桃流膠病是南方桃樹(shù)最嚴(yán)重的病害之一,給桃產(chǎn)業(yè)造成了巨大的經(jīng)濟(jì)損失�？煽擅�(Lasiodiplodia theobromae)是桃流膠病的主要病原菌之一。然而,目前L.theobromae引起桃流膠病的致病機(jī)理尚不完全清楚�；钚匝�(ROS)在植物和病原菌互作中扮演關(guān)鍵角色,但是ROS產(chǎn)生和消除系統(tǒng)的變化規(guī)律及ROS在桃流膠病發(fā)病過(guò)程中的具體作用尚不清晰。此外,病原菌入侵時(shí),寄主植物通常會(huì)產(chǎn)生大量的ROS,從而傷害病原菌,病原菌為了減少或避免這種氧化脅迫,進(jìn)化出了一套抗氧化系統(tǒng)。其中,b ZIP轉(zhuǎn)錄因子AP1(Activating protein 1)是病原真菌響應(yīng)氧化脅迫主要的信號(hào)感受器,并且可以調(diào)控多個(gè)抗氧化基因清除ROS。在多個(gè)病原真菌中,AP1參與ROS清除對(duì)病原菌的致病力具有重要影響。因此,探究病原真菌L.theobromae中AP1(Lt AP1)介導(dǎo)的ROS消除機(jī)制,對(duì)于深入了解病原菌L.theobromae在桃流膠病中的致病機(jī)理具有重要意義。本文通過(guò)生理生化、ROS代謝以及基因表達(dá)等分析,闡明ROS在L.theobromae引起的桃流膠病發(fā)病過(guò)程中的作用。最后利用遺傳...

【文章頁(yè)數(shù)】：155 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：博士

【文章目錄】：
摘要
ABSTRCT
縮略詞表
第一章 前言
    1 研究問(wèn)題的由來(lái)
    2 文獻(xiàn)綜述
        2.1 桃流膠病研究進(jìn)展
        2.2 活性氧在植物病害發(fā)生中的作用研究
    3 研究目的和意義
第二章 桃流膠病發(fā)病過(guò)程中ROS代謝變化研究
    1 引言
    2 材料與方法
        2.1 實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)和材料準(zhǔn)備
        2.2 生理指標(biāo)測(cè)定
        2.3 RNA提取、cDNA合成和qRT-PCR
        2.4 統(tǒng)計(jì)分析
    3 結(jié)果與分析
        3.1 桃當(dāng)年生枝條的發(fā)病癥狀
        3.2 超氧陰離子、過(guò)氧化氫和丙二醛含量變化
        3.3 ROS合成相關(guān)基因表達(dá)分析
        3.4 桃抗氧化酶活性及其編碼基因的表達(dá)分析
        3.5 桃抗氧化物質(zhì)AsA和GSH含量變化
        3.6 桃流膠病菌Lasiodiplodia theobromae ROS消除相關(guān)基因的表達(dá)分析
        3.7 植物激素合成相關(guān)基因的表達(dá)分析
        3.8 植物抗性相關(guān)基因的表達(dá)分析
    4 討論
        4.1 ROS的合成與其主要來(lái)源
        4.2 桃ROS消除機(jī)制探討
        4.3 L.theobromae ROS消除機(jī)制探討
        4.4 桃抗性響應(yīng)作用探討
    5 本章小結(jié)
第三章 轉(zhuǎn)錄因子LtAP1在致病過(guò)程中的功能分析
    1 引言
    2 材料與方法
        2.1 實(shí)驗(yàn)材料
        2.2 LtAP1基因克隆與蛋白質(zhì)序列分析
        2.3 基因組DNA、RNA提取及c DNA的制備
        2.4 桃流膠病菌LtAP1基因缺失突變體和互補(bǔ)菌株的創(chuàng)制
        2.5 LtAP1敲除突變體表型觀察
        2.6 LtAP1敲除突變體對(duì)外界環(huán)境脅迫應(yīng)答分析
        2.7 ΔLtAP1突變體致病力分析
        2.8 實(shí)時(shí)定量PCR分析
        2.9 統(tǒng)計(jì)分析
    3 結(jié)果與分析
        3.1 LtAP1結(jié)構(gòu)特征分析
        3.2 氧化劑對(duì)LtAP1的誘導(dǎo)表達(dá)分析
        3.3 LtAP1基因的敲除及互補(bǔ)驗(yàn)證
        3.4 LtAP1基因敲除對(duì)L.theobromae營(yíng)養(yǎng)生長(zhǎng)的影響
        3.5 LtAP1負(fù)調(diào)控L.theobromae對(duì)高鹽、高滲透壓脅迫的耐受性
        3.6 LtAP1基因敲除影響L.theobromae對(duì)氧化劑的耐受性
        3.7 LtAP1基因影響L.theobromae對(duì)氧化-硝化脅迫的敏感性
        3.8 LtAP1基因參與L.theobromae的致病性
        3.9 LtAP1基因參與調(diào)控氧化脅迫中L.theobromae ROS消除基因的表達(dá)
        3.10 LtAP1參與調(diào)控寄主侵染中L.theobromae ROS消除基因的表達(dá)
        3.11 LtAP1抑制寄主ROS的產(chǎn)生
        3.12 LtAP1敲除突變體可激活植物的防衛(wèi)反應(yīng)
    4 討論
        4.1 轉(zhuǎn)錄因子LtAP1生物信息發(fā)掘
        4.2 LtAP1在氧化脅迫響應(yīng)以及致病過(guò)程中的作用研究。
        4.3 LtAP1在抑制寄主抗性方面的作用研究
    5 本章小結(jié)
第四章 桃流膠病菌谷胱甘肽過(guò)氧化物酶(LtGPX3)在致病過(guò)程中的功能分析
    1 引言
    2 材料與方法
        2.1 實(shí)驗(yàn)材料
        2.2 LtGPX3克隆與蛋白質(zhì)序列分析
        2.3 基因組DNA、RNA提取及cDNA的制備
        2.4 桃流膠病菌LtGPX3基因缺失突變體和互補(bǔ)菌株的創(chuàng)制
        2.5 LtGPX3敲除突變體對(duì)外界環(huán)境脅迫壓力測(cè)試
        2.6 ΔLtGPX3突變體致病性測(cè)定
        2.7 實(shí)時(shí)定量PCR分析
        2.8 統(tǒng)計(jì)分析
    3 結(jié)果與分析
        3.1 LtGPX3結(jié)構(gòu)特征分析
        3.2 氧化劑對(duì)LtGPX3的誘導(dǎo)表達(dá)分析
        3.3 LtGPX3基因的敲除及互補(bǔ)驗(yàn)證
        3.4 LtGPX3基因參與L.theobromae對(duì)高鹽、高滲透壓脅迫的應(yīng)答
        3.5 LtGPX3基因敲除影響L.theobromae對(duì)氧化-硝化脅迫的耐受性
        3.6 LtGPX3基因影響L.theobromae的致病力
        3.7 LtGPX3基因敲除突變體促進(jìn)寄主ROS的積累
        3.8 LtGPX3基因參與抑制植物的防衛(wèi)反應(yīng)
    4 討論
        4.1 LtGPX3在響應(yīng)外源環(huán)境脅迫的作用研究
        4.2 ΔLtGPX3突變體在致病過(guò)程中的功能探討
        4.3 ΔLtGPX3突變體在侵染過(guò)程中誘導(dǎo)寄主抗性原因探討
    5 本章小結(jié)
第五章 桃流膠病菌硫氧還蛋白(LtTRX2)致病過(guò)程中的功能分析
    1 引言
    2 材料與方法
        2.1 實(shí)驗(yàn)材料
        2.2 LtTRX2克隆與蛋白質(zhì)序列分析
        2.3 基因組DNA、RNA提取及cDNA的制備
        2.4 桃流膠病菌LtTRX2基因缺失突變體和互補(bǔ)菌株的創(chuàng)制
        2.5 LtTRX2敲除突變體對(duì)外界環(huán)境脅迫應(yīng)答分析
        2.6 ΔLtTRX2突變體致病力分析
        2.7 實(shí)時(shí)定量PCR分析
        2.8 統(tǒng)計(jì)分析
    3 結(jié)果與分析
        3.1 LtTRX2結(jié)構(gòu)特征分析
        3.2 氧化劑對(duì)LtTRX2的誘導(dǎo)表達(dá)分析
        3.3 LtTRX2基因的敲除及互補(bǔ)驗(yàn)證
        3.4 LtTRX2基因參與L.theobromae對(duì)細(xì)胞膜損傷和細(xì)胞壁損傷的耐受性
        3.5 LtTRX2基因敲除影響L.theobromae對(duì)氧化-硝化脅迫的耐受性
        3.6 LtTRX2基因參與L.theobromae的致病性
        3.7 LtTRX2敲除突變體影響寄主ROS的產(chǎn)生和積累
        3.8 LtTRX2敲除突變體可激活植物的防衛(wèi)反應(yīng)
    4 討論
        4.1 LtTRX2在響應(yīng)外源環(huán)境脅迫的作用研究
        4.2 ΔLtTRX2突變體致病力減弱的原因探討
        4.3 LtTRX2參與抑制寄主抗性的作用機(jī)制
    5 本章小結(jié)
第六章 展望
參考文獻(xiàn)
附錄Ⅰ 實(shí)驗(yàn)PCR引物列表
附錄Ⅱ 博士期間發(fā)表文章
致謝



本文編號(hào)：3776126