與分析
        6.3.1 p42基因致病力鑒定
        6.3.2 p42突變體致病力分析
        6.3.3 整株甜瓜cDNA文庫評價
        6.3.4 p42與寄主因子互作篩選
    6.4 討論
第七章 全文結(jié)論及后續(xù)研究設(shè)想
    7.1 全文結(jié)論
    7.2 后續(xù)研究設(shè)想
參考文獻
附錄Ⅰ:部分載體圖譜
附錄Ⅱ:部分試劑
附錄Ⅲ:本研究所用引物
附錄Ⅳ:作者簡介
附錄Ⅴ:攻讀博士研究生階段的成績
致謝



本文編號：3808542