桿狀病毒作為一類大型雙鏈DNA病毒,是許多昆蟲的病原體。在病毒與宿主的共同進(jìn)化過程中,桿狀病毒與宿主昆蟲之間發(fā)生了復(fù)雜的相互作用,促進(jìn)了宿主防御機(jī)制的升級以及病毒攻擊策略的演變。病毒與宿主的相互作用可以分為兩個(gè)方面:首先是桿狀病毒對宿主的影響,包括阻斷宿主細(xì)胞周期、誘導(dǎo)宿主細(xì)胞凋亡、調(diào)節(jié)宿主生長發(fā)育以及捕獲宿主的一些基因等;其次是宿主昆蟲對桿狀病毒的復(fù)制增殖的影響,包括影響病毒復(fù)制、調(diào)控桿狀病毒的基因表達(dá)、抑制病毒的增值等。本文以家蠶核型多角體病毒（Bombyx mori nucleopolyhedrovirus,BmNPV）中超氧化物歧化酶基因（superoxide dismutase,sod）作為研究對象,利用Red同源重組的技術(shù)以及Bac-to-Bac系統(tǒng)構(gòu)建了四種重組型Bacmid（Baculovirus plasmid）,分別從細(xì)胞水平和個(gè)體水平,檢測BmNPV-sod基因缺失后對病毒復(fù)制、細(xì)胞中活性氧（reactive oxygen species,ROS）的水平、細(xì)胞形態(tài)、幼蟲的存活時(shí)間以及個(gè)體變化等的影響,探究BmNPV-sod基因在病毒感染過程中的作用,主要研究結(jié)果如... 

【文章來源】：西南大學(xué)重慶市 211工程院校 教育部直屬院校

【文章頁數(shù)】：90 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【部分圖文】：

BV和ODV表型[13]

第一章文獻(xiàn)綜述31.1.3桿狀病毒的生活史以NPV為例，桿狀病毒具有雙向復(fù)制周期，在此期間，通過一系列不同、連續(xù)的步驟產(chǎn)生BV和ODV。初次感染開始于易感宿主的幼蟲吞食了含有ODV的OBs食物。當(dāng)OBs進(jìn)入宿主的中腸時(shí)，在中腸的堿性環(huán)境下，釋放出大量的ODV。ODV穿過圍食膜（Peritrophicmembrance，PM），釋放出核衣殼，從而感染宿主的中腸上皮細(xì)胞，核衣殼通過肌動(dòng)蛋白的運(yùn)動(dòng)進(jìn)入細(xì)胞核，釋放出裸露的DNA[6,19]。早期基因的表達(dá)、基因組DNA的復(fù)制和晚期基因的表達(dá)都在被感染細(xì)胞的病毒發(fā)生基質(zhì)中進(jìn)行，隨后核衣殼出芽獲得囊膜，形成子代BVs病毒粒子。子代BVs直接穿過中腸細(xì)胞膜或利用氣管細(xì)胞作為導(dǎo)管穿透血腔，感染各種易感組織的其他細(xì)胞，形成繼發(fā)性感染[20,21]。在繼發(fā)性感染中，核衣殼在細(xì)胞核內(nèi)形成ODV，隨后被包埋進(jìn)OBs中，并且滯留在細(xì)胞核中，當(dāng)被感染的幼蟲死后，隨尸體的液化釋放到環(huán)境中進(jìn)行下一輪感染。因此，ODV在昆蟲間的水平傳播中發(fā)揮作用，而BVs負(fù)責(zé)細(xì)胞間傳播，從而導(dǎo)致病毒在受感染昆蟲內(nèi)傳播[2]。圖1.2桿狀病毒的增殖周期[2]Fig.1.2Multiplicationcycleofbaculovirus

西南大學(xué)碩士學(xué)位論文6宿主的適應(yīng)性，為病毒的進(jìn)化提供了選擇性優(yōu)勢。2008年，研究人員通過全基因組調(diào)查的方法，在BmNPV中比對到了15個(gè)與宿主具有高度同源性的蛋白，分別是EGT、IAP、PTP、V-CATH、V-CHIA、成纖維生長因子（fibroblastgrowthfactor，vFGF）、超氧化物歧化酶（superoxidedismutase，SOD）等[49]。系統(tǒng)發(fā)育分析表明桿狀病毒的EGT和IAP均與昆蟲聚集在一起，進(jìn)化關(guān)系相近，因此這兩個(gè)基因從宿主昆蟲轉(zhuǎn)移到桿狀病毒中的假說得到了支持[50]。同樣，P35、PTP也來源于宿主昆蟲。P35和IAP是重要的凋亡抑制蛋白，它們在進(jìn)化過程中已經(jīng)適應(yīng)了宿主的防御反應(yīng)[51]。EGT和PTP參與調(diào)節(jié)病毒感染后宿主的行為調(diào)控。相比之下，桿狀病毒編碼的幾丁質(zhì)酶則來自于變形桿菌的γ亞分支[50]。vfgf基因來源于宿主，其可以改變宿主信號通路中的vFGF蛋白，使未受感染的血細(xì)胞遷移到受感染的組織中，加快病毒在宿主體內(nèi)的傳播速度[52]。因此，桿狀病毒通過基因水平轉(zhuǎn)移，最大化地利用這些基因的功能來為自身提供感染優(yōu)勢。圖1.3桿狀病毒對宿主昆蟲的影響[53]Fig.1.3Theeffectofbaculovirusesontheirinsecthosts.1.3宿主昆蟲對桿狀病毒的影響1.3.1調(diào)控桿狀病毒的基因表達(dá)桿狀病毒在感染宿主過程中，其基因的表達(dá)可以分為四個(gè)轉(zhuǎn)錄階段：極早期、早期、晚期和極晚期。在病毒感染的初始階段，轉(zhuǎn)錄激活因子促進(jìn)桿狀病毒基因的表達(dá)，并且選擇性地調(diào)節(jié)某些宿主基因的表達(dá)[54]。早期基因在病毒DNA復(fù)制之

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]BmNPV對家蠶BmN細(xì)胞周期及周期蛋白基因表達(dá)水平的影響[J]. 劉麗華,沈衛(wèi)德,李兵,王文兵.  西北農(nóng)林科技大學(xué)學(xué)報(bào)(自然科學(xué)版). 2014(02)
[2]重組AcMNPV感染家蠶后造成宿主組織液化的機(jī)制分析[J]. 彭偉,陳愛春,汪生鵬.  蠶業(yè)科學(xué). 2012(04)
[3]昆蟲包涵體衍生病毒囊膜蛋白的分子生物學(xué)[J]. 相興偉,吳小鋒.  昆蟲學(xué)報(bào). 2010(07)
[4]Caspase Family Proteases and Apoptosis[J]. Ting-Jun FAN Li-Hui HAN Ri-Shan CONG Jin LIANG College of Marine Life Sciences,Division of Life Science and Technology,Ocean University of China,Qingdao 266003,China;College of Chemistry & Chemical Engineering,Ocean University of China,Qingdao 266003,China.  Acta Biochimica et Biophysica Sinica. 2005(11)
[5]昆蟲體液免疫的分子生物學(xué)[J]. 李志強(qiáng),陳國生,王茂先,王國秀.  生命的化學(xué). 2003(05)
[6]Ac MNPV ie-1基因誘導(dǎo)的斜紋夜蛾細(xì)胞凋亡（英文）[J]. 張萍,楊波,代小江,龐義,鐘江,蘇德明.  生物化學(xué)與生物物理學(xué)報(bào). 2002(06)
[7]昆蟲抗菌肽的功能、作用機(jī)理與分子生物學(xué)研究最新進(jìn)展[J]. 趙東紅,戴祝英,周開亞.  生物工程進(jìn)展. 1999(05)

博士論文
[1]家蠶核型多角體病毒入侵宿主機(jī)制及囊膜融合蛋白GP64與宿主蛋白的互作研究[D]. 馮敏.浙江大學(xué) 2018
[2]家蠶新型高效桿狀病毒表達(dá)系統(tǒng)的開發(fā)和應(yīng)用研究[D]. 曹翠平.浙江大學(xué) 2007



本文編號：3605748