木爾坦棉花曲葉病毒(Cotton leaf curl Multan virus,CLCuMuV)是一種重要的粉虱傳雙生病毒,在自然條件下主要由煙粉虱(Bemisia tabaci)以持久循回方式傳播。CLCuMuV最早在巴基斯坦木爾坦地區(qū)發(fā)現(xiàn),之后擴散到巴基斯坦其他地區(qū)及印度等地,給當?shù)氐拿藁ǖ茸魑锷a(chǎn)造成了慘重的損失。2006年CLCuMuV首次在我國廣東朱槿上發(fā)現(xiàn)危害,之后陸續(xù)在廣西、福建、海南、江蘇等地發(fā)現(xiàn)并報道,成為我國朱槿、黃秋葵、棉花等多種園藝和經(jīng)濟作物安全生產(chǎn)上的重大風險因子之一。CLCuMuV屬于雙生病毒科(Geminiviridae)菜豆金色花葉病毒屬(Begomovirus)的單組分雙生病毒,其基因組為一個單鏈環(huán)狀DNA(DNA-A),同時伴隨一個β衛(wèi)星分子CLCuMuB(Cotton leaf curl Multan betasatellite,CLCuMuB)。其中DNA-A包含6個ORF,分別編碼V1(CP)、V2、C1(Rep)、C2(TrAP)、C3(REn)和C4蛋白,β衛(wèi)星只編碼一個蛋白(βC1)。許多雙生病毒編碼的V2蛋白具有參與癥狀形成、幫助病毒運...

【文章頁數(shù)】：81 頁

【學位級別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
第一章 文獻綜述
    1 雙生病毒簡介
    2 棉花曲葉病
    3 木爾坦棉花曲葉病毒簡介
        3.1 木爾坦棉花曲葉病毒發(fā)生及危害
        3.2 木爾坦棉花曲葉病毒的基因組結(jié)構(gòu)及功能
    4 V2基因功能研究進展
    5 亞細胞定位在蛋白質(zhì)功能預(yù)測上的應(yīng)用
    6 酵母雙雜交系統(tǒng)
        6.1 酵母雙雜交原理
        6.2 酵母雙雜交系統(tǒng)的應(yīng)用
        6.3 酵母雙雜交系統(tǒng)的優(yōu)點及局限性
    7 研究目的與意義
第二章 CLCuMuV V2亞細胞定位特征分析
    1 材料和方法
        1.1 材料
        1.2 試劑
        1.3 植物總DNA的提取
        1.4 CLCuMuV V2基因克隆
        1.5 CLCuMuV V2-YFP融合表達載體的構(gòu)建
        1.6 CLCuMuV V2蛋白的亞細胞定位
        1.7 CLCuMuV V2轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物的RT-PCR檢測
        1.8 CLCuMuV V2蛋白的Western blot分析
    2 結(jié)果與分析
        2.1 CLCuMuV V2基因克隆
        2.2 CLCuMuV V2蛋白序列特征分析
        2.3 CLCuMuV V2-YFP融合表達載體的構(gòu)建
        2.4 CLCuMuV V2蛋白亞細胞定位特征分析
        2.5 V2-YFP的轉(zhuǎn)錄及表達檢測
    3 討論
第三章 CLCuMuV V2與病毒編碼蛋白的互作
    1 材料與方法
        1.1 材料
        1.2 試劑
        1.3 植物總DNA的提取
        1.4 CLCuMuV編碼基因克隆
        1.5 CLCuMuV基因酵母雙雜交載體(AD/BK)的構(gòu)建
        1.6 酵母菌AH109感受態(tài)的制備
        1.7 酵母雙雜交驗證毒性
        1.8 酵母雙雜交驗證自激活及互作
    2 結(jié)果與分析
        2.1 CLCuMuV編碼病毒基因的擴增及克隆
        2.2 CLCuMuV編碼基因的酵母雙雜交載體構(gòu)建
        2.3 CLCuMuV編碼蛋白對酵母毒性驗證及其自激活檢測
        2.4 酵母雙雜交驗證V2與CLCuMuV編碼蛋白的互作
    3 討論
第四章 CLCuMuV V2蛋白自身互作關(guān)鍵區(qū)域鑒定
    1 材料和方法
        1.1 材料
        1.2 試劑
        1.3 V2的缺失突變體構(gòu)建
        1.4 V2缺失突變體酵母雙雜交載體構(gòu)建
        1.5 酵母雙雜交鑒定V2蛋白自身互作關(guān)鍵域
    2 結(jié)果與分析
        2.1 V2的缺失突變體構(gòu)建
        2.2 V2缺失突變體酵母雙雜交載體構(gòu)建
        2.3 酵母雙雜交鑒定V2蛋白自身互作關(guān)鍵域
    3 討論
第五章 棉花GhRPS20的克隆及其與V2的體外互作驗證
    1 材料與方法
        1.1 材料
        1.2 試劑
        1.3 棉花植物總RNA的提取
        1.4 棉花GhRPS20基因克隆
        1.5 GhRPS20酵母雙雜交載體構(gòu)建
        1.6 GhRPS20-AD的毒性及自激活驗證
        1.7 GhRPS20與V2的互作驗證
    2 結(jié)果與分析
        2.1 棉花的GhRPS20基因克隆
        2.2 棉花RPS20序列分析
        2.3 GhRPS20酵母雙雜交載體構(gòu)建
        2.4 GhRPS20對酵母毒性驗證及其自激活檢測
        2.5 GhRPS20與V2互作驗證
    3 討論
結(jié)論與展望
    1 結(jié)論
    2 展望
參考文獻
附錄Ⅰ 常用緩沖液及試劑配制方法
附錄Ⅱ 載體圖譜
致謝



本文編號：3752190