家蠶質(zhì)型多角體病毒(Bombyx mori cytoplasmic polyhedrosis virus,BmCPV)是危害蠶業(yè)的主要病原之一,隨著家蠶與病毒基因組序列相繼測序完成,作為鱗翅目模式昆蟲的家蠶,自然也成為研究昆蟲與病原感染相互作用的生物模型。為了篩選抗BmCPV病毒的基因和蛋白,前期實驗室通過數(shù)字基因表達譜(Digital gene expression profiling,DGE)和同位素標記相對和絕對定量(Isobaric tags for relative and absolute quantification,iTRAQ)對家蠶中腸進行分析。結(jié)果發(fā)現(xiàn)多個激素相關(guān)的基因和蛋白在感染BmCPV后出現(xiàn)差異表達。20-羥基蛻皮酮(20-hydroxyecdysone,20E)和保幼激素(Juvenile hormone,JH)是變態(tài)昆蟲體內(nèi)的兩大激素,協(xié)同調(diào)控家蠶的蛻皮與變態(tài)。本論文研究激素與病毒之間是否存在互作關(guān)系及研究激素調(diào)控在家蠶抗病毒過程中發(fā)揮的免疫防御機制,主要從三方面展開:(1)家蠶感染BmCPV后血淋巴中激素滴度的測定;(2)篩選家蠶感染BmCPV后激素調(diào)控...

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【學位級別】：碩士

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摘要
Abstract
第1章 緒論
    1.1 研究背景
        1.1.1 BmCPV
        1.1.2 BmCPV的侵染過程
        1.1.3 BmCPV的危害
        1.1.4 家蠶抗BmCPV的研究進展
    1.2 昆蟲的免疫調(diào)控
        1.2.1 昆蟲的先天免疫
        1.2.2 昆蟲的激素調(diào)節(jié)
    1.3 昆蟲激素在免疫中的研究進展
        1.3.1 昆蟲激素在抗病原微生物中的研究
        1.3.2 昆蟲激素在抗病毒中的研究
    1.4 研究目的及意義
    1.5 研究內(nèi)容與技術(shù)路線
        1.5.1 主要研究內(nèi)容
        1.5.2 實驗技術(shù)路線
第2章 家蠶感染BmCPV后血淋巴中激素滴度的檢測
    2.1 引言
    2.2 實驗材料與試劑
        2.2.1 材料及試劑
        2.2.2 儀器及設(shè)備
        2.2.3 試劑的配制
    2.3 實驗方法
        2.3.1 家蠶品系及病毒接種
        2.3.2 實驗材料的前期處理
        2.3.3 HPLC法測激素濃度
    2.4 結(jié)果與分析
        2.4.1 蛻皮激素含量測定
        2.4.2 保幼激素含量測定
    2.5 本章討論
第3章 家蠶感染BmCPV后調(diào)控20E和 JH相關(guān)基因的篩選與鑒定
    3.1 引言
    3.2 實驗材料與試劑
        3.2.1 材料與試劑
        3.2.2 儀器與設(shè)備
        3.2.3 試劑的配制
    3.3 實驗方法
        3.3.1 病原接種與取材
        3.3.2 Trizol法提取總RNA
        3.3.3 反轉(zhuǎn)錄反應(yīng)
        3.3.4 實時熒光定量PCR
    3.4 結(jié)果與分析
        3.4.1 家蠶染病情況確認
        3.4.2 RNA的提取及質(zhì)量檢測
        3.4.3 蛻皮激素相關(guān)基因的篩選與鑒定
        3.4.4 保幼激素相關(guān)基因的篩選與鑒定
    3.5 本章討論
第4章 FAMeT-2 的鑒定與功能分析
    4.1 引言
    4.2 實驗材料與試劑
        4.2.1 材料與試劑
        4.2.2 儀器與設(shè)備
        4.2.3 試劑的配制
    4.3 實驗方法
        4.3.1 FAMeT-2 基因的組織差異性表達
        4.3.2 FAMeT-2 基因生物信息學分析
        4.3.3 FAMeT-2 基因克隆與原核表達載體構(gòu)建
        4.3.4 重組蛋白的表達與鑒定
        4.3.5 FAMeT-2的RNAi
        4.3.6 FAMeT-2 的過表達
    4.4 結(jié)果與分析
        4.4.1 FAMeT-2 基因的組織差異性表達
        4.4.2 FAMeT-2 基因的生物信息學分析
        4.4.3 FAMeT-2 基因克隆及原核表達載體構(gòu)建
        4.4.4 FAMeT-2 蛋白的誘導(dǎo)表達與鑒定
        4.4.5 FAMeT-2的RNAi分析
        4.4.6 FAMeT-2 的過表達分析
    4.5 本章討論
結(jié)論
參考文獻
攻讀碩士學位期間發(fā)表的學位論文
致謝



本文編號：3751747