細(xì)胞外突（cell protrusions）根據(jù)形狀分為片狀偽足、絲狀偽足等,常見(jiàn)于細(xì)胞遷移和吞噬。在細(xì)胞遷移和吞噬過(guò)程中,細(xì)胞通過(guò)成核促進(jìn)因子如WAVE、WASP等激活肌動(dòng)蛋白成核復(fù)合物Arp2/3或formins,生成網(wǎng)狀或絲狀肌動(dòng)蛋白并引起肌動(dòng)蛋白聚合,以此提供細(xì)胞外突的力。研究發(fā)現(xiàn),除了肌動(dòng)蛋白聚合通路外,細(xì)胞外突還能夠被網(wǎng)格蛋白重鏈（Clathrin heavy chain,CHC）抑制。網(wǎng)格蛋白在胞吞作用中研究較為廣泛,但其在外突機(jī)制的研究比較少。有報(bào)道認(rèn)為蛻皮激素（20-hydroxyecdysone,20E）能夠促進(jìn)昆蟲(chóng)免疫細(xì)胞的吞噬作用并加速血細(xì)胞運(yùn)動(dòng),但其中的分子機(jī)制未知。棉鈴蟲(chóng)（Helicoverpa armigera）是一種代表性的重要農(nóng)業(yè)害蟲(chóng),本論文研究以棉鈴蟲(chóng)為材料,探究20E誘導(dǎo)細(xì)胞外突的分子機(jī)制。在本研究中,首先使用20E處理棉鈴蟲(chóng)6齡早期幼蟲(chóng),通過(guò)電鏡對(duì)血細(xì)胞形態(tài)進(jìn)行觀察,發(fā)現(xiàn)20E處理后的血細(xì)胞產(chǎn)生外突,而未經(jīng)20E處理的血細(xì)胞沒(méi)有此現(xiàn)象。隨后運(yùn)用熒光顯微鏡觀察,結(jié)果表明F-actin的表型與細(xì)胞形態(tài)一致,表現(xiàn)為向外突出,據(jù)此初步認(rèn)為20E能夠促進(jìn)血... 

【文章頁(yè)數(shù)】：57 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
ABSTRACT
第一章 引言
    1.1 細(xì)胞外突及其功能
        1.1.1 細(xì)胞外突
        1.1.2 細(xì)胞的吞噬與遷移
    1.2 肌動(dòng)蛋白及其聚合的機(jī)制
    1.3 網(wǎng)格蛋白
        1.3.1 網(wǎng)格蛋白的結(jié)構(gòu)與功能
        1.3.2 網(wǎng)格蛋白與細(xì)胞外突
    1.4 20E與細(xì)胞免疫
        1.4.1 昆蟲(chóng)的先天免疫
        1.4.2 昆蟲(chóng)蛻皮激素與先天免疫
    1.5 研究現(xiàn)狀與意義
第二章 材料與方法
    2.1 實(shí)驗(yàn)材料
        2.1.1 實(shí)驗(yàn)蟲(chóng)體及飼養(yǎng)
        2.1.2 實(shí)驗(yàn)所用試劑
        2.1.3 實(shí)驗(yàn)儀器
        2.1.4 試劑配方
    2.2 實(shí)驗(yàn)方法
        2.2.1 棉鈴蟲(chóng)血細(xì)胞RNA的提取
        2.2.2 以RNA為模板合成第一鏈c DNA
        2.2.3 引物設(shè)計(jì)與合成
        2.2.4 PCR擴(kuò)增
        2.2.5 PCR產(chǎn)物回收
        2.2.6 載體質(zhì)粒的提取
        2.2.7 構(gòu)建重組載體
        2.2.8 重組質(zhì)粒的誘導(dǎo)表達(dá)
        2.2.9 蛋白純化(包涵體)
        2.2.10 弗氏佐劑的包埋
        2.2.11 dsRNA的合成與純化
        2.2.12 細(xì)胞培養(yǎng)
        2.2.13 細(xì)胞的轉(zhuǎn)染
        2.2.15 棉鈴蟲(chóng)血細(xì)胞的蛋白提取
        2.2.16 Western blot
        2.2.17 免疫共沉淀
        2.2.18 電鏡制片
        2.2.19 免疫組化
第三章 實(shí)驗(yàn)結(jié)果
    3.1 20E誘導(dǎo)棉鈴蟲(chóng)血細(xì)胞外突的電鏡觀察
    3.2 下調(diào)CHC及 CLC對(duì)血細(xì)胞形態(tài)的影響
    3.3 棉鈴蟲(chóng)CHC、CLC、Arp2/3 抗體的制備
        3.3.1 CHC、CLC、Arp2/3 的獲取
        3.3.2 CHC、CLC、Arp2/3 的表達(dá)與純化
        3.3.3 CHC、CLC、Arp2/3 的抗體驗(yàn)證
    3.4 CHC、CLC、Arp2/3 的蛋白表達(dá)模式
    3.5 20E誘導(dǎo)網(wǎng)格蛋白的表達(dá)
    3.6 20E誘導(dǎo)下CLC與 Arp2/3 的相互作用
    3.7 CLC與 Arp2/3 的亞細(xì)胞定位
第四章 討論與總結(jié)
參考文獻(xiàn)
致謝



本文編號(hào)：3720381