水稻是最為重要的糧食作物之一,而二化螟是最為常見的一種水稻害蟲,每年都會造成巨大的經(jīng)濟損失。目前水稻生產(chǎn)上二化螟的防治主要依賴化學(xué)殺蟲劑,然而由此產(chǎn)生的環(huán)境污染、生態(tài)破壞、食品安全以及害蟲耐藥性等問題較為突出。因此,培育抗二化螟水稻品種來代替化學(xué)殺蟲劑防治方法尤為重要。隨著RNA干擾(RNAi)技術(shù)的不斷地發(fā)展與成熟,其中人工micro RNA(artificial micro RNA,amiRNA)技術(shù)的高效率、精準(zhǔn)作用靶點等優(yōu)點,被認(rèn)為是一種極具潛力的控制農(nóng)作物害蟲的新策略。在前期工作中,我們利用已鑒定的二化螟內(nèi)源micro RNA序列csu-miR260構(gòu)建amiRNA表達(dá)載體并轉(zhuǎn)化水稻,獲得了兩個純合的單拷貝插入的轉(zhuǎn)基因水稻家系csu260-16-4和csu260-18-2。室內(nèi)喂飼表明,這兩個轉(zhuǎn)基因水稻家系對二化螟幼蟲有較好的抗性。在前期研究的基礎(chǔ)上,本研究進(jìn)一步獲得了以下主要研究結(jié)果。1.運用高通量小RNA測序技術(shù)對轉(zhuǎn)基因水稻csu260-16-4和csu260-18-2進(jìn)行測序,結(jié)果表明與轉(zhuǎn)入的amiRNA表達(dá)載體所匹配的小RNA長度集中在20～21nt,符合天然miRN...

【文章頁數(shù)】：65 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
縮略詞表
1 前言
    1.1 水稻抗蟲技術(shù)發(fā)展
    1.2 水稻二化螟研究
        1.2.1 二化螟的生物學(xué)特征
        1.2.2 二化螟的災(zāi)害現(xiàn)狀
    1.3 RNA干擾
        1.3.1 dsRNA介導(dǎo)的RNA干擾
        1.3.2 miRNAs介導(dǎo)的RNA干擾
        1.3.3 piRNAs介導(dǎo)的RNA干擾
    1.4 RNA干擾技術(shù)在植物抗蟲育種中的應(yīng)用
    1.5 研究目的與意義
2 材料與方法
    2.1 實驗材料
    2.2 dsRNA干涉載體的構(gòu)建
    2.3 水稻的遺傳轉(zhuǎn)化
    2.4 轉(zhuǎn)基因植株的陽性檢測
    2.5 轉(zhuǎn)基因植株amiRNA表達(dá)量的檢測
    2.6 轉(zhuǎn)基因植株dsRNA表達(dá)量的檢測
    2.7 csu260 代表轉(zhuǎn)基因家系的小RNA測序
    2.8 室內(nèi)抗蟲性鑒定試驗
        2.8.1 短期轉(zhuǎn)基因水稻莖稈接蟲試驗
        2.8.2 轉(zhuǎn)基因水稻莖稈連續(xù)喂飼試驗
        2.8.3 amiRNA agomir離體飼喂試驗
    2.9 田間抗蟲性鑒定試驗
        2.9.1 amiRNA轉(zhuǎn)基因水稻分蘗期田間抗蟲性鑒定
        2.9.2 amiRNA轉(zhuǎn)基因水稻抽穗期田間抗蟲性鑒定
    2.10 二化螟取食amiRNA水稻后靶基因表達(dá)量的檢測
3 結(jié)果與分析
    3.1 csu260 代表轉(zhuǎn)基因家系的小RNA測序
    3.2 miRNA agomir飼喂二化螟實驗
    3.3 csu260轉(zhuǎn)基因植株連續(xù)飼喂抗蟲性鑒定
    3.4 csu260轉(zhuǎn)基因水稻田間抗蟲性鑒定
        3.4.1 csu260轉(zhuǎn)基因水稻分蘗期田間抗蟲性鑒定
        3.4.2 csu260轉(zhuǎn)基因水稻抽穗期田間抗蟲性鑒定
    3.5 dsRNA轉(zhuǎn)基因植株獲得及PCR陽性檢測
    3.6 RNAi轉(zhuǎn)基因水稻莖稈飼喂二化螟進(jìn)行抗性鑒定
4 討論
    4.1 agomir的飼喂及靶基因檢測實驗
    4.2 csu260轉(zhuǎn)基因材料的抗蟲性鑒定分析
    4.3 dsRNA和 miRNA干涉效果對比
    4.4 后續(xù)實驗計劃
參考文獻(xiàn)
致謝



本文編號：3779888