稻瘟病菌(Pyricularia oryzae Sny.Magnaporthe oryzae)引起的稻瘟病是影響糧食生產(chǎn)的主要病害之一,而其單倍體、基因組全序列已測(cè)出以及典型的侵染循環(huán)等特點(diǎn)使之成為研究植物病原真菌與寄主互作較為理想的模式生物。碳代謝物阻遏(carbon catabolite repression,CCR)廣泛地存在于各種真菌中,環(huán)境信號(hào)可以激發(fā)CCR,從而調(diào)控真菌的生長(zhǎng)、發(fā)育和致病能力,但是通過(guò)CCR探究植物與病原真菌的互作關(guān)系目前還是較為新穎的切入點(diǎn)。CreA/Cre1是絲狀子囊真菌中調(diào)控CCR的重要轉(zhuǎn)錄因子,是釀酒酵母Mig1的同源物。而與釀酒酵母相比,絲狀真菌的CCR調(diào)控網(wǎng)絡(luò)更為復(fù)雜,以構(gòu)巢曲霉為例,除了有CreA這一重要的轉(zhuǎn)錄因子外,還存在CreB、CreC、CreD等重要的碳代謝因子。我們實(shí)驗(yàn)室之前的研究發(fā)現(xiàn),稻瘟病菌的MoCreA、MoCreC參與CCR,且MoCREA、MoCREC基因的缺失突變體的致病力下降。但是,目前關(guān)于稻瘟病菌中碳代謝阻遏的調(diào)控網(wǎng)絡(luò)及其致病機(jī)制尚不清晰,需要進(jìn)一步探究完善。因此,本論文在前期研究的基礎(chǔ)上,進(jìn)一步分析了稻瘟病菌碳代謝調(diào)...

【文章頁(yè)數(shù)】：68 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
1 引言
    1.1 真菌代謝阻遏研究概況
    1.2 釀酒酵母中的碳代謝阻遏
    1.3 絲狀真菌中的碳代謝阻遏
    1.4 絲狀真菌中關(guān)鍵的CCR調(diào)節(jié)因子
        1.4.1 CreA/Cre1
        1.4.2 CreB/Cre2 and CreC
        1.4.3 CreD
        1.4.4 Snf1
    1.5 稻瘟病菌中CCR的研究現(xiàn)狀
    1.6 本研究的目的及意義
2 材料與方法
    2.1 材料
        2.1.1 供試菌株和植株
        2.1.2 質(zhì)粒載體
        2.1.3 實(shí)驗(yàn)培養(yǎng)基
        2.1.4 試劑
        2.1.5 引物
    2.2 實(shí)驗(yàn)方法
        2.2.1 生物信息學(xué)方法
        2.2.2 常規(guī)PCR體系
        2.2.3 大腸桿菌DH5α 感受態(tài)細(xì)胞的制備
        2.2.4 大腸桿菌的轉(zhuǎn)化及轉(zhuǎn)化子驗(yàn)證
        2.2.5 稻瘟病菌MoHIR3基因敲除方法
        2.2.6 MoHir3::GFP融合回補(bǔ)載體構(gòu)建
        2.2.7 稻瘟病菌原生質(zhì)體的制備
        2.2.8 稻瘟病菌原生質(zhì)體的轉(zhuǎn)化
        2.2.9 稻瘟病菌菌絲DNA粗提
        2.2.10 稻瘟病菌相關(guān)表型分析
        2.2.11 CreA::GFP融合自身啟動(dòng)子表達(dá)載體構(gòu)建
        2.2.12 提取稻瘟病菌蛋白
        2.2.13 Wetern blot
        2.2.14 免疫沉淀(Immunoprecipitation,IP)
        2.2.15 免疫沉淀質(zhì)譜結(jié)果分析
        2.2.16 酵母雙雜交載體構(gòu)建
        2.2.17 酵母雙雜交
3 結(jié)果與分析
    3.1 MoCreB、MoCreC、MoCreD和MoUbp8相互關(guān)系的研究
        3.1.1 MoUbp8定位分析
        3.1.2 去泛素化酶MoCre B和MoUbp8參與調(diào)控CCR
        3.1.3 MoCRED/MoUBP8雙敲突變體表型分析
        3.1.4 若干單敲突變體與雙敲突變體的CCR比較分析
    3.2 MoHir3的功能分析
        3.2.1 MoHIR3生物信息學(xué)分析
        3.2.2 MoHIR3敲除突變體的獲得
        3.2.3 MoHIR3的缺失減緩稻瘟病菌的營(yíng)養(yǎng)生長(zhǎng)
        3.2.4 MoHIR3的缺失不影響稻瘟病菌的產(chǎn)孢
        3.2.5 MoHIR3的缺失使稻瘟病菌喪失致病力
        3.2.6 ΔMohir3的附著胞形成被嚴(yán)重阻礙
        3.2.7 外源c AMP未能誘導(dǎo) ΔMohir3附著胞形成
        3.2.8 MoHIR3的缺失對(duì)稻瘟病菌的敏感性影響較小
        3.2.9 MoHir3參與稻瘟病菌的碳代謝阻遏
    3.3 MoCre A::GFP免疫沉淀
4 小結(jié)與討論
    4.1 泛素化酶MoCre D與去泛素化酶MoUbp8具有相反作用
    4.2 MoHir3可能對(duì)稻瘟病菌生長(zhǎng)、致病及CCR具有重要的作用
    4.3 稻瘟病菌中MoCre A調(diào)控的CCR有待進(jìn)一步探究
5 展望
參考文獻(xiàn)
附錄 表MoCreA免疫沉淀初篩假定互作蛋白
攻讀學(xué)位期間期間的學(xué)術(shù)論文與研究成果
致謝



本文編號(hào)：3801766