發(fā)布時間：2023-04-02 20:25

　　水稻是最為重要的糧食作物之一,而二化螟是最為常見的一種水稻害蟲,每年都會造成巨大的經濟損失。目前水稻生產上二化螟的防治主要依賴化學殺蟲劑,然而由此產生的環(huán)境污染、生態(tài)破壞、食品安全以及害蟲耐藥性等問題較為突出。因此,培育抗二化螟水稻品種來代替化學殺蟲劑防治方法尤為重要。隨著RNA干擾(RNAi)技術的不斷地發(fā)展與成熟,其中人工micro RNA(artificial micro RNA,amiRNA)技術的高效率、精準作用靶點等優(yōu)點,被認為是一種極具潛力的控制農作物害蟲的新策略。在前期工作中,我們利用已鑒定的二化螟內源micro RNA序列csu-miR260構建amiRNA表達載體并轉化水稻,獲得了兩個純合的單拷貝插入的轉基因水稻家系csu260-16-4和csu260-18-2。室內喂飼表明,這兩個轉基因水稻家系對二化螟幼蟲有較好的抗性。在前期研究的基礎上,本研究進一步獲得了以下主要研究結果。1.運用高通量小RNA測序技術對轉基因水稻csu260-16-4和csu260-18-2進行測序,結果表明與轉入的amiRNA表達載體所匹配的小RNA長度集中在20～21nt,符合天然miRN...

【文章頁數(shù)】：65 頁

【學位級別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
縮略詞表
1 前言
    1.1 水稻抗蟲技術發(fā)展
    1.2 水稻二化螟研究
        1.2.1 二化螟的生物學特征
        1.2.2 二化螟的災害現(xiàn)狀
    1.3 RNA干擾
        1.3.1 dsRNA介導的RNA干擾
        1.3.2 miRNAs介導的RNA干擾
        1.3.3 piRNAs介導的RNA干擾
    1.4 RNA干擾技術在植物抗蟲育種中的應用
    1.5 研究目的與意義
2 材料與方法
    2.1 實驗材料
    2.2 dsRNA干涉載體的構建
    2.3 水稻的遺傳轉化
    2.4 轉基因植株的陽性檢測
    2.5 轉基因植株amiRNA表達量的檢測
    2.6 轉基因植株dsRNA表達量的檢測
    2.7 csu260 代表轉基因家系的小RNA測序
    2.8 室內抗蟲性鑒定試驗
        2.8.1 短期轉基因水稻莖稈接蟲試驗
        2.8.2 轉基因水稻莖稈連續(xù)喂飼試驗
        2.8.3 amiRNA agomir離體飼喂試驗
    2.9 田間抗蟲性鑒定試驗
        2.9.1 amiRNA轉基因水稻分蘗期田間抗蟲性鑒定
        2.9.2 amiRNA轉基因水稻抽穗期田間抗蟲性鑒定
    2.10 二化螟取食amiRNA水稻后靶基因表達量的檢測
3 結果與分析
    3.1 csu260 代表轉基因家系的小RNA測序
    3.2 miRNA agomir飼喂二化螟實驗
    3.3 csu260轉基因植株連續(xù)飼喂抗蟲性鑒定
    3.4 csu260轉基因水稻田間抗蟲性鑒定
        3.4.1 csu260轉基因水稻分蘗期田間抗蟲性鑒定
        3.4.2 csu260轉基因水稻抽穗期田間抗蟲性鑒定
    3.5 dsRNA轉基因植株獲得及PCR陽性檢測
    3.6 RNAi轉基因水稻莖稈飼喂二化螟進行抗性鑒定
4 討論
    4.1 agomir的飼喂及靶基因檢測實驗
    4.2 csu260轉基因材料的抗蟲性鑒定分析
    4.3 dsRNA和 miRNA干涉效果對比
    4.4 后續(xù)實驗計劃
參考文獻
致謝



本文編號：3779888