【目的】通過(guò)易錯(cuò)PCR技術(shù)克隆一種新的Cry1Ab13基因,以利用Cry類Bt基因提高作物抗蟲性,豐富基因資源�！痉椒ā坷靡族e(cuò)PCR技術(shù)對(duì)蘇云金芽孢桿菌Cry1Ab13基因進(jìn)行隨機(jī)誘變,構(gòu)建突變體文庫(kù),篩選獲得突變株Cry1Ab13-1,將該基因構(gòu)建原核重組表達(dá)載體后轉(zhuǎn)化到大腸桿菌中進(jìn)行異源表達(dá),并利用表達(dá)的目的蛋白進(jìn)行抗蟲鑒定�！窘Y(jié)果】序列分析表明,突變株Cry1Ab13-1基因序列全長(zhǎng)2 036bp,與原始?jí)A基序列的一致性為97.79%,有2個(gè)堿基發(fā)生突變,導(dǎo)致該基因編碼的氨基酸序列中有2個(gè)氨基酸改變,分別是第130位由脯氨酸變成絲氨酸,第383位由絲氨酸變成蘇氨酸;改變后的氨基酸序列與原始氨基酸序列一致性為96.97%。在線分析表明,該基因與已知過(guò)敏源的序列同源性低于35%,不存在致敏性。SDS-PAGE電泳分析表明,表達(dá)蛋白分子質(zhì)量大小為79.5ku,與預(yù)期結(jié)果相符�？瓜x鑒定表明,處理72h時(shí)表達(dá)的目的蛋白對(duì)小菜蛾（Plutella xyllostella）幼蟲的致死率達(dá)87.88%,明顯高于未突變基因?qū)φ战M的幼蟲死亡率;對(duì)亞洲玉米螟（Ostrinia nubilalis）幼... 

【文章頁(yè)數(shù)】：8 頁(yè)

【文章目錄】：
1 材料與方法
    1.1 材料
        1.1.1 菌株和質(zhì)粒
        1.1.2 酶和試劑
        1.1.3 供試?yán)ハx
    1.2 方法
        1.2.1 易錯(cuò)PCR擴(kuò)增
        1.2.2 突變體文庫(kù)的構(gòu)建
        1.2.3 原核表達(dá)載體的構(gòu)建
        1.2.4 突變基因在大腸桿菌中的誘導(dǎo)表達(dá)
    1.3 殺蟲活性的生物鑒定
        1.3.1 小菜蛾幼蟲殺蟲活性的鑒定
        1.3.2 亞洲玉米螟幼蟲殺蟲活性鑒定
2 結(jié)果與分析
    2.1 Cry1Ab13基因的易錯(cuò)PCR擴(kuò)增
    2.2 Cry1Ab13突變基因的序列分析
    2.3 突變菌株原核表達(dá)載體的構(gòu)建
    2.4 突變菌株在大腸桿菌中的表達(dá)
    2.5 Cry1Ab13-1蛋白殺蟲活性的生物鑒定
        2.5.1 小菜蛾殺蟲活性鑒定
        2.5.2 亞洲玉米螟殺蟲活性鑒定
3 討論


【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
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