褐飛虱(Nilaparvata lugns,BPH)是一種重要的水稻害蟲。在實驗室前期研究工作中,長鏈非編碼RNA(long noncoding RNA,lncRNA)分析發(fā)現(xiàn),BPHOGS10005591-OT2跟褐飛虱繁殖力相關,葡糖脫氫酶(Glucose dehydrogenase,GLD)基因控制果蠅受精囊的存精能力,發(fā)現(xiàn)lncRNA基因BPHOGS10005591-OT2與GLD基因在基因組的位置上發(fā)生重疊,且表達具有相關性。本文進一步對lncRNA基因BPHOGS10005591-OT2和GLD基因進行了克隆,檢測了基因表達,進行RNAi干擾分析等,對褐飛虱繁殖力分子機制的調(diào)控及昆蟲lncRNA均具有重要的參考價值。1.lncRNA及其相鄰蛋白編碼基因的驗證對褐飛虱12個不同轉(zhuǎn)錄組測序、預測及分析得到了 1882條lncRNA。為確定lncRNA的方向性,從中任選17條進行鏈特異性PCR驗證。結(jié)果表明:17條中16條成功驗證,其中,12條的轉(zhuǎn)錄方向為3’端,4條的轉(zhuǎn)錄方向為5’端,1條未擴增出目的條帶。經(jīng)預測得到了 BPHLNC-unc241基因有10個不同的轉(zhuǎn)錄本,為了確...

【文章頁數(shù)】：79 頁

【學位級別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
ABSTRACT
縮略詞中英文對照
第一章 文獻綜述
    1 褐飛虱簡介
        1.1 形態(tài)特征
        1.2 褐飛虱的生活習性
        1.3 褐飛虱的發(fā)生規(guī)律
        1.4 褐飛虱的危害
        1.5 褐飛虱的防治策略
    2 長鏈非編碼RNA簡介
        2.1 非編碼RNA研究進展
        2.2 非編碼RNA的類型
        2.3 lncRNA定義
        2.4 lncRNA的作用機制
        2.5 lncRNA的生物學功能
        2.6 lncRNA在昆蟲學中的研究進展
        2.7 動物繁殖領域lncRNA的研究現(xiàn)狀
        2.8 lncRNA在昆蟲學中的未來展望
    3 RNA干擾
        3.1 RNA干擾的簡介及發(fā)現(xiàn)
        3.2 RNA干擾的生物學特性
        3.3 RNA干擾作用機制
        3.4 RNA干擾的應用
第二章 褐飛虱lncRNA及蛋白編碼基因的驗證
    1 材料與方法
        1.1 主要試劑和儀器設備
        1.2 總RNA提取
        1.3 cDNA的合成
        1.4 引物設計
        1.5 普通PCR反應
        1.6 分子克隆
    2 結(jié)果與分析
        2.1 17條lncRNA的鏈特異性PCR驗證圖
        2.2 BPHLNC-unc241可能發(fā)生選擇性剪接的十條轉(zhuǎn)錄本驗證圖
        2.3 3條lncRNA和與之重疊的蛋白編碼基因的驗證圖
        2.4 討論與分析
第三章 褐飛虱3條lncRNA與其鄰近蛋白編碼基因的克隆
    1. 材料與方法
        1.1 昆蟲飼養(yǎng)及試蟲材料提取
        1.2 主要儀器和試劑
        1.3 褐飛虱總RNA提取及cDNA合成
        1.4 引物設計
        1.5 RACE PCR反應
        1.6 分子克隆
        1.7 序列測定與分析
    2 結(jié)果與分析
        2.1 cDNA的克隆
        2.2 GLD基因的系統(tǒng)進化樹分析
    3 討論
第四章 褐飛虱BPHOGS10005591-OT2和GLD基因的表達分析
    1 材料與方法
        1.1 實驗試蟲的飼養(yǎng)
        1.2 主要儀器設備與試劑耗材
        1.3 褐飛虱成蟲不同天數(shù)的搜集
        1.4 總RNA提取
        1.5 去基因組cDNA的合成
        1.6 引物設計
        1.7 實時熒光定量PCR反應
        1.8 數(shù)據(jù)分析
    2 結(jié)果與分析
        2.1 定量引物驗證
        2.2 GLD基因在成蟲不同日齡的表達情況
        2.3 lncRNA在成蟲不同日齡的表達情況
    3 討論
第五章 褐飛虱BPHOGS10005591-OT2和GLD基因的RNA干擾分析
    1
        1.1 供試昆蟲的飼養(yǎng)
        1.2 主要試劑
        1.3 主要儀器
        1.4 褐飛虱活體注射
        1.5 總RNA提取
        1.6 cDNA的合成
        1.7 qRT-PCR引物設計
        1.8 qRT-PCR檢測干擾效率
        1.9 褐飛虱表型觀察
    2 結(jié)果與分析
        2.1 siRNA干擾后GLD基因及BPHOGS10005591-OT2的表達變化及表型分析
        2.2 注射后褐飛虱后代數(shù)量觀察
    3 討論
全文總結(jié)
參考文獻
攻讀碩士學位期間學術論文發(fā)表情況
致謝



本文編號：3802038