由致病疫霉（Phytophthora infestans,P.infestans）引起的晚疫�。≒otato late blight,PLB）是世界范圍內(nèi)馬鈴薯的毀滅性病害之一。本研究采集并分離、純化來自于云南省昆明市馬鈴薯主產(chǎn)區(qū)的PLB病樣,利用形態(tài)學(xué)和ITS序列定種后,確定其染色體倍性、交配型、線粒體單倍型、毒性和甲霜靈敏感性。選取其中5株菌株,利用改良的卵孢子萌發(fā)方法得到有性生殖F₁代群體;然后對(duì)F₁代群體的表型（交配型、致病性、甲霜靈敏感性）和基因型（染色體倍性、線粒體單倍型、SSR標(biāo)記）進(jìn)行測(cè)定并用相關(guān)性分析解析基因型和表型之間的聯(lián)系。在得到上述結(jié)果的基礎(chǔ)上,利用1對(duì)P.infestans親本誘導(dǎo)有性生殖得到的F₁代交配型分離群體（A1、A2、A1A2、自育型）進(jìn)行全基因組重測(cè)序和比較分析。本研究的主要結(jié)果有:1.2017年7月中旬,在云南省昆明市尋甸縣和嵩明縣不同馬鈴薯品種上采集晚疫病發(fā)病葉片,分離純化和鑒定得到共19株P(guān).infestans。對(duì)峙培養(yǎng)后鑒定出A1交配型3株,A2交配型12株,A1A2交配型1... 

【文章頁數(shù)】：83 頁

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【文章目錄】：
中文摘要
Abstract
術(shù)語及符號(hào)說明
第一章 緒論
    1.1 馬鈴薯晚疫病概述
        1.1.1 馬鈴薯重要性、晚疫病的危害癥狀及流行方式
        1.1.2 馬鈴薯晚疫病菌的分類地位及生活史
    1.2 馬鈴薯晚疫病菌有性生殖的概述
        1.2.1 馬鈴薯晚疫病菌有性生殖的發(fā)生條件
        1.2.2 馬鈴薯晚疫病菌卵孢子萌發(fā)條件
    1.3 馬鈴薯晚疫病菌群體結(jié)構(gòu)的概述
        1.3.1 P.infestans表型的研究
            1.3.1.1 P.infestans交配型的研究
            1.3.1.2 P.infestans抗藥性的研究
            1.3.1.3 P.infestans致病性和致病力的研究
        1.3.2 P.infestans基因型的研究
            1.3.2.1 P.infestans基于胞質(zhì)線粒體DNA單倍型的研究
            1.3.2.2 P.infestans基于蛋白質(zhì)水平的同工酶的研究
            1.3.2.3 P.infestans基于核基因組的限制性片段長(zhǎng)度多態(tài)性的研究
            1.3.2.4 P.infestans基于核基因組的擴(kuò)增片段長(zhǎng)度多態(tài)性的研究
            1.3.2.5 P.infestans基于核基因組的微衛(wèi)星標(biāo)記的研究
            1.3.2.6 P.infestans基于核基因組的單核苷酸多態(tài)性的研究
    1.4 相關(guān)性分析及基于全基因組的比較分析
    1.5 本研究?jī)?nèi)容及目的
第二章 P.infestans有性生殖后代誘導(dǎo)方法研究
    2.1 P.infestans分離與鑒定
        2.1.1 材料及方法
            2.1.1.1 病樣采集
            2.1.1.2 培養(yǎng)基
            2.1.1.3 病原菌的分離純化
            2.1.1.4 病原菌形態(tài)學(xué)及分子生物學(xué)鑒定和保存
            2.1.1.5 交配型的測(cè)定
        2.1.2 結(jié)果與分析
    2.2 P.infestans線粒體DNA單倍型的測(cè)定
        2.2.1 實(shí)驗(yàn)材料
        2.2.2 實(shí)驗(yàn)方法
            2.2.2.1 P.infestans基因組DNA的提取
            2.2.2.2 DNA質(zhì)量的檢測(cè)
            2.2.2.3 P.infestans線粒體DNA單倍型的測(cè)定
        2.2.3 結(jié)果與分析
        2.2.4 討論
    2.3 P.infestans卵孢子萌發(fā)條件的優(yōu)化
        2.3.1 實(shí)驗(yàn)材料
        2.3.2 實(shí)驗(yàn)方法
            2.3.2.1 卵孢子的收集
            2.3.2.2 卵孢子萌發(fā)條件
            2.3.2.3 卵孢子活性測(cè)定方法
        2.3.3 結(jié)果與分析
            2.3.3.1 卵孢子產(chǎn)生情況及無性結(jié)構(gòu)死亡處理
            2.3.3.2 卵孢子活力測(cè)定的結(jié)果
            2.3.3.3 卵孢子的萌發(fā)率
        2.3.4 討論
第三章 P.infestans有性生殖F_1 代群體結(jié)構(gòu)表型特點(diǎn)及分析
    3.1 實(shí)驗(yàn)材料
        3.1.1 供試菌株
        3.1.2 培養(yǎng)基
        3.1.3 鑒定寄主
        3.1.4 實(shí)驗(yàn)試劑
    3.2 實(shí)驗(yàn)方法
        3.2.1 染色體倍性測(cè)定的方法
        3.2.2 P.infestans有性生殖F_1 代菌株交配型測(cè)定的方法
        3.2.3 P.infestans有性生殖F_1 代菌株甲霜靈敏感性測(cè)定的方法
        3.2.4 P.infestans有性生殖F_1 代菌株毒性測(cè)定的方法
            3.2.4.1 鑒別寄主的準(zhǔn)備
            3.2.4.2 供試菌株的準(zhǔn)備
            3.2.4.3 人工接種的方法
    3.3 結(jié)果與分析
        3.3.1 P.infestans有性生殖F_1 代菌株核染色體倍性的測(cè)定結(jié)果
        3.3.2 P.infestans有性生殖F_1 代菌株交配型的測(cè)定結(jié)果
        3.3.3 P.infestans有性生殖F_1 代菌株甲霜靈敏感性的測(cè)定結(jié)果
        3.3.4 P.infestans有性生殖F_1 代菌株毒性的測(cè)定結(jié)果
    3.4 討論
第四章 P.infestans有性生殖F_1 代菌株基因型及基因型與表型的相關(guān)性分析
    4.1 實(shí)驗(yàn)材料
        4.1.1 供試菌株
        4.1.2 培養(yǎng)基
        4.1.3 供試引物
    4.2 實(shí)驗(yàn)方法
        4.2.1 P.infestans有性生殖F_1 代菌株基因組DNA的提取
        4.2.2 P.infestans有性生殖F_1 代菌株線粒體DNA單倍型的測(cè)定
        4.2.3 PCR反應(yīng)體系和擴(kuò)增程序
        4.2.4 數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)及分析
        4.2.5 P.infestans有性生殖F_1 代群體基因型和表型的關(guān)聯(lián)分析
    4.3 結(jié)果與分析
        4.3.1 P.infestans有性生殖F_1 代菌株線粒體單倍型的測(cè)定結(jié)果
        4.3.2 P.infestans有性生殖F_1 代菌株SSR基因型結(jié)果
        4.3.3 P.infestans有性生殖F_1 代菌株表型與基因型結(jié)果
    4.4 討論
第五章 P.infestans有性生殖F_1 代交配型分離群體比較基因組分析
    5.1 實(shí)驗(yàn)材料
    5.2 實(shí)驗(yàn)方法
        5.2.1 有性生殖F_1 代基因組提取
        5.2.2 有性生殖F_1 代全基因組序列測(cè)定、編輯、拼接和注釋
        5.2.3 有性生殖F_1 代群體全基因組變異檢測(cè)
        5.2.4 基于10 個(gè)全基因組序列的聚類分析
        5.2.5 基于4個(gè)BSA群體的PCA分析
    5.3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果
        5.3.1 有性生殖F_1 代基因組提取的結(jié)果檢測(cè)
        5.3.2 有性生殖F_1 代全基因組序列測(cè)定、編輯、拼接和注釋的結(jié)果
        5.3.3 有性生殖F_1 代全基因組變異檢測(cè)的結(jié)果
    5.4 討論
第六章 全文總結(jié)
參考文獻(xiàn)
攻讀學(xué)位期間研究成果
致謝


【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]馬鈴薯晚疫病菌有性生殖發(fā)生對(duì)無毒基因Avr-blb1多樣性及菌株毒性的影響[J]. 梁靜思,王偉偉,單慧,楊洋,李燦輝,唐唯.  西南農(nóng)業(yè)學(xué)報(bào). 2019(01)
[2]云南省昆明市馬鈴薯晚疫病菌甲霜靈抗藥性監(jiān)測(cè)[J]. 霍超,曹繼芬,王昌命,趙志堅(jiān).  安徽農(nóng)業(yè)科學(xué). 2018(12)
[3]致病疫霉RXLR效應(yīng)蛋白相關(guān)研究進(jìn)展[J]. 王洪洋,秦麗娟,唐唯,田振東.  生物技術(shù)通報(bào). 2018(02)
[4]甘肅省馬鈴薯致病疫霉交配型組成及其對(duì)甲霜靈的抗藥性[J]. 張大為,惠娜娜,王立,李繼平,朱小瓊,國(guó)立耘.  西北農(nóng)業(yè)學(xué)報(bào). 2014(06)
[5]四川馬鈴薯晚疫病菌交配型、生理小種、甲霜靈敏感性及mtDNA單倍型組成分析[J]. 李洪浩,彭化賢,席亞東,王曉黎,劉波微.  中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué). 2013(04)
[6]馬鈴薯晚疫病發(fā)病程度田間觀察記錄標(biāo)準(zhǔn)的探討[J]. 李文娟,FORBES Gregory A.,謝開云.  中國(guó)馬鈴薯. 2012(04)
[7]北方五省(區(qū))馬鈴薯晚疫病菌對(duì)甲霜靈和精甲霜靈的敏感性檢測(cè)[J]. 王文橋,王麗,韓秀英,張小風(fēng),馬志強(qiáng),孟潤(rùn)杰.  植物保護(hù). 2012(03)
[8]不同寄主致病疫霉菌群體遺傳結(jié)構(gòu)的SSR比較分析[J]. 陳昌盛,李本金,黃燦強(qiáng),許旭萍,陳慶河,翁啟勇.  中國(guó)農(nóng)學(xué)通報(bào). 2010(19)
[9]中國(guó)部分地區(qū)馬鈴薯寄主上致病疫霉SSR基因型分析[J]. 姚國(guó)勝,楊志輝,朱杰華,桂秀梅,陶晡.  菌物學(xué)報(bào). 2009(02)
[10]云南致病疫霉交配型、甲霜靈敏感性、mtDNA單倍型及其群體演替研究[J]. 趙志堅(jiān),曹繼芬,李燦輝,孫道旺,楊明英,王軍.  中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué). 2007(04)

博士論文
[1]我國(guó)西北馬鈴薯主產(chǎn)區(qū)晚疫病菌群體遺傳多樣性研究[D]. 田月娥.西北農(nóng)林科技大學(xué) 2015
[2]大豆疫霉菌無毒基因的克隆及馬鈴薯抗病品種紫花白抗晚疫病機(jī)制的研究[D]. 娜仁.內(nèi)蒙古農(nóng)業(yè)大學(xué) 2013
[3]中國(guó)馬鈴薯晚疫病菌群體遺傳結(jié)構(gòu)研究[D]. 朱杰華.河北農(nóng)業(yè)大學(xué) 2004

碩士論文
[1]云南省馬鈴薯晚疫病菌群體遺傳結(jié)構(gòu)及其有性生殖特點(diǎn)[D]. 繆云琴.云南師范大學(xué) 2014
[2]馬鈴薯晚疫病菌線粒體單倍型分析及其對(duì)殺菌劑敏感性測(cè)定[D]. 陳良華.河北農(nóng)業(yè)大學(xué) 2009
[3]馬鈴薯晚疫病菌SSR基因型多樣性及其有性F1代菌株分析[D]. 趙冬梅.河北農(nóng)業(yè)大學(xué) 2009
[4]我國(guó)大豆疫霉根腐病菌無毒基因Avr1b的遺傳多樣性研究[D]. 朱曉瑩.西北農(nóng)林科技大學(xué) 2008
[5]云南馬鈴薯晚疫病菌群體的遺傳多樣性研究[D]. 楊素祥.云南師范大學(xué) 2006
[6]馬鈴薯晚疫病菌卵孢子生物學(xué)特性的研究[D]. 馬利松.河北農(nóng)業(yè)大學(xué) 2003



本文編號(hào)：3720323