本文的研究內(nèi)容是利用結(jié)構(gòu)生物學(xué)方法研究丁香假單胞菌番茄變種DC3000肽脯酰異構(gòu)酶（PSPTO-PPIase）的晶體結(jié)構(gòu)。通過生物信息學(xué)方法分析可知,PSPTO-PPIase作為肽脯酰異構(gòu)酶（PPIase）超家族FKBP亞家族的一員,具有催化靶蛋白肽鏈中脯氨酸順反構(gòu)象轉(zhuǎn)化的活性,并與FK506或者雷帕霉素這類免疫抑制劑具有相互作用。我們從丁香假單胞菌番茄變種DC3000基因組中克隆到PSPTO-PPIase基因,利用PHAT2表達載體在大腸桿菌中表達蛋白,通過親和層析、離子交換和排阻色譜三步純化方法獲得純度95%以上的PSPTO-PPIase蛋白,經(jīng)過結(jié)晶篩選與晶體優(yōu)化,最終利用X-射線晶體學(xué)方法解析了分辨率達1.6?的PSPTO-PPIase蛋白C端部分的三維結(jié)構(gòu)。通過與同源蛋白三維結(jié)構(gòu)的比較發(fā)現(xiàn),PSPTO-PPIase蛋白C端部分尤其是疏水的活性中心區(qū)域,具有典型的FKBP結(jié)構(gòu)域特征;生化實驗也證實,PSPTO-PPIase可以結(jié)合FK506,解離常數(shù)是1.45uM,說明PSPTO-PPIase是FKBP家族的一員。PSPTO-PPIase C端結(jié)構(gòu)域與同源蛋白具有最大結(jié)構(gòu)差異的... 

【文章頁數(shù)】：72 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
ABSTRACT
英文縮寫一覽表
前言
第一篇 文獻綜述
    第一章 PPIASE概述
        1.1 PPIASE簡介
        1.2 PPIASE的催化原理
        1.3 PPIASE的分類、結(jié)構(gòu)與功能
        1.4 丁香假單胞菌DC3000 PPIASE酶
    第二章 蛋白質(zhì)晶體學(xué)概述
        2.1 蛋白質(zhì)晶體學(xué)簡介
        2.2 蛋白質(zhì)結(jié)晶原理
        2.3 蛋白質(zhì)結(jié)晶方法
        2.4 蛋白質(zhì)晶體結(jié)構(gòu)解析基本原理
第二篇 研究內(nèi)容
    第一章 PSPTO-PPIASE重組表達載體構(gòu)建和蛋白表達、純化
        1.1 材料與方法
        1.2 方法
        1.3 結(jié)果與分析
        1.4 小結(jié)
    第二章 PSPTO-PPIASE蛋白的結(jié)晶與結(jié)構(gòu)解析和修正
        2.1 PSPTO-PPIASE蛋白的結(jié)晶與數(shù)據(jù)收集
        2.2 PSPTO-PPIASE的結(jié)構(gòu)解析與修正
        2.3 小結(jié)
    第三章 PSPTO-PPIASE蛋白的結(jié)構(gòu)分析以及生化功能
        3.1 整體結(jié)構(gòu)以及FKBP結(jié)構(gòu)域活性中心的描述
        3.2 同源蛋白FKBP結(jié)構(gòu)域的結(jié)構(gòu)比較
        3.3 PSPTO-PPIASE和FK506的相互作用
        3.4 表面等離子共振儀檢測PSPTO-PPIASE與FK506分子的相互作用
        3.5 小結(jié)
結(jié)論
討論
文獻
附錄A 緩沖液配方及核酸膠、SDS-PAGE制備
附錄B DNA凝膠回收試劑盒操作流程
附錄C 質(zhì)粒小提試劑盒操作流程
附錄D PRE-CRYSTALLIZATION TEST使用流程
作者簡介
致謝


【參考文獻】：
期刊論文
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本文編號：3697027