桃流膠病是南方桃樹最嚴重的病害之一,給桃產業(yè)造成了巨大的經濟損失。可可毛色二孢(Lasiodiplodia theobromae)是桃流膠病的主要病原菌之一。然而,目前L.theobromae引起桃流膠病的致病機理尚不完全清楚�；钚匝�(ROS)在植物和病原菌互作中扮演關鍵角色,但是ROS產生和消除系統(tǒng)的變化規(guī)律及ROS在桃流膠病發(fā)病過程中的具體作用尚不清晰。此外,病原菌入侵時,寄主植物通常會產生大量的ROS,從而傷害病原菌,病原菌為了減少或避免這種氧化脅迫,進化出了一套抗氧化系統(tǒng)。其中,b ZIP轉錄因子AP1(Activating protein 1)是病原真菌響應氧化脅迫主要的信號感受器,并且可以調控多個抗氧化基因清除ROS。在多個病原真菌中,AP1參與ROS清除對病原菌的致病力具有重要影響。因此,探究病原真菌L.theobromae中AP1(Lt AP1)介導的ROS消除機制,對于深入了解病原菌L.theobromae在桃流膠病中的致病機理具有重要意義。本文通過生理生化、ROS代謝以及基因表達等分析,闡明ROS在L.theobromae引起的桃流膠病發(fā)病過程中的作用。最后利用遺傳...

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【學位級別】：博士

【文章目錄】：
摘要
ABSTRCT
縮略詞表
第一章 前言
    1 研究問題的由來
    2 文獻綜述
        2.1 桃流膠病研究進展
        2.2 活性氧在植物病害發(fā)生中的作用研究
    3 研究目的和意義
第二章 桃流膠病發(fā)病過程中ROS代謝變化研究
    1 引言
    2 材料與方法
        2.1 實驗設計和材料準備
        2.2 生理指標測定
        2.3 RNA提取、cDNA合成和qRT-PCR
        2.4 統(tǒng)計分析
    3 結果與分析
        3.1 桃當年生枝條的發(fā)病癥狀
        3.2 超氧陰離子、過氧化氫和丙二醛含量變化
        3.3 ROS合成相關基因表達分析
        3.4 桃抗氧化酶活性及其編碼基因的表達分析
        3.5 桃抗氧化物質AsA和GSH含量變化
        3.6 桃流膠病菌Lasiodiplodia theobromae ROS消除相關基因的表達分析
        3.7 植物激素合成相關基因的表達分析
        3.8 植物抗性相關基因的表達分析
    4 討論
        4.1 ROS的合成與其主要來源
        4.2 桃ROS消除機制探討
        4.3 L.theobromae ROS消除機制探討
        4.4 桃抗性響應作用探討
    5 本章小結
第三章 轉錄因子LtAP1在致病過程中的功能分析
    1 引言
    2 材料與方法
        2.1 實驗材料
        2.2 LtAP1基因克隆與蛋白質序列分析
        2.3 基因組DNA、RNA提取及c DNA的制備
        2.4 桃流膠病菌LtAP1基因缺失突變體和互補菌株的創(chuàng)制
        2.5 LtAP1敲除突變體表型觀察
        2.6 LtAP1敲除突變體對外界環(huán)境脅迫應答分析
        2.7 ΔLtAP1突變體致病力分析
        2.8 實時定量PCR分析
        2.9 統(tǒng)計分析
    3 結果與分析
        3.1 LtAP1結構特征分析
        3.2 氧化劑對LtAP1的誘導表達分析
        3.3 LtAP1基因的敲除及互補驗證
        3.4 LtAP1基因敲除對L.theobromae營養(yǎng)生長的影響
        3.5 LtAP1負調控L.theobromae對高鹽、高滲透壓脅迫的耐受性
        3.6 LtAP1基因敲除影響L.theobromae對氧化劑的耐受性
        3.7 LtAP1基因影響L.theobromae對氧化-硝化脅迫的敏感性
        3.8 LtAP1基因參與L.theobromae的致病性
        3.9 LtAP1基因參與調控氧化脅迫中L.theobromae ROS消除基因的表達
        3.10 LtAP1參與調控寄主侵染中L.theobromae ROS消除基因的表達
        3.11 LtAP1抑制寄主ROS的產生
        3.12 LtAP1敲除突變體可激活植物的防衛(wèi)反應
    4 討論
        4.1 轉錄因子LtAP1生物信息發(fā)掘
        4.2 LtAP1在氧化脅迫響應以及致病過程中的作用研究。
        4.3 LtAP1在抑制寄主抗性方面的作用研究
    5 本章小結
第四章 桃流膠病菌谷胱甘肽過氧化物酶(LtGPX3)在致病過程中的功能分析
    1 引言
    2 材料與方法
        2.1 實驗材料
        2.2 LtGPX3克隆與蛋白質序列分析
        2.3 基因組DNA、RNA提取及cDNA的制備
        2.4 桃流膠病菌LtGPX3基因缺失突變體和互補菌株的創(chuàng)制
        2.5 LtGPX3敲除突變體對外界環(huán)境脅迫壓力測試
        2.6 ΔLtGPX3突變體致病性測定
        2.7 實時定量PCR分析
        2.8 統(tǒng)計分析
    3 結果與分析
        3.1 LtGPX3結構特征分析
        3.2 氧化劑對LtGPX3的誘導表達分析
        3.3 LtGPX3基因的敲除及互補驗證
        3.4 LtGPX3基因參與L.theobromae對高鹽、高滲透壓脅迫的應答
        3.5 LtGPX3基因敲除影響L.theobromae對氧化-硝化脅迫的耐受性
        3.6 LtGPX3基因影響L.theobromae的致病力
        3.7 LtGPX3基因敲除突變體促進寄主ROS的積累
        3.8 LtGPX3基因參與抑制植物的防衛(wèi)反應
    4 討論
        4.1 LtGPX3在響應外源環(huán)境脅迫的作用研究
        4.2 ΔLtGPX3突變體在致病過程中的功能探討
        4.3 ΔLtGPX3突變體在侵染過程中誘導寄主抗性原因探討
    5 本章小結
第五章 桃流膠病菌硫氧還蛋白(LtTRX2)致病過程中的功能分析
    1 引言
    2 材料與方法
        2.1 實驗材料
        2.2 LtTRX2克隆與蛋白質序列分析
        2.3 基因組DNA、RNA提取及cDNA的制備
        2.4 桃流膠病菌LtTRX2基因缺失突變體和互補菌株的創(chuàng)制
        2.5 LtTRX2敲除突變體對外界環(huán)境脅迫應答分析
        2.6 ΔLtTRX2突變體致病力分析
        2.7 實時定量PCR分析
        2.8 統(tǒng)計分析
    3 結果與分析
        3.1 LtTRX2結構特征分析
        3.2 氧化劑對LtTRX2的誘導表達分析
        3.3 LtTRX2基因的敲除及互補驗證
        3.4 LtTRX2基因參與L.theobromae對細胞膜損傷和細胞壁損傷的耐受性
        3.5 LtTRX2基因敲除影響L.theobromae對氧化-硝化脅迫的耐受性
        3.6 LtTRX2基因參與L.theobromae的致病性
        3.7 LtTRX2敲除突變體影響寄主ROS的產生和積累
        3.8 LtTRX2敲除突變體可激活植物的防衛(wèi)反應
    4 討論
        4.1 LtTRX2在響應外源環(huán)境脅迫的作用研究
        4.2 ΔLtTRX2突變體致病力減弱的原因探討
        4.3 LtTRX2參與抑制寄主抗性的作用機制
    5 本章小結
第六章 展望
參考文獻
附錄Ⅰ 實驗PCR引物列表
附錄Ⅱ 博士期間發(fā)表文章
致謝



本文編號：3776126