柑橘黃龍病(Citrus Huanglongbing,HLB)是一種由革蘭氏陰性細(xì)菌韌皮部桿菌(Candidatus Liberibacter spp.)引起的重要檢疫病害。該病病原分為三個(gè)亞種:“Candidatus Liberibacter asiaticus”(CLas,亞洲種)、“Ca.L.africanus”(CLaf,非洲種)和“Ca.L.americanus”(CLam,美洲種)。其中,CLas和CLam由亞洲柑橘木虱(Diaphorina citri)傳播,而CLaf則是由非洲柑橘木虱(Trioza erytreae)傳播。目前對(duì)該病害的防控還沒有有效的藥劑,商業(yè)化柑橘品種對(duì)該病均沒有抗性,當(dāng)前防控主要通過控制木虱傳播、及時(shí)砍除病樹和使用無病苗木。黃龍病菌尚不能離體培養(yǎng),難以進(jìn)行傳統(tǒng)的分子和遺傳操作,因此極大制約了對(duì)黃龍病菌毒力機(jī)制的認(rèn)知。隨著生物信息學(xué)的發(fā)展,2009年公布了首個(gè)CLas株系的全基因組序列,為后續(xù)研究奠定了基礎(chǔ)。效應(yīng)蛋白是由病原菌編碼產(chǎn)生的一類重要蛋白,根據(jù)其在寄主細(xì)胞的定位可分為胞外效應(yīng)蛋白(Apoplastic effectors)和胞內(nèi)效應(yīng)蛋白(...

【文章頁數(shù)】：90 頁

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
abstract
第1章 文獻(xiàn)綜述
    1.1 柑橘黃龍病概述
        1.1.1 病原的發(fā)現(xiàn)與分類
        1.1.2 病原的分子特性
        1.1.3 寄主感病癥狀
        1.1.4 病原的傳播方式及宿主范圍
        1.1.5 防控技術(shù)
    1.2 黃龍病菌分泌系統(tǒng)和假定效應(yīng)子研究進(jìn)展
        1.2.1 分泌系統(tǒng)
        1.2.2 效應(yīng)蛋白
第2章 引言
第3章 柑橘黃龍病菌效應(yīng)蛋白Clsp33 生物信息學(xué)與分泌特性研究
    3.1 實(shí)驗(yàn)材料
        3.1.1 供試毒源和苗木
        3.1.2 菌株和載體
        3.1.3 主要試劑(盒)
        3.1.4 主要存儲(chǔ)液配制
        3.1.5 主要儀器
    3.2 實(shí)驗(yàn)方法
        3.2.1 生物信息學(xué)分析
        3.2.2 引物設(shè)計(jì)
        3.2.3 T載體構(gòu)建
        3.2.4 構(gòu)建原核表達(dá)載體
        3.2.5 轉(zhuǎn)化BL21 進(jìn)行原核表達(dá)
        3.2.6 總RNA提取
        3.2.7 cDNA合成和qPCR分析
    3.3 結(jié)果與分析
        3.3.1 生物信息學(xué)分析
        3.3.2 編碼基因Clsp33和phoA的 T載體構(gòu)建
        3.3.3 原核表達(dá)載體構(gòu)建
        3.3.4 BL21 原核表達(dá)驗(yàn)證
        3.3.5 Clsp33 在宿主甜橙和木虱中差異表達(dá)
    3.4 討論
    3.5 小結(jié)
第4章 效應(yīng)蛋白Clsp33 亞細(xì)胞定位及生物學(xué)功能分析
    4.1 實(shí)驗(yàn)材料
        4.1.1 供試苗木
        4.1.2 菌株和載體
        4.1.3 主要試劑(盒)
        4.1.4 主要存儲(chǔ)液配制
        4.1.5 主要儀器和材料
    4.2 實(shí)驗(yàn)方法
        4.2.1 鋅指結(jié)構(gòu)預(yù)測(cè)
        4.2.2 核定位信號(hào)預(yù)測(cè)
        4.2.3 引物設(shè)計(jì)
        4.2.4 植物表達(dá)載體構(gòu)建
        4.2.5 農(nóng)桿菌感受態(tài)制備
        4.2.6 農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化
        4.2.7 農(nóng)桿菌注射
        4.2.8 亞細(xì)胞定位
        4.2.9 Northern blot
    4.3 結(jié)果與分析
        4.3.1 核定位信號(hào)突變對(duì)Clsp33 亞細(xì)胞定位的影響
        4.3.2 核定位信號(hào)突變對(duì)Clsp33 致病性的影響
        4.3.3 高溫能影響Clsp33 的亞細(xì)胞定位
        4.3.4 Clsp33 致病性與其進(jìn)核數(shù)量相關(guān)
        4.3.5 鋅指結(jié)構(gòu)突變不影響Clsp33 致病性
    4.4 討論
    4.5 小結(jié)
第5章 效應(yīng)蛋白Clsp33 在甜橙寄主中互作蛋白的篩選
    5.1 實(shí)驗(yàn)材料
        5.1.1 供試苗木
        5.1.2 菌株和載體
        5.1.3 主要試劑
        5.1.4 主要儲(chǔ)存液配置
        5.1.5 主要儀器
    5.2 實(shí)驗(yàn)方法
        5.2.1 引物設(shè)計(jì)
        5.2.2 載體構(gòu)建
        5.2.3 酵母AH109 感受態(tài)的制備
        5.2.4 轉(zhuǎn)化
        5.2.5 利用β-半乳糖苷酶鑒定酵母互作
        5.2.6 BiFC驗(yàn)證蛋白互作
    5.3 結(jié)果與分析
        5.3.1 Clsp33 與擬南芥PINP1 在酵母中互作
        5.3.2 Clsp33 與甜橙CsPINP1 在酵母中有弱互作
        5.3.3 Clsp33 與甜橙CsPINP1 在植物中有互作
    5.4 討論
    5.5 小結(jié)
第6章 主要結(jié)論、創(chuàng)新點(diǎn)與展望
    6.1 主要結(jié)論
        6.1.1 Clsp33 的生物信息學(xué)分析和分泌特性驗(yàn)證
        6.1.2 Clsp33 的亞細(xì)胞定位和生物學(xué)功能分析
        6.1.3 Clsp33 在甜橙寄主中互作蛋白的篩選
    6.2 創(chuàng)新點(diǎn)
    6.3 展望
參考文獻(xiàn)
附錄 縮略詞與中英文對(duì)照表
在讀期間發(fā)表論文及參加科研項(xiàng)目情況
致謝



本文編號(hào)：3755835