桔小實(shí)蠅是重要的農(nóng)業(yè)害蟲(chóng),由于寄主范圍廣、適應(yīng)能力強(qiáng)以及抗藥性發(fā)展快速等因素,對(duì)其持續(xù)防控愈發(fā)困難。神經(jīng)肽是昆蟲(chóng)體內(nèi)一種重要的信號(hào)分子,通過(guò)激活G蛋白偶聯(lián)受體（G-protein coupled receptors,GPCRs）調(diào)控昆蟲(chóng)的多種生理功能,阻斷或擾亂神經(jīng)肽信號(hào)傳遞系統(tǒng)的信號(hào)傳導(dǎo),能夠達(dá)到控制害蟲(chóng)的目的。因此,神經(jīng)肽信號(hào)傳遞系統(tǒng)被認(rèn)為是一種理想的殺蟲(chóng)劑靶標(biāo)。本學(xué)位論文基于桔小實(shí)蠅幼蟲(chóng)的骨化結(jié)構(gòu)制訂幼蟲(chóng)齡期的劃分標(biāo)準(zhǔn),基于基因組和轉(zhuǎn)錄組大數(shù)據(jù),鑒定和注釋雙翅目88個(gè)物種的ETH前體基因;在此基礎(chǔ)上克隆桔小實(shí)蠅ETH前體及其受體基因的cDNA序列,解析基因組結(jié)構(gòu)信息;利用中國(guó)倉(cāng)鼠卵巢（Chinese hamster ovary,CHO）細(xì)胞表達(dá)系統(tǒng)及胞內(nèi)鈣離子流動(dòng)測(cè)定技術(shù),鑒定桔小實(shí)蠅的ETH信號(hào)傳遞系統(tǒng)。利用實(shí)時(shí)熒光定量PCR（qPCR）技術(shù),分析BdETH及其受體在桔小實(shí)蠅幼蟲(chóng)和雌蟲(chóng)體內(nèi)的表達(dá)模式;運(yùn)用免疫組化（Immunohistochemistry）和熒光原位雜交（Fluorescence in situ hybridization）技術(shù),定位桔小實(shí)蠅氣管組織分泌表達(dá)Bd... 

【文章來(lái)源】：西南大學(xué)重慶市 211工程院校 教育部直屬院校

【文章頁(yè)數(shù)】：134 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：博士

【文章目錄】：
中文摘要
Abstract
第一章 文獻(xiàn)綜述
    1 昆蟲(chóng)神經(jīng)肽及其受體
        1.1 昆蟲(chóng)神經(jīng)肽
        1.2 G蛋白偶聯(lián)受體
    2 ETH信號(hào)傳遞系統(tǒng)的研究進(jìn)展
    3 學(xué)位論文研究的目的與意義
    技術(shù)路線
第二章 基于骨化結(jié)構(gòu)對(duì)幼蟲(chóng)齡期的劃分
    1 材料與方法
        1.1 供試?yán)ハx(chóng)
        1.2 主要儀器和試劑
    2 實(shí)驗(yàn)方法
        2.1 桔小實(shí)蠅幼蟲(chóng)的收集和測(cè)量
        2.2 數(shù)據(jù)分析
    3 結(jié)果與分析
        3.1 桔小實(shí)蠅幼蟲(chóng)齡期劃分標(biāo)準(zhǔn)的確定
        3.2 桔小實(shí)蠅各齡幼蟲(chóng)的形態(tài)
    4 小結(jié)
    本章討論
第三章 ETH信號(hào)傳遞系統(tǒng)的注釋、克隆及鑒定
    第一節(jié) 雙翅目昆蟲(chóng)ETH前體基因的注釋
        1 材料與方法
            1.1 數(shù)據(jù)庫(kù)
            1.2 ETH神經(jīng)肽前體基因的鑒定
            1.3 ETH神經(jīng)肽前體基因結(jié)構(gòu)的注釋和成熟肽序列分析
        2 結(jié)果與分析
        3 小結(jié)
    第二節(jié) ETH信號(hào)傳遞系統(tǒng)的克隆及鑒定
        1 材料與方法
            1.1 供試?yán)ハx(chóng)
            1.2 主要儀器和試劑
            1.3 總RNA提取、去除基因組DNA和cDNA的合成
            1.4 PCR反應(yīng)及克隆與測(cè)序
            1.5 序列分析及系統(tǒng)發(fā)育樹(shù)構(gòu)建
            1.6 異源表達(dá)
            1.7 鈣離子流動(dòng)測(cè)定
        2 結(jié)果與分析
            2.1 桔小實(shí)蠅ETH及其受體基因的序列及系統(tǒng)發(fā)育分析
            2.2 內(nèi)源性配體對(duì)BdETHR-A和BdETHR-B的活性測(cè)定
        3 小結(jié)
    本章討論
第四章 ETH信號(hào)傳遞系統(tǒng)在桔小實(shí)蠅幼蟲(chóng)蛻皮的功能研究
    1 材料與方法
        1.1 供試?yán)ハx(chóng)
        1.2 主要儀器和試劑
        1.3 樣品準(zhǔn)備
        1.4 總RNA提取、去除基因組DNA和cDNA的合成
        1.5 實(shí)時(shí)定量PCR
        1.6 ETH亞細(xì)胞定位
        1.7 RNAi
        1.8 統(tǒng)計(jì)分析
    2 結(jié)果與分析
        2.1 BdETH及其受體基因在幼蟲(chóng)不同發(fā)育階段和不同組織中的表達(dá)模式分析
        2.2 桔小實(shí)蠅ETH在幼蟲(chóng)氣管組織中的定位分析
        2.3 干擾桔小實(shí)蠅ETH信號(hào)傳遞系統(tǒng)對(duì)幼蟲(chóng)-幼蟲(chóng)發(fā)育的影響
    3 小結(jié)
    本章討論
第五章 ETH信號(hào)傳遞系統(tǒng)對(duì)桔小實(shí)蠅雌蟲(chóng)的生殖調(diào)控功能研究
    1 材料與方法
        1.1 供試?yán)ハx(chóng)
        1.2 主要儀器和試劑
        1.3 不同日齡雌成蟲(chóng)樣品準(zhǔn)備
        1.4 桔小實(shí)蠅JHAMT的分子克隆和系統(tǒng)發(fā)育分析
        1.5 實(shí)時(shí)熒光定量PCR
        1.6 原位雜交(FISH)和免疫組化(IHC)
        1.7 鈣離子成像
        1.8 蟲(chóng)體20E激素的注射
        1.9 RNAi
        1.10 JHIII滴度測(cè)定
        1.11 桔小實(shí)蠅生殖力的統(tǒng)計(jì)及挽救實(shí)驗(yàn)
    2 結(jié)果與分析
        2.1 BdETH、BdETHR-A和BdETHR-B在雌蟲(chóng)中不同發(fā)育階段的表達(dá)模式
        2.2 免疫組化和原位雜交分析
        2.3 鈣離子成像定位
        2.4 20E調(diào)控桔小實(shí)蠅雌成蟲(chóng)BdETH和BdETHR的表達(dá)
        2.5 BdJHAMT的克隆、鑒定與系統(tǒng)發(fā)育分析
        2.6 干擾BdETH和BdETHR后對(duì)BdJHAMT和BdVg表達(dá)量的影響
        2.7 干擾ETH信號(hào)傳遞系統(tǒng)導(dǎo)致雌成蟲(chóng)的生殖力下降
    3 小結(jié)
    本章討論
第六章 ETH與受體相互作用的分子模擬研究
    1 軟件與方法
        1.1 軟件及運(yùn)行環(huán)境
        1.2 三維建模和docking分析方法
    2 結(jié)果與分析
        2.1 BdETH、BdETHR-A和BdETHR-B蛋白三維結(jié)構(gòu)的建立
        2.2 BdETH、BdETHR-A和BdETHR-B蛋白三維結(jié)構(gòu)的優(yōu)化
        2.3 配體與受體BdETHR-A和BdETHR-B的分子對(duì)接分析
    3 小結(jié)
    本章討論
第七章 主要結(jié)論、創(chuàng)新點(diǎn)及研究展望
    1 主要結(jié)論
        1.1 確定了齡期劃分的最佳結(jié)構(gòu)特征,實(shí)現(xiàn)了桔小實(shí)蠅幼蟲(chóng)分齡
        1.2 完成了88個(gè)雙翅目物種ETH神經(jīng)肽前體基因的鑒定及注釋
        1.3 克隆及鑒定了桔小實(shí)蠅ETH信號(hào)傳遞系統(tǒng)
        1.4 證實(shí)了ETH通過(guò)ETHR-A受體調(diào)控桔小實(shí)蠅幼蟲(chóng)-幼蟲(chóng)蛻皮
        1.5 確定了ETH信號(hào)傳遞系統(tǒng)對(duì)桔小實(shí)蠅雌蟲(chóng)的生殖調(diào)控功能
        1.6 分子模擬可視化了ETH和受體間的結(jié)合位點(diǎn)
    2 創(chuàng)新點(diǎn)
    3 研究展望
參考文獻(xiàn)
附錄
博士在讀期間發(fā)表的論文及參加科研課題情況
致謝


【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]保幼激素對(duì)昆蟲(chóng)變態(tài)發(fā)育調(diào)控的分子機(jī)制[J]. 何倩毓,張?jiān)?裴澤華,李美鑫,張旭.  昆蟲(chóng)學(xué)報(bào). 2017(05)
[2]用氣質(zhì)聯(lián)譜法測(cè)定中華蜜蜂體內(nèi)保幼激素[J]. 李新宇,文平,程亞楠,董坤,譚墾.  中國(guó)蜂業(yè). 2017(04)
[3]駱駝斯氏副柔線蟲(chóng)病傳播媒介西方角蠅和截脈角蠅的幼蟲(chóng)齡期劃分[J]. 鄧僑,楊蓮茹,楊曉野,王瑞,史紅蕾,鄭文青,李軍燕,楊波.  昆蟲(chóng)學(xué)報(bào). 2015(03)
[4]油茶象幼蟲(chóng)蟲(chóng)齡的劃分[J]. 李志文,何立紅,夏姣,馬玲,曾愛(ài)平.  昆蟲(chóng)學(xué)報(bào). 2015(02)
[5]G蛋白偶聯(lián)受體配體結(jié)合分析技術(shù)[J]. 張君,金亞,葉燕銳,譚文.  藥物分析雜志. 2015(01)
[6]豌豆彩潛蠅幼期各蟲(chóng)態(tài)的形態(tài)學(xué)研究[J]. 曹利軍,宮亞軍,朱亮,石寶才,陳敏,魏書(shū)軍.  昆蟲(chóng)學(xué)報(bào). 2014(05)
[7]柑橘大實(shí)蠅成蟲(chóng)口器掃描電鏡觀察[J]. 李宗鍇,周曉渭,楊鳳連,牛長(zhǎng)纓.  植物檢疫. 2013(02)
[8]華北大黑鰓金龜氣味結(jié)合蛋白HoblOBP2的生物信息學(xué)分析[J]. 莊緒靜,尹姣,李克斌,曹雅忠.  植物保護(hù). 2013(01)
[9]瓜實(shí)蠅幼蟲(chóng)的分齡方法[J]. 李子玲,黃樹(shù)生,王玉群,曾東強(qiáng),韋淑丹.  植物檢疫. 2012(04)
[10]昆蟲(chóng)蛻皮激素生物合成及其神經(jīng)肽調(diào)控[J]. 王升,李勝.  應(yīng)用昆蟲(chóng)學(xué)報(bào). 2012(03)

碩士論文
[1]家蠶蛻皮觸發(fā)激素及其受體基因的克隆和表達(dá)分析[D]. 舒旭.西南大學(xué) 2009



本文編號(hào)：3585444