由致病疫霉（Phytophthora infestans,P.infestans）引起的晚疫�。≒otato late blight,PLB）是世界范圍內(nèi)馬鈴薯的毀滅性病害之一。本研究采集并分離、純化來自于云南省昆明市馬鈴薯主產(chǎn)區(qū)的PLB病樣,利用形態(tài)學和ITS序列定種后,確定其染色體倍性、交配型、線粒體單倍型、毒性和甲霜靈敏感性。選取其中5株菌株,利用改良的卵孢子萌發(fā)方法得到有性生殖F₁代群體;然后對F₁代群體的表型（交配型、致病性、甲霜靈敏感性）和基因型（染色體倍性、線粒體單倍型、SSR標記）進行測定并用相關性分析解析基因型和表型之間的聯(lián)系。在得到上述結果的基礎上,利用1對P.infestans親本誘導有性生殖得到的F₁代交配型分離群體（A1、A2、A1A2、自育型）進行全基因組重測序和比較分析。本研究的主要結果有:1.2017年7月中旬,在云南省昆明市尋甸縣和嵩明縣不同馬鈴薯品種上采集晚疫病發(fā)病葉片,分離純化和鑒定得到共19株P.infestans。對峙培養(yǎng)后鑒定出A1交配型3株,A2交配型12株,A1A2交配型1... 

【文章頁數(shù)】：83 頁

【學位級別】：碩士

【文章目錄】：
中文摘要
Abstract
術語及符號說明
第一章 緒論
    1.1 馬鈴薯晚疫病概述
        1.1.1 馬鈴薯重要性、晚疫病的危害癥狀及流行方式
        1.1.2 馬鈴薯晚疫病菌的分類地位及生活史
    1.2 馬鈴薯晚疫病菌有性生殖的概述
        1.2.1 馬鈴薯晚疫病菌有性生殖的發(fā)生條件
        1.2.2 馬鈴薯晚疫病菌卵孢子萌發(fā)條件
    1.3 馬鈴薯晚疫病菌群體結構的概述
        1.3.1 P.infestans表型的研究
            1.3.1.1 P.infestans交配型的研究
            1.3.1.2 P.infestans抗藥性的研究
            1.3.1.3 P.infestans致病性和致病力的研究
        1.3.2 P.infestans基因型的研究
            1.3.2.1 P.infestans基于胞質(zhì)線粒體DNA單倍型的研究
            1.3.2.2 P.infestans基于蛋白質(zhì)水平的同工酶的研究
            1.3.2.3 P.infestans基于核基因組的限制性片段長度多態(tài)性的研究
            1.3.2.4 P.infestans基于核基因組的擴增片段長度多態(tài)性的研究
            1.3.2.5 P.infestans基于核基因組的微衛(wèi)星標記的研究
            1.3.2.6 P.infestans基于核基因組的單核苷酸多態(tài)性的研究
    1.4 相關性分析及基于全基因組的比較分析
    1.5 本研究內(nèi)容及目的
第二章 P.infestans有性生殖后代誘導方法研究
    2.1 P.infestans分離與鑒定
        2.1.1 材料及方法
            2.1.1.1 病樣采集
            2.1.1.2 培養(yǎng)基
            2.1.1.3 病原菌的分離純化
            2.1.1.4 病原菌形態(tài)學及分子生物學鑒定和保存
            2.1.1.5 交配型的測定
        2.1.2 結果與分析
    2.2 P.infestans線粒體DNA單倍型的測定
        2.2.1 實驗材料
        2.2.2 實驗方法
            2.2.2.1 P.infestans基因組DNA的提取
            2.2.2.2 DNA質(zhì)量的檢測
            2.2.2.3 P.infestans線粒體DNA單倍型的測定
        2.2.3 結果與分析
        2.2.4 討論
    2.3 P.infestans卵孢子萌發(fā)條件的優(yōu)化
        2.3.1 實驗材料
        2.3.2 實驗方法
            2.3.2.1 卵孢子的收集
            2.3.2.2 卵孢子萌發(fā)條件
            2.3.2.3 卵孢子活性測定方法
        2.3.3 結果與分析
            2.3.3.1 卵孢子產(chǎn)生情況及無性結構死亡處理
            2.3.3.2 卵孢子活力測定的結果
            2.3.3.3 卵孢子的萌發(fā)率
        2.3.4 討論
第三章 P.infestans有性生殖F_1 代群體結構表型特點及分析
    3.1 實驗材料
        3.1.1 供試菌株
        3.1.2 培養(yǎng)基
        3.1.3 鑒定寄主
        3.1.4 實驗試劑
    3.2 實驗方法
        3.2.1 染色體倍性測定的方法
        3.2.2 P.infestans有性生殖F_1 代菌株交配型測定的方法
        3.2.3 P.infestans有性生殖F_1 代菌株甲霜靈敏感性測定的方法
        3.2.4 P.infestans有性生殖F_1 代菌株毒性測定的方法
            3.2.4.1 鑒別寄主的準備
            3.2.4.2 供試菌株的準備
            3.2.4.3 人工接種的方法
    3.3 結果與分析
        3.3.1 P.infestans有性生殖F_1 代菌株核染色體倍性的測定結果
        3.3.2 P.infestans有性生殖F_1 代菌株交配型的測定結果
        3.3.3 P.infestans有性生殖F_1 代菌株甲霜靈敏感性的測定結果
        3.3.4 P.infestans有性生殖F_1 代菌株毒性的測定結果
    3.4 討論
第四章 P.infestans有性生殖F_1 代菌株基因型及基因型與表型的相關性分析
    4.1 實驗材料
        4.1.1 供試菌株
        4.1.2 培養(yǎng)基
        4.1.3 供試引物
    4.2 實驗方法
        4.2.1 P.infestans有性生殖F_1 代菌株基因組DNA的提取
        4.2.2 P.infestans有性生殖F_1 代菌株線粒體DNA單倍型的測定
        4.2.3 PCR反應體系和擴增程序
        4.2.4 數(shù)據(jù)統(tǒng)計及分析
        4.2.5 P.infestans有性生殖F_1 代群體基因型和表型的關聯(lián)分析
    4.3 結果與分析
        4.3.1 P.infestans有性生殖F_1 代菌株線粒體單倍型的測定結果
        4.3.2 P.infestans有性生殖F_1 代菌株SSR基因型結果
        4.3.3 P.infestans有性生殖F_1 代菌株表型與基因型結果
    4.4 討論
第五章 P.infestans有性生殖F_1 代交配型分離群體比較基因組分析
    5.1 實驗材料
    5.2 實驗方法
        5.2.1 有性生殖F_1 代基因組提取
        5.2.2 有性生殖F_1 代全基因組序列測定、編輯、拼接和注釋
        5.2.3 有性生殖F_1 代群體全基因組變異檢測
        5.2.4 基于10 個全基因組序列的聚類分析
        5.2.5 基于4個BSA群體的PCA分析
    5.3 實驗結果
        5.3.1 有性生殖F_1 代基因組提取的結果檢測
        5.3.2 有性生殖F_1 代全基因組序列測定、編輯、拼接和注釋的結果
        5.3.3 有性生殖F_1 代全基因組變異檢測的結果
    5.4 討論
第六章 全文總結
參考文獻
攻讀學位期間研究成果
致謝


【參考文獻】：
期刊論文
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博士論文
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碩士論文
[1]云南省馬鈴薯晚疫病菌群體遺傳結構及其有性生殖特點[D]. 繆云琴.云南師范大學 2014
[2]馬鈴薯晚疫病菌線粒體單倍型分析及其對殺菌劑敏感性測定[D]. 陳良華.河北農(nóng)業(yè)大學 2009
[3]馬鈴薯晚疫病菌SSR基因型多樣性及其有性F1代菌株分析[D]. 趙冬梅.河北農(nóng)業(yè)大學 2009
[4]我國大豆疫霉根腐病菌無毒基因Avr1b的遺傳多樣性研究[D]. 朱曉瑩.西北農(nóng)林科技大學 2008
[5]云南馬鈴薯晚疫病菌群體的遺傳多樣性研究[D]. 楊素祥.云南師范大學 2006
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本文編號：3720323