蟲霉門（Entomophthoromycota）真菌能夠通過主動(dòng)彈射分生孢子的方式侵染寄主,這一獨(dú)特能力使得蟲霉能擊中和粘住難以碰上的昆蟲目標(biāo),對(duì)蟲霉的侵染、定殖、宿存和形成流行病至關(guān)重要。新蚜蟲癘霉（Pandoraneoaphidis）是全世界分布最廣泛的蚜蟲專化病原真菌,常引發(fā)各種蚜蟲的流行病,在多種蚜蟲自然控制中發(fā)揮關(guān)鍵作用,但其在分子生物學(xué)方面的研究進(jìn)展一直停滯不前,導(dǎo)致其在寄主�；怨δ芑虻睦碚撗芯亢蜕缿�(yīng)用方面的潛力受到了極大的限制。本課題以新蚜蟲癘霉為研究對(duì)象,利用RNA-seq測(cè)序技術(shù)和代謝組檢測(cè)技術(shù)對(duì)彈孢前（Before discharge,BD）、彈孢高峰期（During discharge,DD）及彈孢后（After discharge,AD）3個(gè)階段的菌絲進(jìn)行分析。通過對(duì)不同狀態(tài)下菌絲中差異表達(dá)基因的分析,篩選可能與孢子主動(dòng)彈射相關(guān)的基因,同時(shí)利用電轉(zhuǎn)化法對(duì)適用于新蚜蟲癘霉的遺傳轉(zhuǎn)化體系的構(gòu)建進(jìn)行了嘗試,以期為后續(xù)的基因功能研究打下基礎(chǔ)。主要結(jié)果如下:一、新蚜蟲癘霉彈孢前中后階段菌絲的RNA-seq測(cè)序通過RNA-seq技術(shù)對(duì)新蚜蟲癘霉3種狀態(tài)菌絲BD,DD,... 

【文章來(lái)源】：中國(guó)計(jì)量大學(xué)浙江省

【文章頁(yè)數(shù)】：123 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【部分圖文】：

圖１．１蟲霉目真菌的侵染循環(huán)??Ｆｉｇｕｒｅ?１．１?Ｌｉｆｅ?ｃｙｃｌｅ?ｏｆ?ｅｎｔｏｍｏｐｈｔｈｏｒａｌｅａｎ?ｆｕｎｇｉ??在蟲霉的侵染過程中，蟲霉菌絲在體外的生長(zhǎng)表型是其形成流行病的關(guān)??

２．３?結(jié)果與分析??２．３．１樣本菌絲電鏡拍照結(jié)果??新蚜蟲癘霉通過主動(dòng)彈射孢子的方式釋放分生孢子，下圖（圖２．２）分別是新??蚜蟲癘霉彈孢前菌絲（ＢＤ）、彈孢高峰期菌絲（ＤＤ）與彈孢后菌絲（ＡＤ）的電鏡照??片。從圖中可以看出，處于ＢＤ狀態(tài)的菌絲較飽滿，正處于營(yíng)養(yǎng)生長(zhǎng)的旺盛時(shí)??期。ＤＤ狀態(tài)的菌絲除了飽滿的菌絲外，還有正在不斷生成的孢子，以及即將彈??射的孢子，Ｂ圖中箭頭處為孢子即將脫離菌絲的狀態(tài)。ＡＤ狀態(tài)的菌絲大多有孔??不完整，或呈絲狀，表明菌絲在完成孢子彈射、繁殖后代的任務(wù)后，各種生理??機(jī)能開始下降，臨近死亡。ＤＤ與ＢＤ狀態(tài)菌絲相比，除了正常營(yíng)養(yǎng)生長(zhǎng)所必需??的代謝與調(diào)控外的基因，與生殖相關(guān)的基因也在大量表達(dá)，尤其是與彈孢在相??關(guān)的基因的表達(dá)正處于高表達(dá)時(shí)期。由于ＡＤ狀態(tài)菌絲己趨于死亡，ＢＤ／ＤＤ狀??態(tài)菌絲與其相比

說明所提ＲＮＡ純度較好，且蛋白、多糖等有機(jī)物污染較少，符合ＲＮＡ－ｓｅｑ測(cè)??序樣本的要求。各�。�?ｐＬ產(chǎn)物跑瓊脂糖凝膠電泳，結(jié)果顯示９個(gè)樣本都有１８Ｓ??條帶（圖２．３），但其中ＡＤ１、ＡＤ２、ＡＤ３條帶相對(duì)較弱，可能與其所處生長(zhǎng)狀態(tài)??有關(guān)。可能是由于新蚜蟲癘霉物種特異性的原因，２８Ｓ條帶較弱。??表２．１?ＲＮＡ質(zhì)量檢測(cè)結(jié)果??Ｔａｂｌｅ?２．１?ＲＮＡ?ｔｅｓｔ?ｒｅｓｕｌｔｓ?ｗｉｔｈ?Ｎａｎｏｄｒｏｐ?２０００??符號(hào)?濃度（ｎｇ／ｆｔＬ）?ＯＤ２６０／２８０?體積（ｐＬ）?總量（Ｍｇ）??ＢＤ１?２４０．５２?２．３７?４５?１０．８２??ＢＤ２?５７８．３５?２．３３?４５?２６．０３??ＢＤ３?７３３．７０?２．３１?４５?３３．０２??

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]潮霉素B抗性為選擇標(biāo)記的整合型表達(dá)載體的構(gòu)建及在米根霉中的遺傳轉(zhuǎn)化[J]. 張旻,姜紹通,鄭娟,鄭志,李興江,潘麗軍,羅水忠.  生物工程學(xué)報(bào). 2015(08)
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[4]限制性內(nèi)切酶介導(dǎo)的玫煙色擬青霉原生質(zhì)轉(zhuǎn)化體系構(gòu)建[J]. 楊旭芬,應(yīng)盛華,馮明光.  浙江大學(xué)學(xué)報(bào)(農(nóng)業(yè)與生命科學(xué)版). 2006(06)
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博士論文
[1]球孢白僵菌熱激蛋白家族、Ca2+ATP激酶Pmr1、磷酸化酶Cdc14及腺苷酸環(huán)化酶的功能解析[D]. 王潔.浙江大學(xué) 2014
[2]蚜蟲專化性病原真菌（蟲霉目）隨寄主遷飛擴(kuò)散而傳播流行的生物學(xué)實(shí)證研究[D]. 陳春.浙江大學(xué) 2005

碩士論文
[1]基于新蚜蟲癘霉RNA-seq數(shù)據(jù)的內(nèi)參基因及產(chǎn)孢相關(guān)基因的篩選和驗(yàn)證[D]. 解廷娜.中國(guó)計(jì)量大學(xué) 2016
[2]幾株綠僵菌清除自由基活性物質(zhì)及代謝組學(xué)的研究[D]. 莊夢(mèng)敏.安徽農(nóng)業(yè)大學(xué) 2013
[3]雅致放射毛霉培養(yǎng)條件優(yōu)化及apt1基因的克隆表達(dá)[D]. 楊善巖.浙江工業(yè)大學(xué) 2012
[4]采后不同時(shí)期的草菇菌柄表達(dá)譜差異分析[D]. 鄢淑琴.福建農(nóng)林大學(xué) 2011



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