葡萄（Vitis L.）是世界上種植最廣泛且具有重要經(jīng)濟(jì)價(jià)值的果樹,葡萄霜霉菌可以感染葡萄的葉片、花序和幼嫩組織,導(dǎo)致其產(chǎn)量和品質(zhì)下降。效應(yīng)蛋白是由病原菌分泌的小分子量蛋白,在病原菌侵染植物的過程中起重要作用。目前,關(guān)于葡萄霜霉菌效應(yīng)因子及其與宿主間的相互作用機(jī)制報(bào)道較少。本課題組前期對(duì)陜西楊陵地區(qū)采集的一個(gè)葡萄霜霉菌菌株進(jìn)行了基因組測(cè)序分析,預(yù)測(cè)到31個(gè)編碼CRN蛋白的基因序列,在本氏煙草中瞬時(shí)表達(dá)克隆到的候選PvCRN基因,發(fā)現(xiàn)PvCRN11可以誘導(dǎo)本氏煙草葉片細(xì)胞死亡而PvCRN20可以抑制INF1誘導(dǎo)的本氏煙草葉片細(xì)胞死亡。本研究通過對(duì)PvCRN11和PvCRN20進(jìn)行亞細(xì)胞定位分析、調(diào)控植物PCD試驗(yàn)及作用機(jī)制、瞬時(shí)轉(zhuǎn)化煙草后對(duì)辣椒疫霉菌致病力影響分析等,探討了不同PvCRNs對(duì)植物免疫應(yīng)答的調(diào)節(jié)作用。以接種葡萄霜霉菌的感病葡萄‘黑比諾’葉片的cDNA為模板,通過半定量分析PvCRN11的表達(dá)模式,發(fā)現(xiàn)PvCRN11受到葡萄霜霉菌誘導(dǎo)表達(dá),并在侵染前期有明顯上調(diào)。通過亞細(xì)胞定位實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)PvCRN11定位在細(xì)胞膜和細(xì)胞核中,推測(cè)其發(fā)揮作用的場(chǎng)所可能在細(xì)胞膜和細(xì)胞核。在本氏煙葉片... 

【文章來源】：西北農(nóng)林科技大學(xué)陜西省211工程院校985工程院校教育部直屬院校

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【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
ABSTRACT
第一章 文獻(xiàn)綜述
    1.1 研究背景
    1.2 葡萄對(duì)霜霉病的抗性機(jī)制
        1.2.1 植物與病原菌互作機(jī)制
        1.2.2 葡萄霜霉病抗性機(jī)制
    1.3 卵菌胞內(nèi)效應(yīng)因子研究進(jìn)展
        1.3.1 卵菌RxLR類效應(yīng)因子研究進(jìn)展
        1.3.2 卵菌CRN類效應(yīng)因子研究進(jìn)展
        1.3.3 葡萄霜霉菌CRN類效應(yīng)因子研究進(jìn)展
    1.4 本研究意義
第二章 葡萄霜霉菌效應(yīng)因子PvCRN11 功能分析
    2.1 實(shí)驗(yàn)材料
        2.1.1 植物材料與菌株
        2.1.2 試驗(yàn)溶液及試劑
        2.1.3 儀器設(shè)備及耗材
    2.2 方法
        2.2.1 Pv CRN11 效應(yīng)因子的克隆
        2.2.2 農(nóng)桿菌介導(dǎo)的瞬時(shí)轉(zhuǎn)化
        2.2.3 PvCRN11 效應(yīng)因子細(xì)胞凋亡調(diào)控活性分析
        2.2.4 本氏煙葉片接種辣椒疫霉菌測(cè)試
        2.2.5 過氧化氫含量的測(cè)定
        2.2.6 本氏煙葉片離子滲透率的測(cè)定
        2.2.7 本氏煙葉片臺(tái)盼藍(lán)染色
        2.2.8 Pv CRN11 效應(yīng)因子的亞細(xì)胞定位分析
        2.2.9 葡萄霜霉菌效應(yīng)因子PvCRN11 的表達(dá)模式分析
        2.2.10 酵母雙雜交篩選PvCRN11 在葡萄內(nèi)的靶蛋白
        2.2.11 擬南芥的轉(zhuǎn)化與轉(zhuǎn)基因鑒定
        2.2.12 轉(zhuǎn)基因擬南芥的抗病性分析
    2.3 結(jié)果與分析
        2.3.1 Pv CRN11 的克隆與生物信息學(xué)分析
        2.3.2 Pv CRN11 的表達(dá)模式分析
        2.3.3 PvCRN11 誘導(dǎo)細(xì)胞死亡的功能分析
        2.3.4 Pv CRN11 亞細(xì)胞定位分析
        2.3.5 Pv CRN11 增強(qiáng)煙草抗病性分析
        2.3.6 PvCRN11 寄主靶蛋白的篩選
        2.3.7 Pv CRN11 轉(zhuǎn)基因擬南芥的功能分析
    2.4 討論
    2.5 小結(jié)
第三章 葡萄霜霉菌效應(yīng)因子PvCRN20 功能分析
    3.1 方法
        3.1.1 葡萄霜霉菌效應(yīng)因子PvCRN20 的克隆
        3.1.2 農(nóng)桿菌介導(dǎo)的瞬時(shí)轉(zhuǎn)化
        3.1.3 本氏煙接種辣椒疫霉測(cè)試
        3.1.4 葡萄霜霉菌效應(yīng)因子PvCRN20 細(xì)胞凋亡調(diào)控活性分析
        3.1.5 葡萄霜霉菌效應(yīng)因子PvCRN20與INF1共表達(dá)后INF1 通路相關(guān)基因的表達(dá)分析
        3.1.6 本氏煙葉片離子滲透率的測(cè)定
        3.1.7 本氏煙葉片的臺(tái)盼藍(lán)染色
        3.1.8 葡萄霜霉菌效應(yīng)因子PvCRN20 在酵母中轉(zhuǎn)錄自激活驗(yàn)證
    3.2 結(jié)果與分析
        3.2.1 Pv CRN20 的克隆與生物信息學(xué)分析
        3.2.2 Pv CRN20 的表達(dá)模式分析
        3.2.3 PvCRN20 抑制INF1 誘導(dǎo)的本氏煙草葉片細(xì)胞死亡的分析
        3.2.4 Pv CRN20 抑制INF1 相關(guān)基因的表達(dá)分析
        3.2.5 PvCRN20 減弱本氏煙草抗病性的分析
        3.2.6 PvCRN20 抑制H2O2 積累的分析
        3.2.7 Pv CRN20 發(fā)揮功能不依賴細(xì)胞核定位的分析
        3.2.8 Pv CRN20 在酵母中的轉(zhuǎn)錄自激活分析
    3.3 討論
    3.4 小結(jié)
第四章 結(jié)論
附錄
縮略詞
參考文獻(xiàn)
致謝
個(gè)人簡(jiǎn)歷



本文編號(hào)：3644554