意大利蜜蜂是蜜蜂的一種,在分類學(xué)上屬動物界、節(jié)肢動物門、昆蟲綱、膜翅目、蜜蜂總科、蜜蜂科。意大利蜜蜂（意蜂）是世界上分布最廣且被大量利用的西方蜜蜂。蜂毒是存在于蜜蜂毒囊內(nèi)的透明液體,科學(xué)家發(fā)現(xiàn)包含多種有活性的物質(zhì),包括蜂毒肽、蜂毒明肽和透明質(zhì)酸酶等。本研究工作中,為了探究意蜂毒的物質(zhì)成分及其生物化學(xué)性質(zhì),我們收集意蜂毒液,在粗毒水平檢測了意蜂毒對白血病細(xì)胞K562的毒害作用,發(fā)現(xiàn)對K562細(xì)胞的IC50是5.49 μg/mL。隨后我們用倒置顯微鏡檢測了細(xì)胞形態(tài)學(xué)的變化,發(fā)現(xiàn)5 μg/mL的蜂毒使細(xì)胞膜受損傷,細(xì)胞邊緣模糊,而在10μg/mL的濃度下蜂毒完全破壞了癌細(xì)胞的細(xì)胞膜,細(xì)胞完全死亡。為了探究蜂毒里是否含有作用于離子通道的成分,本研究采用反相高效液相色譜對意蜂毒素進(jìn)行分離純化,共收集到20個峰,分別收集,真空凍干。隨后對每個組分進(jìn)行了電生理檢測,發(fā)現(xiàn)滯留時間在8min的成分可以完全抑制ND7/23細(xì)胞表達(dá)的鈉通道電流。ND7/23細(xì)胞可以表達(dá)幾種不同的鈉電流,為了進(jìn)一步研究毒素的選擇性,將Nav1.3、Nav1.4、Nav1.5 和 Nav1.7 通過 HEK293T 細(xì)胞異源表... 

【文章來源】：湖南師范大學(xué)湖南省211工程院校

【文章頁數(shù)】：58 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【部分圖文】：

圖２－１不同濃度的蜂毒處理Ｋ５６２細(xì)胞的細(xì)胞毒結(jié)果

?２．５?５?７．５１０?１５２０??Ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎ（ｕｇ／ｍＬ）??圖２－１不同濃度的蜂毒處理Ｋ５６２細(xì)胞的細(xì)胞毒結(jié)果。??ＣＣＫ８法，不同濃度處理２４小時酶聯(lián)免疫檢測儀上４５０ｎｍ測其吸光值，數(shù)據(jù)經(jīng)Ｇｒａｐｈｐａｄ??ｐｒｉｓｍ軟件繪圖得到抑制曲線。意蜂對Ｋ５６２細(xì)胞的殺傷作用呈現(xiàn)明顯的濃度依賴性。??２．４．２?ＨＬ－６０細(xì)胞增值抑制試驗??意蜂毒對人早幼粒白血病細(xì)胞株ＨＬ－６０細(xì)胞的增長也有明顯的抑制作用，??其ＩＣ５０是６．ｌ２）ｉｇ／ｍＬ，并且濃度越高，抑制效果越明顯，呈現(xiàn)明顯的濃度依賴??性，如圖２－２所示。??蜂毒作用于１￣＾－６０??１．５－１??藝?１．０－?＊?？??Ｉ??￣?〇?５?ＩＣ５〇＝６．１２ｕｇ／ｍＬ?／??Ｏ．Ｏ－Ｉ?Ｔ?Ｉ￣ｒ—Ｉ￣Ｉ—Ｉ???０．５?１?２．５?５?７．５１０?１５?２０??Ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎ（ｕｇ／ｍＬ）??圖２－２不同濃度的蜂毒處理ＨＬ－６０細(xì)胞的細(xì)胞毒結(jié)果。??ＣＣＫ８法，不同濃度處理２４小時酶聯(lián)免疫檢測儀上４５０?ｍｉｌ測其吸光值，數(shù)據(jù)經(jīng)Ｇｒａｐｈｐａｄ??ｐｒｉｓｍ軟件繪圖得到抑制曲線。意蜂對ＨＬ－６０細(xì)胞的殺傷作用呈現(xiàn)明顯的濃度依賴性。??１３??

意蜂毒對人急性髓系白血病細(xì)胞株ＭＶ－４－１１細(xì)胞的增長抑制作用同Ｋ５６２、??ＨＬ－６０，其丨Ｃ５０是５．５０網(wǎng)／ｍＬ，并且濃度越高，抑制效果越明顯，呈現(xiàn)明顯的??濃度依賴性，如圖２－３所示。??蜂毒作用于ＭＶ－４－１１??１．５－＊??Ｉ。５－??ＩＯ５〇＝５．５０ｕｇ／ｍＬ??〇－〇?１?Ｉ?Ｉ?＊?？?ｉｔ?？?Ｉ??０．５?１?２．５?５?７．５１０?１５?２０??Ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎ（ｕｇ／ｍＬ）??圖２－３不同濃度的蜂毒處理ＭＶ－４－ｌｌ細(xì)胞的細(xì)胞毒結(jié)果。??ＣＣＫ８法，不同濃度處理２４小時酶聯(lián)免疫檢測儀上４５０?ｎｍ測其吸光值，數(shù)據(jù)經(jīng)Ｇｒａｐｈｐａｄ??ｐｒｉｓｍ軟件繪圖得到抑制曲線。明顯看出意蜂毒對癌細(xì)胞的殺傷作用有濃度依賴性。??２．４．４蜂毒對三種白血病細(xì)胞抑制作用的比較??為了比較蜂毒對三種白血病細(xì)胞生長抑制作用，如下圖２－４所示，我們能夠??明顯看出蜂毒對人慢性髓系白血病細(xì)胞Ｋ５６２的抑制作用強于ＭＶ－４－ｌｌ、ＨＬ－６０。??蜂毒作用于三種白血病細(xì)胞??１．５－１??＋?Ｋ５６２??ＨＢ－?ＭＶ－４－１１??＾?１．０－?＊?■?Ｉ?■?★?ＨＬ－６０??Ｉ—??＿＿??０．５?１?２．５?５?７．５１０?１５?２０??Ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎ（

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]中醫(yī)藥治療惡性腫瘤進(jìn)展[J]. 謝長春.  中國實用醫(yī)藥. 2007(22)
[2]中國東方蜜蜂分類研究結(jié)果和進(jìn)展[J]. 糜佳霖,譚墾.  中國蜂業(yè). 2007(07)
[3]細(xì)菌感染的抗菌藥物治療和細(xì)菌耐藥性監(jiān)測（3）[J]. 洪秀華.  外科理論與實踐. 2006(01)
[4]陽離子抗菌肽的作用機理及構(gòu)效關(guān)系[J]. 江龍法,謝慧,鄔敏辰,楊海麟,王武.  中國醫(yī)藥工業(yè)雜志. 2005(04)
[5]虎紋捕鳥蛛凝集素-I（SHL-I）的核磁共振氫譜譜峰的完全歸屬[J]. 呂善運,梁宋平,劉修才,顧孝誠.  生物物理學(xué)報. 1999(02)

碩士論文
[1]苜蓿田及天然草地蜘蛛群落結(jié)構(gòu)及多樣性分析研究[D]. 吳儀.新疆農(nóng)業(yè)大學(xué) 2013
[2]秦嶺地區(qū)蜜蜂科昆蟲生物地理學(xué)研究[D]. 郭新軍.陜西師范大學(xué) 2005



本文編號：3614916