N-�；呓z氨酸內(nèi)酯(AHL)作為革蘭氏陰性菌的群體感應信號分子,能夠誘導植物的生理活動,調(diào)控植物的生長發(fā)育與抗病性等等。CNGC2作為擬南芥的質(zhì)膜鈣離子通道對于植物的生長發(fā)育等方面有著至關(guān)重要的作用。本研究通過植物生理學、分子生物學、細胞生物學等方面來探究CNGC2參與植物對3OC8-HSL的誘導響應,通過RNA測序的方法對3OC8-HSL誘導植物抗病性過程中擬南芥轉(zhuǎn)錄組的變化進行了分析,為新型生物農(nóng)藥的開發(fā)研究奠定理論基礎(chǔ),提供試驗證據(jù)。本試驗利用CNGC2的功能缺失突變體dnd1來探究AHL所誘導的植物生理變化是否與CNGC2有關(guān)。通過擬南芥的根長表型,抗病性、鈣離子水平三個方面進行檢測。結(jié)果發(fā)現(xiàn)3OC8-HSL處理擬南芥野生型能夠顯著的促進根長生長、增強植株抗病性、提高細胞鈣離子水平;而dnd1型擬南芥則對3OC8-HSL的處理效應顯示出不敏感或處理結(jié)果相反,這都說明CNGC2在植物響應細菌AHL過程中起著重要作用。之后我們利用qRT-PCR分析了AHL對植物CNGC2基因的表達影響,結(jié)果顯示CNGC2基因能夠被病原菌的侵染誘導顯著上調(diào)表達,AHL本身雖不影響植物中CNGC2基...

【文章頁數(shù)】：48 頁

【學位級別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
符號說明
1 引言
    1.1 群體感應和群體感應信號分子AHLs
        1.1.1 群體感應
        1.1.2 群體感應信號分子AHLs
        1.1.3 AHL參與植物生長發(fā)育與抗逆反應
    1.2 鈣離子與CNGC2
        1.2.1 鈣離子在植物體內(nèi)的作用
        1.2.2 鈣離子在植物細胞中的分布
        1.2.3 植物細胞中的鈣離子通道
        1.2.4 鈣離子結(jié)合蛋白鈣調(diào)素(CaM)
        1.2.5 植物細胞內(nèi)的鈣信號
        1.2.6 環(huán)核苷酸門控陽離子通道CNGC2
        1.2.7 CNGC在植物體內(nèi)的作用
        1.2.8 CNGC2與環(huán)核苷酸
    1.3 激光掃描共聚焦顯微鏡
        1.3.1 激光掃描共聚焦顯微鏡研究的意義
        1.3.2 激光掃描共聚焦顯微鏡的功能
        1.3.3 激光掃描共聚焦顯微鏡的優(yōu)缺點
    1.4 實時定量熒光PCR的原理及應用
        1.4.1 實時定量熒光PCR的意義
        1.4.2 實時定量熒光PCR的原理
        1.4.3 實時定量熒光PCR的應用
    1.5 轉(zhuǎn)錄組測序分析的原理及應用
    1.6 課題研究的目的及意義
2 質(zhì)膜鈣通道基因CNGC2在植物響應細菌AHL中的功能分析
    2.1 材料
        2.1.1 植物材料
        2.1.2 細菌材料
        2.1.3 主要試劑與溶液配制
        2.1.4 儀器設(shè)備
    2.2 試驗方法
        2.2.1 擬南芥種子清洗
        2.2.2 擬南芥接種移苗
        2.2.3 病原菌活化
        2.2.4 病原菌在擬南芥中定殖菌數(shù)檢測
        2.2.5 擬南芥葉片抗病性檢測
        2.2.6 葉綠素含量檢測
        2.2.7 擬南芥幼苗培養(yǎng)
        2.2.8 Fluo-4AM染色前準備
        2.2.9 Fluo-4AM染色
        2.2.10 RNA提取前準備
        2.2.11 RNA提取
        2.2.12 反轉(zhuǎn)錄cDNA
        2.2.13 熒光實時定量PCR反應體系
    2.3 結(jié)果與分析
        2.3.1 CNGC2對植物感應AHL調(diào)控主根生長的響應
        2.3.2 CNGC2參與3OC8-HSL調(diào)控植物抗病性
        2.3.3 FLUO-4AM檢測CNGC2在AHL調(diào)控植物細胞鈣離子水平中的作用
        2.3.4 熒光實時定量PCR檢測3OC8-HSL對擬南芥中CNGC2基因表達的調(diào)控
    2.4 討論
3 AHL誘導植物抗病的轉(zhuǎn)錄組分析
    3.1 材料
        3.1.1 植物材料
        3.1.2 細菌材料
        3.1.3 試劑
        3.1.4 儀器
    3.2 方法
        3.2.1 擬南芥與軟腐病菌EC1的培養(yǎng)
        3.2.2 3OC8-HSL和EC1處理擬南芥
        3.2.3 mRNA的提取與純化
        3.2.4 cDNA文庫的構(gòu)建與轉(zhuǎn)錄組測序
        3.2.5 轉(zhuǎn)錄組測序
        3.2.6 數(shù)據(jù)分析
    3.3 結(jié)果
        3.3.1 軟腐病菌EC1侵染時間的選擇
        3.3.2 cDNA文庫質(zhì)量控制
        3.3.3 3OC8-HSL誘導擬南芥抵御軟腐菌EC1的差異表達基因分析
        3.3.4 3OC8-HSL所誘導的差異基因功能分析(GO)
        3.3.5 3OC8-HSL所誘導的差異基因功能分析(KEGG)
        3.3.6 3OC8-HSL誘導抗病的差異表達基因富集分析
    3.4 討論
4 結(jié)論
參考文獻
作者簡歷
致謝



本文編號：3747527