葡萄（Vitis L.）是世界上種植最廣泛且具有重要經(jīng)濟價值的果樹,葡萄霜霉菌可以感染葡萄的葉片、花序和幼嫩組織,導(dǎo)致其產(chǎn)量和品質(zhì)下降。效應(yīng)蛋白是由病原菌分泌的小分子量蛋白,在病原菌侵染植物的過程中起重要作用。目前,關(guān)于葡萄霜霉菌效應(yīng)因子及其與宿主間的相互作用機制報道較少。本課題組前期對陜西楊陵地區(qū)采集的一個葡萄霜霉菌菌株進行了基因組測序分析,預(yù)測到31個編碼CRN蛋白的基因序列,在本氏煙草中瞬時表達克隆到的候選PvCRN基因,發(fā)現(xiàn)PvCRN11可以誘導(dǎo)本氏煙草葉片細胞死亡而PvCRN20可以抑制INF1誘導(dǎo)的本氏煙草葉片細胞死亡。本研究通過對PvCRN11和PvCRN20進行亞細胞定位分析、調(diào)控植物PCD試驗及作用機制、瞬時轉(zhuǎn)化煙草后對辣椒疫霉菌致病力影響分析等,探討了不同PvCRNs對植物免疫應(yīng)答的調(diào)節(jié)作用。以接種葡萄霜霉菌的感病葡萄‘黑比諾’葉片的cDNA為模板,通過半定量分析PvCRN11的表達模式,發(fā)現(xiàn)PvCRN11受到葡萄霜霉菌誘導(dǎo)表達,并在侵染前期有明顯上調(diào)。通過亞細胞定位實驗發(fā)現(xiàn)PvCRN11定位在細胞膜和細胞核中,推測其發(fā)揮作用的場所可能在細胞膜和細胞核。在本氏煙葉片... 

【文章來源】：西北農(nóng)林科技大學(xué)陜西省211工程院校985工程院校教育部直屬院校

【文章頁數(shù)】：64 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
ABSTRACT
第一章 文獻綜述
    1.1 研究背景
    1.2 葡萄對霜霉病的抗性機制
        1.2.1 植物與病原菌互作機制
        1.2.2 葡萄霜霉病抗性機制
    1.3 卵菌胞內(nèi)效應(yīng)因子研究進展
        1.3.1 卵菌RxLR類效應(yīng)因子研究進展
        1.3.2 卵菌CRN類效應(yīng)因子研究進展
        1.3.3 葡萄霜霉菌CRN類效應(yīng)因子研究進展
    1.4 本研究意義
第二章 葡萄霜霉菌效應(yīng)因子PvCRN11 功能分析
    2.1 實驗材料
        2.1.1 植物材料與菌株
        2.1.2 試驗溶液及試劑
        2.1.3 儀器設(shè)備及耗材
    2.2 方法
        2.2.1 Pv CRN11 效應(yīng)因子的克隆
        2.2.2 農(nóng)桿菌介導(dǎo)的瞬時轉(zhuǎn)化
        2.2.3 PvCRN11 效應(yīng)因子細胞凋亡調(diào)控活性分析
        2.2.4 本氏煙葉片接種辣椒疫霉菌測試
        2.2.5 過氧化氫含量的測定
        2.2.6 本氏煙葉片離子滲透率的測定
        2.2.7 本氏煙葉片臺盼藍染色
        2.2.8 Pv CRN11 效應(yīng)因子的亞細胞定位分析
        2.2.9 葡萄霜霉菌效應(yīng)因子PvCRN11 的表達模式分析
        2.2.10 酵母雙雜交篩選PvCRN11 在葡萄內(nèi)的靶蛋白
        2.2.11 擬南芥的轉(zhuǎn)化與轉(zhuǎn)基因鑒定
        2.2.12 轉(zhuǎn)基因擬南芥的抗病性分析
    2.3 結(jié)果與分析
        2.3.1 Pv CRN11 的克隆與生物信息學(xué)分析
        2.3.2 Pv CRN11 的表達模式分析
        2.3.3 PvCRN11 誘導(dǎo)細胞死亡的功能分析
        2.3.4 Pv CRN11 亞細胞定位分析
        2.3.5 Pv CRN11 增強煙草抗病性分析
        2.3.6 PvCRN11 寄主靶蛋白的篩選
        2.3.7 Pv CRN11 轉(zhuǎn)基因擬南芥的功能分析
    2.4 討論
    2.5 小結(jié)
第三章 葡萄霜霉菌效應(yīng)因子PvCRN20 功能分析
    3.1 方法
        3.1.1 葡萄霜霉菌效應(yīng)因子PvCRN20 的克隆
        3.1.2 農(nóng)桿菌介導(dǎo)的瞬時轉(zhuǎn)化
        3.1.3 本氏煙接種辣椒疫霉測試
        3.1.4 葡萄霜霉菌效應(yīng)因子PvCRN20 細胞凋亡調(diào)控活性分析
        3.1.5 葡萄霜霉菌效應(yīng)因子PvCRN20與INF1共表達后INF1 通路相關(guān)基因的表達分析
        3.1.6 本氏煙葉片離子滲透率的測定
        3.1.7 本氏煙葉片的臺盼藍染色
        3.1.8 葡萄霜霉菌效應(yīng)因子PvCRN20 在酵母中轉(zhuǎn)錄自激活驗證
    3.2 結(jié)果與分析
        3.2.1 Pv CRN20 的克隆與生物信息學(xué)分析
        3.2.2 Pv CRN20 的表達模式分析
        3.2.3 PvCRN20 抑制INF1 誘導(dǎo)的本氏煙草葉片細胞死亡的分析
        3.2.4 Pv CRN20 抑制INF1 相關(guān)基因的表達分析
        3.2.5 PvCRN20 減弱本氏煙草抗病性的分析
        3.2.6 PvCRN20 抑制H2O2 積累的分析
        3.2.7 Pv CRN20 發(fā)揮功能不依賴細胞核定位的分析
        3.2.8 Pv CRN20 在酵母中的轉(zhuǎn)錄自激活分析
    3.3 討論
    3.4 小結(jié)
第四章 結(jié)論
附錄
縮略詞
參考文獻
致謝
個人簡歷



本文編號：3644554