蚜蟲是農(nóng)業(yè)生產(chǎn)中極具破壞性的害蟲之一。豌豆蚜作為研究蚜蟲的模式,也是第一個(gè)完成基因組注釋的不完全變態(tài)昆蟲。與其他昆蟲相比,豌豆蚜基因組中缺失了很多與免疫防御相關(guān)的基因,在受到機(jī)械損傷、外界病原微生物感染或寄生物寄生時(shí)所表達(dá)的基因和蛋白質(zhì)是有限的。酚氧化酶（Phenoloxidases,PO）屬于3型含銅蛋白家族,能夠?qū)畏宇愇镔|(zhì)氧化成鄰二苯酚,進(jìn)而氧化成鄰苯醌或?qū)Ρ锦?最終聚合成黑色素。PO催化的黑化反應(yīng)過程中產(chǎn)生的中間產(chǎn)物對(duì)細(xì)菌、真菌、寄生物和病毒具有直接抑制作用。PO在昆蟲體內(nèi)以酚氧化酶原（Prophenoloxidases,PPO）的形式存在。本實(shí)驗(yàn)利用RNA干擾（RNAi）技術(shù)沉默了豌豆蚜PPO基因,并檢測(cè)豌豆蚜血淋巴自發(fā)黑化的情況、感染細(xì)菌或真菌后豌豆蚜的PO活力、細(xì)菌菌落數(shù)和真菌孢子數(shù)目以及蚜蟲的存活率。主要結(jié)果如下:（1）通過RNA干擾對(duì)豌豆蚜PPO1和PPO2基因進(jìn)行沉默,得到了單獨(dú)沉默PPO2以及同時(shí)沉默PPO1和PPO2的結(jié)果,但未能單獨(dú)沉默PPO1基因。（2）RNA干擾后觀察了豌豆蚜血淋巴自發(fā)黑化的情況,發(fā)現(xiàn)PPO基因表達(dá)下調(diào)阻礙了血淋巴自發(fā)黑化（3）檢測(cè)了沉默P... 

【文章來源】：西北農(nóng)林科技大學(xué)陜西省211工程院校985工程院校教育部直屬院校

【文章頁(yè)數(shù)】：46 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【部分圖文】：

豌豆蚜免疫通路相關(guān)基因缺失示意圖(Gerardoetal.,2010)

在血淋巴中運(yùn)輸氧氣，后來的一些研究發(fā)現(xiàn)其具有酚氧化酶活性和抗菌Holde and Miller, 1995;Aguilera et al., 2013; Coates and Nairn, 2014）。在昆酚氧化酶，酚氧化酶是昆蟲體內(nèi)重要的氧化酶，是昆蟲抵御外源物入侵的，也是合成黑色素、外骨骼鞣化、傷口愈合和殺滅微生物的關(guān)鍵酶（Nnsen, 2005; Cerenius et al., 2010; Lu et al., 2014）。酚氧化酶的結(jié)構(gòu)及分布氧化酶通常以其非活化狀態(tài)的前體酚氧化酶原（Prophenoloxidases, PPO）PPO 和血藍(lán)蛋白、兒茶酚氧化酶以及酪氨酸酶都屬于 3 型含銅蛋白家族，白在每個(gè)活性位點(diǎn)上有兩個(gè)銅離子和三個(gè)組氨酸（Decker et al., 2007; 。煙草天蛾（Manduca sexta）的 PPO 是由 2 個(gè)同源多肽鏈 PPO1 和 PPO2聚體，分別有 685、695 個(gè)殘基，PPO1 與 PPO2 非常相似，每個(gè)亞基的活 個(gè)銅原子（CuA 和 CuB）形成的雙核銅中心，每個(gè)銅離子由 3 個(gè)結(jié)構(gòu)保守位鍵相連，與酚類物質(zhì)相互作用（Li et al., 2009）。具體結(jié)構(gòu)如圖 1-2 和

圖 1-3 煙草天蛾 PPO2 的雙銅離子活性中心（Li et al., 2009）Fig1-3 Di-copper center in M. sexta PPO2（Li et al., 2009）蟲的血細(xì)胞中合成。家蠶（Bombyx mori）的酚氧化酶nocytoids）產(chǎn)生的，但進(jìn)一步的研究表明其他血細(xì)胞中）。雙翅目昆蟲果蠅幼蟲的晶細(xì)胞（crystal cell）（Bingganulocyte）和類絳色細(xì)胞都有酚氧化酶（Liu et al., 201也有所不同。意大利蜜蜂（Apis mellifera）中僅有 1 個(gè) P和豌豆蚜（Acyrthosiphon pisum）有 2 個(gè) PPO 基因（Tan），果蠅中有 3 個(gè) PPO 基因（Binggeli et al., 2014），赤擬 3 個(gè) PPO 基因（Yokoi et al., 2015），岡比亞按蚊（Anop而埃及伊蚊（Aedes aegypti）有 10 個(gè) PPO 基因（Waterho激活及作用機(jī)制

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]過氧化氫酶在豌豆蚜抵御藤黃微球菌和大腸桿菌感染引起的氧化脅迫中的作用[J]. 陳金紅,徐露,馬力,呂志強(qiáng).  昆蟲學(xué)報(bào). 2017(10)
[2]豌豆蚜體內(nèi)參與抵御細(xì)菌感染引起的氧化脅迫的過氧化物氧化還原酶2的鑒定及分子特性分析（英文）[J]. 張永棟,李君蘭,陳金紅,馬力,陳康康,呂志強(qiáng).  昆蟲學(xué)報(bào). 2017(03)
[3]馬鈴薯病毒病傳播介體蚜蟲的危害及防治[J]. 張抒,白艷菊,范國(guó)權(quán),高艷玲,張威,申宇,魏琪,邱彩鈴,孫妍.  黑龍江農(nóng)業(yè)科學(xué). 2017(03)
[4]蚜蟲防治研究進(jìn)展[J]. 鄒玉,邵鳴,王濤,許龍.  中國(guó)林副特產(chǎn). 2016(06)
[5]昆蟲RNA干擾中雙鏈RNA的轉(zhuǎn)運(yùn)方式[J]. 劉吉升,朱文輝,廖文麗,卜曉玲,江婉儀.  昆蟲學(xué)報(bào). 2016(06)
[6]黃粉蟲幼蟲體壁硬化過程中酚氧化酶活性的變化[J]. 劉守柱,薛超彬,羅萬春.  昆蟲學(xué)報(bào). 2009(09)



本文編號(hào)：3615467