蘇云金芽胞桿菌(Bacillus thuringiensis,簡稱Bt)營養(yǎng)期殺蟲蛋白Vip3A類對(duì)夜蛾科害蟲具有較高的殺蟲活性。雖然Vip3Aa蛋白間的序列相似性很高(95%-100%),但是,不同Bt菌株來源的Vip3Aa蛋白的殺蟲譜和殺蟲活性存在很大差異。本研究為了探索Vip3Aa11羧基端點(diǎn)突變對(duì)其殺蟲活性和敏感性的影響,基于Vip3Aa11和Vip3Aa39蛋白氨基酸序列同源性高而殺蟲活性差異大的特點(diǎn),利用定點(diǎn)突變技術(shù)將挑選的位于Vip3Aa11羧基端的九個(gè)差異氨基酸分別突變?yōu)閂ip3Aa39相應(yīng)位點(diǎn)上的氨基酸。得到九個(gè)突變體:S543N、I544L、D547E、T681V、T685I、S686R、R704G、I780L和Y784N。將突變體基因在大腸桿菌(E.coli)BL21菌株中誘導(dǎo)表達(dá),SDS-PAGE分析結(jié)果表明九個(gè)突變基因和vip3Aa11均在可溶組分中表達(dá)大小約88 kDa的蛋白片段。對(duì)小菜蛾(Plutella xyllostella)、甜菜夜蛾(Spodoptera exigua)、棉鈴蟲(Helicoverpa armigera)、小地老虎(Agrotis ...

【文章頁數(shù)】：53 頁

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
英文摘要
1 前言
    1.1 蘇云金芽胞桿菌
    1.2 蘇云金芽胞桿菌營養(yǎng)期殺蟲蛋白
        1.2.1 營養(yǎng)期殺蟲蛋白的分類
        1.2.2 營養(yǎng)期殺蟲蛋白的殺蟲活性及作用機(jī)理
    1.3 營養(yǎng)期殺蟲蛋白的應(yīng)用
        1.3.1 構(gòu)建工程菌
        1.3.2 構(gòu)建轉(zhuǎn)基因植物
    1.4 Bt蛋白質(zhì)的改造
        1.4.1 定點(diǎn)突變
        1.4.2 結(jié)構(gòu)域互換
        1.4.3 隨機(jī)誘變
        1.4.4 DNA改組
    1.5 三種重要鱗翅目害蟲及其危害
        1.5.1 甜菜夜蛾
        1.5.2 棉鈴蟲
        1.5.3 小地老虎
    1.6 本研究的立題依據(jù)和目的意義
2 材料與方法
    2.1 實(shí)驗(yàn)材料
        2.1.1 菌株和質(zhì)粒
        2.1.2 試劑
        2.1.3 供試?yán)ハx
        2.1.4 儀器設(shè)備
    2.2 實(shí)驗(yàn)方法
        2.2.1 突變方法
        2.2.2 PCR擴(kuò)增引物序列
        2.2.3 PCR反應(yīng)體系
        2.2.4 消化甲基化模板
        2.2.5 瓊脂糖凝膠電泳
        2.2.6 BL21感受態(tài)細(xì)胞的制備
        2.2.7 熱擊轉(zhuǎn)化BL21感受態(tài)細(xì)胞
        2.2.8 大腸桿菌質(zhì)粒DNA提取
        2.2.9 序列測(cè)定及分析
        2.2.10 蛋白的表達(dá)與提取
        2.2.11 SDS-蛋白電泳
        2.2.12 蛋白定量的方法
        2.2.13 生物活性測(cè)定
        2.2.14 生測(cè)數(shù)據(jù)分析
        2.2.15 胰蛋白酶消化實(shí)驗(yàn)
3 結(jié)果與分析
    3.1 含vip3Aa11基因片段的表達(dá)載體的構(gòu)建
    3.2 突變基因的克隆
    3.3 Vip3Aa11與突變體蛋白的表達(dá)與分析
    3.4 殺蟲活性測(cè)定
        3.4.1 初篩
        3.4.2 復(fù)篩
    3.5 Vip3Aa11及突變體蛋白對(duì)胰蛋白酶的敏感性分析
4 討論
5 結(jié)論
致謝
參考文獻(xiàn)
攻讀碩士學(xué)位期間發(fā)表的學(xué)術(shù)論文



本文編號(hào)：3799385