昆蟲生殖對于其種群繁衍至關重要。目前有關昆蟲生殖發(fā)育的研究主要集中于轉錄水平關鍵調控基因的鑒定和功能研究。micro RNA（miRNA）是一類重要的小分子非編碼RNA,以轉錄后調控的方式調節(jié)基因表達。已有研究表明miRNA在昆蟲生殖發(fā)育中發(fā)揮了重要作用,但是,這些研究主要集中在果蠅和蚊子等模式物種上。桔小實蠅Bactrocera dorsalis是一種高度入侵性害蟲。因此,鑒定桔小實蠅中參與生殖發(fā)育的miRNA不僅可以豐富和完善昆蟲生殖調控機制,而且為桔小實蠅綠色可持續(xù)治理提供了新靶標和新思路。本研究首先建立了桔小實蠅雌成蟲脂肪體和卵巢組織不同生殖發(fā)育階段的小RNA文庫,從不同時期差異表達miRNAs中選取高豐度表達的3個已知miRNA,q PCR檢測了其在雌成蟲脂肪體和卵巢組織不同生殖發(fā)育階段的表達模式;選取卵巢和脂肪體組織顯著高表達且在不同生殖發(fā)育時期差異表達的miR-286,通過顯微注射miRNA抑制劑檢測了其在卵巢發(fā)育、繁殖力中的功能;通過靶基因預測、雙熒光素酶驗證、RNAi、拯救實驗等研究明確其調控桔小實蠅雌成蟲生殖發(fā)育的分子機理。1.桔小實蠅不同生殖發(fā)育階段差異表達miR... 

【文章來源】：華中農業(yè)大學湖北省 211工程院校 教育部直屬院校

【文章頁數(shù)】：95 頁

【學位級別】：碩士

【部分圖文】：

桔小實蠅不同生殖發(fā)育階段的卵巢形態(tài)

華中農業(yè)大學2020屆碩士研究生學位（畢業(yè)）論文20圖2.2小RNA文庫測序和注釋（A）每種類型miRNA的sRNA的百分比;（B）小RNA文庫的長度分布和頻率百分比。Figure2.2SmallRNAlibrarysequencingandannotation.(A)AnnotationofsmallRNAs.ThepercentagesofeachtypeofsRNAsareindicatedinbrackets.(B)LengthdistributionandfrequencypercentageofmiRNAclassesineightlibraries.2.2.2桔小實蠅小RNA文庫特征分析利用miRBase軟件(ftp://mirbase.org/pub/mirbase/CURRENT/)進行基于同源性的搜索進而鑒定miRNA，在其中發(fā)現(xiàn)了物種保守的miRNA，并借助基因組信息預測了新的miRNA。總共鑒定出933個miRNAs，其中卵巢和脂肪體內物種保守的miRNA分別有274和262個，新的未命名的分別為225和172個�；趯z測到的miRNAs的分析，我們進一步在桔小實蠅中進行了miRNAs的保守性分析，并根據(jù)其他物種中報道的miRNA發(fā)生頻率對miRNA保守性進行了計數(shù)。結果表明，桔小實蠅中的pre-miRNA數(shù)量接近80，其保守性和進化僅次于大果蠅Drosophilavirilis,黑腹果蠅Drosophilamelanogaster和擬暗果蠅Drosophilapseudoobscura（圖2.3）。另外，所有差異表達的miRNA在第一個核苷酸位置顯示出尿嘧啶(U)的顯性偏好（圖2.4A）。分析每個位置出現(xiàn)的四個核苷酸的百分比，發(fā)現(xiàn)腺嘌呤(A)最常出現(xiàn)

miR-286在桔小實蠅雌蟲生殖發(fā)育中的功能研究21在第2、5、7、11和18nt的位置，而U最經常出現(xiàn)在第1、22、23、24、25和第26nt的位置（圖2.4B）。圖2.3miRNA保守性圖譜物種標記為橫坐標，miRNA的出現(xiàn)頻率標為縱坐標Figure2.3ConservationprofileoftheidentifiedmiRNAs.SpeciesaremarkedasabscissaandthefrequencyofoccurrenceofmiRNAsarelabeledastheordinate.

【參考文獻】：
期刊論文
[1]桔小實蠅的國內研究進展[J]. 郭騰達,宮慶濤,葉保華,武海斌,孫瑞紅.  落葉果樹. 2019(01)
[2]桔小實蠅在果蔬上的發(fā)生規(guī)律及其防治方法[J]. 李燕,蔣巧根,朱江濤,翟秋紅.  上海農業(yè)科技. 2018(01)
[3]生態(tài)因素對蛾類昆蟲交配與生殖的影響[J]. 駱丹,徐川峰,殷立新,張詩語,劉興平.  環(huán)境昆蟲學報. 2017(04)
[4]變溫對昆蟲生長發(fā)育和繁殖影響的研究進展[J]. 潘飛,陳綿才,肖彤斌,吉訓聰,謝圣華.  環(huán)境昆蟲學報. 2014(02)
[5]桔小實蠅卵巢形態(tài)結構及發(fā)育特征研究[J]. 陳敏,陳鵬,葉輝,季清娥,黎劍平.  環(huán)境昆蟲學報. 2014(01)
[6]桔小實蠅卵巢發(fā)育及其應用[J]. 肖鐵光,周社文,張佳峰,黃玲,唐小燕.  作物研究. 2009(04)
[7]桔小實蠅的研究進展[J]. 黃素青,韓日疇.  昆蟲知識. 2005(05)
[8]桔小實蠅生物學特點及其防治研究概述[J]. 謝琦,張潤杰.  生態(tài)科學. 2005(01)
[9]桔小實蠅國內研究概況[J]. 梁光紅,陳家驊,楊建全,黃居昌,季清娥.  華東昆蟲學報. 2003(02)
[10]昆蟲生殖的一些基本特征[J]. 郭郛.  昆蟲知識. 1979(03)

博士論文
[1]桔小實蠅piRNA通路相關基因tudor及海藻糖酶基因對卵巢發(fā)育影響的研究[D]. 謝逸菲.西南大學 2015

碩士論文
[1]BdRab40在桔小實蠅20E和Insulin信號通路中的功能研究[D]. 吳方玉.華中農業(yè)大學 2016



本文編號：3588760