發(fā)布時間：2023-03-09 18:48

　　番茄褪綠病毒(Tomato chlorosis virus,ToCV)是近幾年在我國新發(fā)生的一種病毒,中國大陸2013年首次在北京地區(qū)設(shè)施番茄上發(fā)現(xiàn)并報道該病毒。由于寄主范圍廣泛,傳播介體煙粉虱難防控,ToCV迅速在我國發(fā)展蔓延,目前全國范圍內(nèi)13個省區(qū)已有報道。感染ToCV的植株長勢弱、果實小、商品性下降,對我國番茄產(chǎn)業(yè)造成嚴(yán)重的經(jīng)濟(jì)損失。為明確山西、內(nèi)蒙古、遼寧和吉林四省區(qū)ToCV的發(fā)生情況,以便及早采取防控措施,本研究利用分子生物學(xué)方法,對采自上述地區(qū)的123份番茄樣品進(jìn)行ToCV分子鑒定,檢出4份陽性樣品,首次確定并報道了ToCV在山西、內(nèi)蒙古、遼寧和吉林四省區(qū)的發(fā)生。CP、Hsp70h序列的核苷酸、氨基酸相似性分析和系統(tǒng)進(jìn)化樹表明四省區(qū)分離物與中國其他地區(qū)分離物的核苷酸、氨基酸相似性較高,親緣關(guān)系較近。四省區(qū)的ToCV檢出率均較低,推測ToCV在上述四省區(qū)處于病害發(fā)展的初始階段,尚未對番茄產(chǎn)業(yè)造成明顯損失。由于該病害具有流行速度快、傳播范圍廣的特點,當(dāng)?shù)馗鞑块T要引起重視,警惕ToCV的流行爆發(fā)。目前對ToCV的研究多限于檢測鑒定、檢測方法優(yōu)化、進(jìn)化分析等研究,對于ToCV與寄...

【文章頁數(shù)】：73 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【文章目錄】：
中文摘要
Abstract
1 引言
    1.1 番茄褪綠病毒研究進(jìn)展
        1.1.1 番茄褪綠病毒的發(fā)生及分布范圍
        1.1.2 番茄褪綠病毒的癥狀與危害
        1.1.3 番茄褪綠病毒的傳播方式及田間寄主范圍
        1.1.4 番茄褪綠病毒的檢測方法
        1.1.5 番茄褪綠病毒的綜合防治措施
        1.1.6 番茄褪綠病毒的基因組結(jié)構(gòu)及蛋白功能研究進(jìn)展
    1.2 蛋白互作研究方法進(jìn)展
        1.2.1 酵母雙雜交系統(tǒng)
        1.2.2 雙分子熒光互補
    1.3 S期激酶相關(guān)蛋白SKP1 研究進(jìn)展
        1.3.1 SKP1 參與泛素蛋白酶降解過程
        1.3.2 SKP1 參與激素代謝
        1.3.3 SKP1 參與著絲點功能
    1.4 研究目的及意義
2 材料與方法
    2.1 實驗材料與儀器
        2.1.1 病毒樣品的采集
        2.1.2 試劑與耗材
        2.1.3 實驗儀器
        2.1.4 實驗所需試劑、培養(yǎng)基及配制
    2.2 番茄褪綠病毒的分子鑒定
        2.2.1 植物總RNA提取
        2.2.2 引物合成
        2.2.3 反轉(zhuǎn)錄cDNA合成
        2.2.4 PCR擴(kuò)增
        2.2.5 PCR產(chǎn)物瓊脂糖凝膠電泳
        2.2.6 PCR產(chǎn)物回收
        2.2.7 核酸純度和濃度測定
        2.2.8 回收片段連接載體
        2.2.9 大腸桿菌感受態(tài)細(xì)胞制備
        2.2.10 大腸桿菌感受態(tài)細(xì)胞轉(zhuǎn)化
        2.2.11 菌落PCR鑒定
        2.2.12 質(zhì)粒DNA的提取
        2.2.13 重組質(zhì)粒鑒定
    2.3 酵母雙雜交篩選與ToCV p22 互作的寄主蛋白
        2.3.1 酵母細(xì)胞感受態(tài)制備(現(xiàn)用現(xiàn)制)
        2.3.2 酵母細(xì)胞感受態(tài)細(xì)胞轉(zhuǎn)化
        2.3.3 誘餌蛋白自激活活性驗證
        2.3.4 預(yù)實驗驗證文庫效率
        2.3.5 酵母雙雜交篩選
        2.3.6 酵母質(zhì)粒的提取
        2.3.7 質(zhì)粒PCR鑒定
        2.3.8 轉(zhuǎn)化大腸桿菌
        2.3.9 菌落PCR鑒定
        2.3.10 菌液測序
        2.3.11 質(zhì)粒提取并保存
    2.4 ToCV p22與NbSKP1 互作驗證
        2.4.1 酵母雙雜交驗證ToCV p22與NbSKP1 互作
        2.4.2 BiFC驗證ToCV p22與NbSKP1 互作
3 結(jié)果與分析
    3.1 北方四省區(qū)番茄褪綠病毒的分子鑒定
        3.1.1 ToCV CP和 Hsp70h基因的擴(kuò)增
        3.1.2 序列分析
    3.2 酵母雙雜交篩選與ToCV p22 互作的寄主蛋白
        3.2.1 誘餌質(zhì)粒自激活活性驗證及文庫效率測定
        3.2.2 酵母雙雜交篩選結(jié)果
        3.2.3 測序結(jié)果統(tǒng)計分析及同源性比對
    3.3 ToCV p22與NbSKP1 蛋白互作驗證
        3.3.1 酵母雙雜交驗證ToCV p22與NbSKP1 互作
        3.3.2 雙分子熒光互補驗證ToCV p22與NbSKP1 互作
4 討論
    4.1 北方四省區(qū)番茄褪綠病毒的分子鑒定
    4.2 酵母雙雜交篩選與ToCV p22 互作的寄主蛋白
    4.3 展望
5 結(jié)論
參考文獻(xiàn)
致謝
碩士期間發(fā)表論文



本文編號：3758105