發(fā)布時(shí)間：2022-02-15 02:01

　　柑橘黃龍�。–itrus Huanglongbing,HLB）是柑橘產(chǎn)業(yè)的頭號(hào)殺手,廣泛分布于亞洲、非洲和美洲,且中國11個(gè)�。ㄗ灾螀^(qū)）的300余個(gè)縣遭受HLB的為害。迄今該病尚無藥可治,對(duì)柑橘產(chǎn)業(yè)已構(gòu)成嚴(yán)重威脅。其病原系柑橘韌皮部桿菌（Candidatus Liberibacter spp.）,其中亞洲柑橘韌皮部桿菌（C.Liberibacter asiaticus,CLas）的侵染性最強(qiáng),為革蘭氏陰性菌,田間主要經(jīng)亞洲柑橘木虱（Diaphorina citri）傳播。目前柑橘黃龍病菌純培養(yǎng)這一世界性難題尚未攻克,對(duì)其理化性狀的深入研究及病害治理技術(shù)的研發(fā)存在巨大挑戰(zhàn)。自病原菌的全基因組序列2009年公布后,分析表明該病菌具有完整的Sec系統(tǒng)和分泌能力,而分泌蛋白在病原菌致病過程中發(fā)揮重要作用,但黃龍病菌分泌蛋白與寄主植物的互作研究還處于初級(jí)階段。制備抗體用于探究病原物與寄主植物的互作是一種較為常用的手段。因此,本研究篩選了CLas的2個(gè)分泌蛋白基因,進(jìn)行原核表達(dá)并制備抗血清,為研究這兩個(gè)分泌蛋白基因功能奠定前期基礎(chǔ),也為建立HLB的血清學(xué)監(jiān)測(cè)分泌蛋白田間表達(dá)動(dòng)態(tài)及探究柑橘黃龍病菌分... 

【文章來源】：西南大學(xué)重慶市211工程院校教育部直屬院校

【文章頁數(shù)】：73 頁

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【部分圖文】：

柑橘黃龍病的典型癥狀Fig.1.1TypicalsymptomsofCitrusHuanglongbing紅鼻果

第3章黃龍病菌分泌蛋白基因的篩選173.3.2RT-PCR擴(kuò)增分泌蛋白基因3.3.2.1柑橘黃龍病的檢測(cè)提取HLB顯癥葉片主脈的總DNA，利用Jagoueix等[61]報(bào)道的HLB特異性引物OI1/OI2c進(jìn)行PCR檢測(cè)，擴(kuò)增得到一條大小1160bp的目的條帶（如圖3.1），說明檢測(cè)的樣品感染了柑橘黃龍玻采取的贛南臍橙樣品呈均勻黃化癥狀，三紅蜜柚樣品呈斑駁黃化癥狀（如圖3.2）。圖3.1PCR檢測(cè)田間樣品Fig.3.1DetectionoffieldsamplesbyPCRM：DNA分子質(zhì)量標(biāo)記；1：雙蒸水；2：贛南臍橙樣品；3：三紅蜜柚樣品；4：感染黃龍病植株；5：健康植株M:DNAmolecularweightmarkers;1:ddH2O;2:Gannannavelorange(Citrussinensis)samples;3:Threeredpomelo(C.grandis)samples;4:plantsinfectedwithcitrusHuanglongbing;5:healthyplants圖3.2贛南臍橙和三紅蜜柚感染黃龍病后的癥狀Fig.3.2SymptomsofGannannavelorange(Citrussinensis)andThreeredpomelo(C.grandis)infectedwithCitrusHuanglongbingA：贛南臍橙；B：三紅蜜柚A:Gannannavelorange;B:Threeredpomelo3.3.2.2RT-PCR結(jié)果分泌蛋白基因經(jīng)過轉(zhuǎn)錄再翻譯成分泌蛋白，通過提取感病柑橘的RNA，再逆轉(zhuǎn)錄，設(shè)計(jì)初篩分泌蛋白基因引物進(jìn)行檢測(cè)，間接驗(yàn)證CLas分泌蛋白是否表達(dá)。擴(kuò)增出S9（158bp）、S10（162bp）片段（如圖3.3）。3.3.3分泌蛋白基因的保守性分析結(jié)果M12345200015001000750500250100AB

第3章黃龍病菌分泌蛋白基因的篩選173.3.2RT-PCR擴(kuò)增分泌蛋白基因3.3.2.1柑橘黃龍病的檢測(cè)提取HLB顯癥葉片主脈的總DNA，利用Jagoueix等[61]報(bào)道的HLB特異性引物OI1/OI2c進(jìn)行PCR檢測(cè)，擴(kuò)增得到一條大小1160bp的目的條帶（如圖3.1），說明檢測(cè)的樣品感染了柑橘黃龍玻采取的贛南臍橙樣品呈均勻黃化癥狀，三紅蜜柚樣品呈斑駁黃化癥狀（如圖3.2）。圖3.1PCR檢測(cè)田間樣品Fig.3.1DetectionoffieldsamplesbyPCRM：DNA分子質(zhì)量標(biāo)記；1：雙蒸水；2：贛南臍橙樣品；3：三紅蜜柚樣品；4：感染黃龍病植株；5：健康植株M:DNAmolecularweightmarkers;1:ddH2O;2:Gannannavelorange(Citrussinensis)samples;3:Threeredpomelo(C.grandis)samples;4:plantsinfectedwithcitrusHuanglongbing;5:healthyplants圖3.2贛南臍橙和三紅蜜柚感染黃龍病后的癥狀Fig.3.2SymptomsofGannannavelorange(Citrussinensis)andThreeredpomelo(C.grandis)infectedwithCitrusHuanglongbingA：贛南臍橙；B：三紅蜜柚A:Gannannavelorange;B:Threeredpomelo3.3.2.2RT-PCR結(jié)果分泌蛋白基因經(jīng)過轉(zhuǎn)錄再翻譯成分泌蛋白，通過提取感病柑橘的RNA，再逆轉(zhuǎn)錄，設(shè)計(jì)初篩分泌蛋白基因引物進(jìn)行檢測(cè)，間接驗(yàn)證CLas分泌蛋白是否表達(dá)。擴(kuò)增出S9（158bp）、S10（162bp）片段（如圖3.3）。3.3.3分泌蛋白基因的保守性分析結(jié)果M12345200015001000750500250100AB

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]柑橘黃龍病菌在寄主體內(nèi)含量動(dòng)態(tài)變化研究[J]. 李智鵬,關(guān)巍,黃洋,楊玉文,趙廷昌.  果樹學(xué)報(bào). 2019(11)
[2]植原體致病分子機(jī)理研究進(jìn)展[J]. 李繼東,陳鵬,倪靜,顧理媛,王會(huì)魚,鄭先波,馮建燦.  園藝學(xué)報(bào). 2019(09)
[3]重組蛋白微生物表達(dá)系統(tǒng)的研究進(jìn)展[J]. 黃浩,王陽,堵國成,康振.  生物產(chǎn)業(yè)技術(shù). 2019(03)
[4]柑橘黃龍病病原CLIBASIA＿03230基因的克隆及其編碼蛋白的原核表達(dá)[J]. 趙國歡,張小兵,李凡,李為民.  云南農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)報(bào)(自然科學(xué)). 2019(01)
[5]柑橘黃龍病菌亞洲種菌毛裝配蛋白基因（PAP）序列分析、原核表達(dá)及抗血清制備[J]. 李賓賓,余乃通,楊毅,王健華,張秀春,劉志昕.  植物保護(hù). 2019(05)
[6]對(duì)柑橘黃龍病防控對(duì)策的再思考[J]. 周常勇.  植物保護(hù). 2018(05)
[7]基于原噬菌體類型的我國柑橘黃龍病菌種群遺傳結(jié)構(gòu)分析[J]. 李嘉慧,鄭正,鄧曉玲.  植物病理學(xué)報(bào). 2019(03)
[8]革蘭陰性菌分泌系統(tǒng)及其分泌產(chǎn)物研究進(jìn)展[J]. 余樂正,柳鳳娟,鄢南南,程旭,李益洲,郭延芝.  動(dòng)物醫(yī)學(xué)進(jìn)展. 2017(08)
[9]柑橘黃龍病研究進(jìn)展[J]. 程春振,曾繼吾,鐘云,閆化學(xué),姜波,鐘廣炎.  園藝學(xué)報(bào). 2013(09)
[10]柑桔黃龍病的診斷方法[J]. 吳世盤,錢菊梅.  植物檢疫. 1988(04)

博士論文
[1]稻瘟菌干擾水稻鉀離子通道抑制免疫反應(yīng)的分子機(jī)理研究[D]. 史學(xué)濤.中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院 2018
[2]一、稻瘟菌效應(yīng)子AvrPi9在水稻中互作蛋白的篩選與功能研究 二、組蛋白去乙�；窰DT701與Rpp30互作調(diào)控水稻免疫反應(yīng)[D]. 熊葉輝.中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院 2016
[3]韌皮部桿菌亞洲種簡單重復(fù)序列（SSR）多態(tài)性及其侵染甜橙后轉(zhuǎn)錄組學(xué)研究[D]. 黃愛軍.西南大學(xué) 2014
[4]中國柑橘黃龍病病原調(diào)查、種群遺傳分化及其原噬菌體溶菌酶蛋白原核表達(dá)[D]. 蘇華楠.西南大學(xué) 2013

碩士論文
[1]柑橘黃龍病菌分泌蛋白Clsp33致病機(jī)理初步研究[D]. 劉雪祿.西南大學(xué) 2019
[2]柑橘黃龍病Serralysin蛋白的表達(dá)純化及兩種重要病原的分子檢測(cè)[D]. 侯衛(wèi)真.華中農(nóng)業(yè)大學(xué) 2014
[3]中國柑橘黃龍病病原菌原噬菌體遺傳多樣性研究[D]. 譚錦.西南大學(xué) 2013
[4]柑橘黃龍病Serralysin蛋白的重組表達(dá)和純化[D]. 郝俊.華中農(nóng)業(yè)大學(xué) 2011
[5]應(yīng)用熒光定量PCR技術(shù)研究亞洲韌皮部桿菌在寄主體內(nèi)的動(dòng)態(tài)變化及分布[D]. 胡浩.重慶大學(xué) 2007



本文編號(hào)：3625689