枇杷（Eriobotrya japonica Lindl.）是一種起源于中國的亞熱帶常綠果樹,因其果實香甜可口、營養(yǎng)頗豐而受到消費者喜愛。隨著枇杷栽培面積的增加,大面積葉部病害的發(fā)生成為限制枇杷優(yōu)質高產的主要因素。枇杷葉斑病種類繁多,生產中由于病斑形態(tài)相似,且存在多種病原菌混合致病的現(xiàn)象,故無法通過傳統(tǒng)病原鑒定法全面、快速、準確地鑒定其病原菌種類。我國枇杷主要葉斑病有灰斑病、輪紋病、炭疽病、葉尖枯斑病和圓斑病等,本研究以上述5種病害為研究對象,通過結合傳統(tǒng)分離鑒定法（包括菌落特征及孢子形態(tài)觀察、rDNA-ITS序列分析和致病性測定）和Miseq高通量測序技術,以期更為準確地鑒定病原,并明確不同病害微生物多樣性的年周期變化及地域分布差異,為枇杷葉斑病的防治奠定基礎。主要研究結果如下:1.分別采集重慶地區(qū)5種主要葉斑病不同時期（春、夏、秋梢生長時期）的病樣進行傳統(tǒng)分離培養(yǎng),病原菌種類鑒定及其分離頻率統(tǒng)計結果顯示,枇杷葉斑病不是單一致病菌引起,而是由多種病原菌混合導致。可能引起灰斑病的病原菌為Colletotrichum（40.00%）、Alternaria（20.00%）、Phoma（10... 

【文章來源】：西南大學重慶市211工程院校教育部直屬院校

【文章頁數(shù)】：95 頁

【學位級別】：碩士

【部分圖文】：

陳福如等[31]

分生孢子梗無色，分生孢子單孢，無色，橢圓形、圓柱形或棍棒狀，兩端鈍圓，內含油滴（圖3-1-e），大小為 9.2~ 17.7 μm × 4.6~ 7.7 μm（n=30）。初步將菌株 CQYB-1 鑒定為膠胞炭疽菌 Colletotrichum gloeosporioides。圖 3-1 菌株 CQYB-1 回接癥狀及形態(tài)特征a. 對照葉片；b. 回接癥狀；c. 菌落正面；d. 菌落反面；e. 分生孢子（標尺=20 μm）。Fig. 3-1 The pathogenicity and morphology of strain CQYB-1a. Control; b. injured inoculation by conidiophores suspension; c. obverse side of CQYB-1 colony; d. reverseside of CQYB-1 colony; e. conidia of CQYB-1 (scale = 20 μm).b. rDNA-ITS 序列分析按N-J法構建系統(tǒng)發(fā)育樹，菌株CQYB-1與兩株Colletotrichum gloeosporioides（KF053200 及 KF053200）聚在一支，自展率為 94%（圖 3-2），結合供試菌株的形態(tài)學特征以及致病性測定結果，將該菌株鑒定為膠胞炭疽菌 Colletotrichumgloeosporioides。

圖 3-2 基于 rDNA-ITS 序列構建的菌株 CQYB-1 系統(tǒng)發(fā)育樹. 3-2 Phylogenetic tree of strain CQYB-1 based on the sequences of rDNA-ITS region測定孢子懸浮液造傷接種健康枇杷葉片，3 d 后開始發(fā)病（圖 3-1-b），病斑漸擴展為圓形，后期病斑擴大相連為大塊病斑，與田間發(fā)病情況基本葉的典型病斑處再次分離病原菌，從中獲得了與原接種菌株形態(tài)基本菌，以無菌水為對照的葉片則沒有發(fā)病（圖 3-1-a）。根據(jù)柯赫氏法則 CQYB-1 為枇杷葉斑病致病菌。孢菌 Alternaria alternate孢子形態(tài)特征 CQYB-24 在 PDA 培養(yǎng)基上生長旺盛，菌落呈灰白色（圖 3-3-c），背色（圖 3-3-d），邊緣整齊，等徑生長呈同心圓形，與 PDA 培養(yǎng)基結合菌絲發(fā)達，呈絨狀，緊密交錯。分生孢子梗單生，具分生孢子，呈鏈f），褐色，表面光滑，具橫膈膜 1~5 個，縱、斜隔膜 0~3 個，直或微彎

【參考文獻】：
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本文編號：3613297