益生菌在畜禽養(yǎng)殖業(yè)中有著廣泛應用,而在特種養(yǎng)殖動物中,特別是蛇類養(yǎng)殖中鮮見研究報道。為了探究益生菌對蛇的影響,本課題篩選出益生菌,以人工養(yǎng)殖的王錦蛇為研究對象,進行了為期42天的喂養(yǎng)試驗,為益生菌在蛇類養(yǎng)殖業(yè)中的推廣應用奠定理論基礎。從4株益生菌中挑選到1株經(jīng)異常毒性檢查、安全性檢查、消化液耐受和藥敏試驗符合要求的益生菌,以表型特征檢查和16s rDNA序列測定的方法鑒定細菌。采用單因素變量法和正交試驗優(yōu)化培養(yǎng)獲得益生菌液,按1mL/100g體重的劑量給試驗蛇灌服108cfu/mL的益生菌液,分別采集糞樣和血樣,進行腸道菌群、蛋白質(zhì)、白細胞等生理生化指標測定,結(jié)果如下:1.篩選到的符合要求的益生菌為地衣芽孢桿菌。2.地衣芽孢桿菌優(yōu)化培養(yǎng)基組方為蛋白胨10g/L、牛肉膏15g/L、酵母粉3g/L、磷酸二氫鉀2g/L,最佳培養(yǎng)條件為37℃,pH7.2,搖床轉(zhuǎn)速200rpm,培養(yǎng)10h。3.灌服了益生菌的試驗組王錦蛇的腸道大腸桿菌、產(chǎn)氣莢膜梭菌含量比對照組低,腸道糞腸球菌含量比對照組高,糞便蛋白質(zhì)的含量比對照組低;與對照組相比,實驗組王錦蛇血液中總膽紅素、丙二醛的含量、谷丙轉(zhuǎn)氨酶的活性均降低... 

【文章來源】：廣西大學廣西壯族自治區(qū) 211工程院校

【文章頁數(shù)】：85 頁

【學位級別】：碩士

【部分圖文】：

圖２－１細菌鑒定結(jié)果??Ｆｉｕｒｅ?２－１?Ｂａｃｔｅｒｉａｌ?ｉｄｅｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎ?ｒｅｓｕｌｔｓ??

益生菌的篩選及其對王錦蛇影響的初步研究??②號菌ＰＣＲ產(chǎn)物經(jīng)電泳后在凝膠成像系統(tǒng)觀察發(fā)現(xiàn)，在１５００ｂｐ處有明顯的??條帶，如圖２－２所示，菌株的１６ＳｒＲＮＡ基因相關序列見附錄。將測序得到的序??列登錄ＮＣＢＩ進行同源性比對，發(fā)現(xiàn)②號菌為地衣芽孢桿菌，與多株己經(jīng)鑒定的??地衣芽孢桿菌（登陸號ＮＲ１１８９９６．１，ＮＲ０７４９２３．１?和ＮＲ１１６０２３．１）同源性達到９９％。??圖２－２②號菌ＰＣＲ產(chǎn)物電泳圖??Ｆｉｇｕｒｅ?２－２?Ｅｌｅｃｔｒｏｐｈｏｒｅｓｉｓ?ｍａｐ?ｏｆ?ＰＣＲ?ｐｒｏｄｕｃｔ?ｏｆ?Ｎｏ．?２??在圖２－２中Ｍ為Ｍａｒｋｅｒ２０００，２是②號菌，陰為空白對照??Ｉｎ?Ｆｉｇｕｒｅ?２－２，?Ｍ?ｉｓ?Ｍａｒｋｅｒ２０００，?２?ｉｓ?Ｎｏ．?２，?ａｎｄ?ｎｅｇａｔｉｖｅ?ｉｓ?ａ?ｂｌａｎｋ?ｃｏｎｔｒｏｌ．??２．５分析與討論??本試驗所用的４株細菌雖然是在某益生菌產(chǎn)品上分離得到的優(yōu)勢菌株，但產(chǎn)??品是否被污染以及菌株在保存過程中是否出現(xiàn)變異具備了毒性還不得而知。李月??丹等人研究發(fā)現(xiàn)，往小鼠腹腔內(nèi)注射蠟樣芽胞桿菌，雖未引起小鼠死亡，但??是可以從肺臟和腦組織中分離到蠟樣芽孢桿菌，說明這株細菌存有安全隱患；陳??懷濤［１１２］發(fā)現(xiàn)地衣芽孢桿菌也存在安全問題

３．４結(jié)果??３．４．１地衣芽孢桿菌最適無機鹽??如圖３－１所示，益生菌在添加了?４號無機鹽即磷酸二氫鉀的培養(yǎng)基發(fā)酵６ｈ??后菌液〇Ｄ６（Ｍ）最大為０．６６，添加無機鹽為氯化鈉、氯化鈣和硫酸鎂的菌液ＯＤ＿??均小于０．６６，說明這株地衣芽孢桿菌的最適無機鹽為鱗酸二氫鉀。??０．７０??０．６０?ｔ〇．６６??〇５〇?ｍｓ＾?０５５??０．５１??雙?０４０?ｍ?＾０－４３?爨：－）ｍｗ??－?０．４０??Ｉ。３。圓圓繼Ｐ．丨隱到■菌液①值??Ｈ?ＨＩ?Ｂ??Ｈｉ?ＩＨ??〇．〇〇??氯化鈉?氯化鈣?硫酸鎂磷酸二氫鉀氪化鉀??無機鹽種類??圖３－１無機鹽對地衣芽孢桿菌生長的影??Ｆｉｇｕｒｅ?３－１?Ｅｆｆｅｃｔ?ｏｆ?ｉｎｏｒｇａｎｉｃ?ｓａｌｔｓ?ｏｎ?ｔｈｅ?ｇｒｏｗｔｈ?ｏｆ?Ｂ．Ｌ??３．４．２地衣芽孢桿菌體外培養(yǎng)最適條件??從圖３－２可以看出，在一定范圍內(nèi)隨著轉(zhuǎn)速的增加，菌液的ＯＤ６（Ｗ值也隨著??增加；當搖床的轉(zhuǎn)速為２００ｒｐｍ時ＯＤ６ＱＱ值達到最大，隨著轉(zhuǎn)速的再增加菌液的??〇Ｄ６（Ｋ）值呈現(xiàn)下降趨勢；所以該菌體外培養(yǎng)的最佳轉(zhuǎn)速為２００ｒｐｍ。??２

【參考文獻】：
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本文編號：3605639