褐飛虱(Nilaparvata lugns,BPH)是一種重要的水稻害蟲。在實(shí)驗(yàn)室前期研究工作中,長(zhǎng)鏈非編碼RNA(long noncoding RNA,lncRNA)分析發(fā)現(xiàn),BPHOGS10005591-OT2跟褐飛虱繁殖力相關(guān),葡糖脫氫酶(Glucose dehydrogenase,GLD)基因控制果蠅受精囊的存精能力,發(fā)現(xiàn)lncRNA基因BPHOGS10005591-OT2與GLD基因在基因組的位置上發(fā)生重疊,且表達(dá)具有相關(guān)性。本文進(jìn)一步對(duì)lncRNA基因BPHOGS10005591-OT2和GLD基因進(jìn)行了克隆,檢測(cè)了基因表達(dá),進(jìn)行RNAi干擾分析等,對(duì)褐飛虱繁殖力分子機(jī)制的調(diào)控及昆蟲lncRNA均具有重要的參考價(jià)值。1.lncRNA及其相鄰蛋白編碼基因的驗(yàn)證對(duì)褐飛虱12個(gè)不同轉(zhuǎn)錄組測(cè)序、預(yù)測(cè)及分析得到了 1882條lncRNA。為確定lncRNA的方向性,從中任選17條進(jìn)行鏈特異性PCR驗(yàn)證。結(jié)果表明:17條中16條成功驗(yàn)證,其中,12條的轉(zhuǎn)錄方向?yàn)?’端,4條的轉(zhuǎn)錄方向?yàn)?’端,1條未擴(kuò)增出目的條帶。經(jīng)預(yù)測(cè)得到了 BPHLNC-unc241基因有10個(gè)不同的轉(zhuǎn)錄本,為了確...

【文章頁(yè)數(shù)】：79 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
ABSTRACT
縮略詞中英文對(duì)照
第一章 文獻(xiàn)綜述
    1 褐飛虱簡(jiǎn)介
        1.1 形態(tài)特征
        1.2 褐飛虱的生活習(xí)性
        1.3 褐飛虱的發(fā)生規(guī)律
        1.4 褐飛虱的危害
        1.5 褐飛虱的防治策略
    2 長(zhǎng)鏈非編碼RNA簡(jiǎn)介
        2.1 非編碼RNA研究進(jìn)展
        2.2 非編碼RNA的類型
        2.3 lncRNA定義
        2.4 lncRNA的作用機(jī)制
        2.5 lncRNA的生物學(xué)功能
        2.6 lncRNA在昆蟲學(xué)中的研究進(jìn)展
        2.7 動(dòng)物繁殖領(lǐng)域lncRNA的研究現(xiàn)狀
        2.8 lncRNA在昆蟲學(xué)中的未來展望
    3 RNA干擾
        3.1 RNA干擾的簡(jiǎn)介及發(fā)現(xiàn)
        3.2 RNA干擾的生物學(xué)特性
        3.3 RNA干擾作用機(jī)制
        3.4 RNA干擾的應(yīng)用
第二章 褐飛虱lncRNA及蛋白編碼基因的驗(yàn)證
    1 材料與方法
        1.1 主要試劑和儀器設(shè)備
        1.2 總RNA提取
        1.3 cDNA的合成
        1.4 引物設(shè)計(jì)
        1.5 普通PCR反應(yīng)
        1.6 分子克隆
    2 結(jié)果與分析
        2.1 17條lncRNA的鏈特異性PCR驗(yàn)證圖
        2.2 BPHLNC-unc241可能發(fā)生選擇性剪接的十條轉(zhuǎn)錄本驗(yàn)證圖
        2.3 3條lncRNA和與之重疊的蛋白編碼基因的驗(yàn)證圖
        2.4 討論與分析
第三章 褐飛虱3條lncRNA與其鄰近蛋白編碼基因的克隆
    1. 材料與方法
        1.1 昆蟲飼養(yǎng)及試蟲材料提取
        1.2 主要儀器和試劑
        1.3 褐飛虱總RNA提取及cDNA合成
        1.4 引物設(shè)計(jì)
        1.5 RACE PCR反應(yīng)
        1.6 分子克隆
        1.7 序列測(cè)定與分析
    2 結(jié)果與分析
        2.1 cDNA的克隆
        2.2 GLD基因的系統(tǒng)進(jìn)化樹分析
    3 討論
第四章 褐飛虱BPHOGS10005591-OT2和GLD基因的表達(dá)分析
    1 材料與方法
        1.1 實(shí)驗(yàn)試蟲的飼養(yǎng)
        1.2 主要儀器設(shè)備與試劑耗材
        1.3 褐飛虱成蟲不同天數(shù)的搜集
        1.4 總RNA提取
        1.5 去基因組cDNA的合成
        1.6 引物設(shè)計(jì)
        1.7 實(shí)時(shí)熒光定量PCR反應(yīng)
        1.8 數(shù)據(jù)分析
    2 結(jié)果與分析
        2.1 定量引物驗(yàn)證
        2.2 GLD基因在成蟲不同日齡的表達(dá)情況
        2.3 lncRNA在成蟲不同日齡的表達(dá)情況
    3 討論
第五章 褐飛虱BPHOGS10005591-OT2和GLD基因的RNA干擾分析
    1
        1.1 供試?yán)ハx的飼養(yǎng)
        1.2 主要試劑
        1.3 主要儀器
        1.4 褐飛虱活體注射
        1.5 總RNA提取
        1.6 cDNA的合成
        1.7 qRT-PCR引物設(shè)計(jì)
        1.8 qRT-PCR檢測(cè)干擾效率
        1.9 褐飛虱表型觀察
    2 結(jié)果與分析
        2.1 siRNA干擾后GLD基因及BPHOGS10005591-OT2的表達(dá)變化及表型分析
        2.2 注射后褐飛虱后代數(shù)量觀察
    3 討論
全文總結(jié)
參考文獻(xiàn)
攻讀碩士學(xué)位期間學(xué)術(shù)論文發(fā)表情況
致謝



本文編號(hào)：3802038