柑橘黃龍�。–itrus Huanglongbing,HLB）是柑橘產(chǎn)業(yè)的頭號殺手,廣泛分布于亞洲、非洲和美洲,且中國11個�。ㄗ灾螀^(qū)）的300余個縣遭受HLB的為害。迄今該病尚無藥可治,對柑橘產(chǎn)業(yè)已構成嚴重威脅。其病原系柑橘韌皮部桿菌（Candidatus Liberibacter spp.）,其中亞洲柑橘韌皮部桿菌（C.Liberibacter asiaticus,CLas）的侵染性最強,為革蘭氏陰性菌,田間主要經(jīng)亞洲柑橘木虱（Diaphorina citri）傳播。目前柑橘黃龍病菌純培養(yǎng)這一世界性難題尚未攻克,對其理化性狀的深入研究及病害治理技術的研發(fā)存在巨大挑戰(zhàn)。自病原菌的全基因組序列2009年公布后,分析表明該病菌具有完整的Sec系統(tǒng)和分泌能力,而分泌蛋白在病原菌致病過程中發(fā)揮重要作用,但黃龍病菌分泌蛋白與寄主植物的互作研究還處于初級階段。制備抗體用于探究病原物與寄主植物的互作是一種較為常用的手段。因此,本研究篩選了CLas的2個分泌蛋白基因,進行原核表達并制備抗血清,為研究這兩個分泌蛋白基因功能奠定前期基礎,也為建立HLB的血清學監(jiān)測分泌蛋白田間表達動態(tài)及探究柑橘黃龍病菌分... 

【文章來源】：西南大學重慶市211工程院校教育部直屬院校

【文章頁數(shù)】：73 頁

【學位級別】：碩士

【部分圖文】：

柑橘黃龍病的典型癥狀Fig.1.1TypicalsymptomsofCitrusHuanglongbing紅鼻果

第3章黃龍病菌分泌蛋白基因的篩選173.3.2RT-PCR擴增分泌蛋白基因3.3.2.1柑橘黃龍病的檢測提取HLB顯癥葉片主脈的總DNA，利用Jagoueix等[61]報道的HLB特異性引物OI1/OI2c進行PCR檢測，擴增得到一條大小1160bp的目的條帶（如圖3.1），說明檢測的樣品感染了柑橘黃龍玻采取的贛南臍橙樣品呈均勻黃化癥狀，三紅蜜柚樣品呈斑駁黃化癥狀（如圖3.2）。圖3.1PCR檢測田間樣品Fig.3.1DetectionoffieldsamplesbyPCRM：DNA分子質(zhì)量標記；1：雙蒸水；2：贛南臍橙樣品；3：三紅蜜柚樣品；4：感染黃龍病植株；5：健康植株M:DNAmolecularweightmarkers;1:ddH2O;2:Gannannavelorange(Citrussinensis)samples;3:Threeredpomelo(C.grandis)samples;4:plantsinfectedwithcitrusHuanglongbing;5:healthyplants圖3.2贛南臍橙和三紅蜜柚感染黃龍病后的癥狀Fig.3.2SymptomsofGannannavelorange(Citrussinensis)andThreeredpomelo(C.grandis)infectedwithCitrusHuanglongbingA：贛南臍橙；B：三紅蜜柚A:Gannannavelorange;B:Threeredpomelo3.3.2.2RT-PCR結(jié)果分泌蛋白基因經(jīng)過轉(zhuǎn)錄再翻譯成分泌蛋白，通過提取感病柑橘的RNA，再逆轉(zhuǎn)錄，設計初篩分泌蛋白基因引物進行檢測，間接驗證CLas分泌蛋白是否表達。擴增出S9（158bp）、S10（162bp）片段（如圖3.3）。3.3.3分泌蛋白基因的保守性分析結(jié)果M12345200015001000750500250100AB

第3章黃龍病菌分泌蛋白基因的篩選173.3.2RT-PCR擴增分泌蛋白基因3.3.2.1柑橘黃龍病的檢測提取HLB顯癥葉片主脈的總DNA，利用Jagoueix等[61]報道的HLB特異性引物OI1/OI2c進行PCR檢測，擴增得到一條大小1160bp的目的條帶（如圖3.1），說明檢測的樣品感染了柑橘黃龍玻采取的贛南臍橙樣品呈均勻黃化癥狀，三紅蜜柚樣品呈斑駁黃化癥狀（如圖3.2）。圖3.1PCR檢測田間樣品Fig.3.1DetectionoffieldsamplesbyPCRM：DNA分子質(zhì)量標記；1：雙蒸水；2：贛南臍橙樣品；3：三紅蜜柚樣品；4：感染黃龍病植株；5：健康植株M:DNAmolecularweightmarkers;1:ddH2O;2:Gannannavelorange(Citrussinensis)samples;3:Threeredpomelo(C.grandis)samples;4:plantsinfectedwithcitrusHuanglongbing;5:healthyplants圖3.2贛南臍橙和三紅蜜柚感染黃龍病后的癥狀Fig.3.2SymptomsofGannannavelorange(Citrussinensis)andThreeredpomelo(C.grandis)infectedwithCitrusHuanglongbingA：贛南臍橙；B：三紅蜜柚A:Gannannavelorange;B:Threeredpomelo3.3.2.2RT-PCR結(jié)果分泌蛋白基因經(jīng)過轉(zhuǎn)錄再翻譯成分泌蛋白，通過提取感病柑橘的RNA，再逆轉(zhuǎn)錄，設計初篩分泌蛋白基因引物進行檢測，間接驗證CLas分泌蛋白是否表達。擴增出S9（158bp）、S10（162bp）片段（如圖3.3）。3.3.3分泌蛋白基因的保守性分析結(jié)果M12345200015001000750500250100AB

【參考文獻】：
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碩士論文
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