蘇云金芽孢桿菌Bacillus thuringiensis（Bt）與昆蟲中腸刷狀緣膜囊泡brush border membrane vesicles（BBMV）上的受體蛋白結(jié)合是其發(fā)揮殺蟲毒性的關(guān)鍵步驟,而且昆蟲中腸上受體蛋白的突變或表達(dá)量的變化與昆蟲對(duì)Bt的抗性產(chǎn)生密切相關(guān)。隨著研究的深入,不斷報(bào)道有新受體參與殺蟲或抗性機(jī)制中,因此新受體的發(fā)現(xiàn)對(duì)于深入研究Bt的殺蟲機(jī)制及昆蟲對(duì)Bt的抗性都有著非常重要意義。已有報(bào)道證明昆蟲中腸的polycalin可以與Cry1Ac蛋白結(jié)合,但其在Bt殺蟲機(jī)制中的作用及是否參與抗性演化還有待進(jìn)一步明確。本文在獲得了棉鈴蟲polycalin基因全長(zhǎng)的基礎(chǔ)上,研究了polycalin在Cry1Ac和Cry2Aa殺蟲過程中的作用及其在Cry1Ac抗性演化中的作用。主要研究結(jié)果如下:1.利用熒光定量PCR技術(shù)檢測(cè)polycalin在棉鈴蟲幼蟲不同組織中的表達(dá)量差異,發(fā)現(xiàn)polycalin在所有檢測(cè)組織中都有表達(dá),尤其在消化系統(tǒng)（前腸、中腸、后腸）中的相對(duì)表達(dá)量較高。比較了對(duì)Cry1Ac具有不同抗性水平的棉鈴蟲品系幼蟲中腸polycalin的差異,發(fā)現(xiàn)低抗品系棉... 

【文章來源】：中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)院北京市

【文章頁數(shù)】：62 頁

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【部分圖文】：

Cry毒素作用機(jī)制模型(AdangandCrickmore,2014)

降與抗性相關(guān)。通過RNAi基因敲除ABCC2，降低了棉鈴蟲對(duì)Cry1Ac的敏感性。因此，新受體的發(fā)現(xiàn)和受體表達(dá)量的變化調(diào)控昆蟲對(duì)Cry毒素產(chǎn)生抗性。圖1.2 鱗翅目昆蟲中Cry毒素的不同抗性機(jī)制(Pardo-López et al., 2013)Fig 1.2. The different mechanisms of resistance to 3d-Cry toxin described in lepidopteran insects.

3）孵育一抗：用預(yù)熱的重蒸水洗 3 遍，一抗與 T 液 1:5000 稀釋，滴在銅網(wǎng)的正面，室應(yīng) 1h，之后 4℃過夜，次日繼續(xù)室溫 1h；4）洗片：用預(yù)熱的重蒸水洗 3 遍，然后 T 液洗 6 次，每次 5 min；5）孵育二抗：將銅網(wǎng)放在 1：20 稀釋的 20μl 的二抗，室溫反應(yīng) 1h；6）洗片：用預(yù)熱的重蒸水洗 3 遍，然后 T 液洗 2 次，每次 5 min，用預(yù)熱的重蒸水洗 3然后 G 液洗 2 次，每次 5 min，用預(yù)熱的重蒸水洗 2 次，每次 5 min；7）增感：將增感液滴到封口膜上，將銅網(wǎng)的正面扣在增感液上，放在黑盒避光孵育 10-20 m8）洗片：重蒸水洗 6 次，每次 5min；9）染色：將銅網(wǎng)放在醋酸鈾上，15min，10）洗片：重蒸水洗 6 次，每次 5min，待干燥后透射電鏡觀察。3.2 結(jié)果與分析從 polycalin 的免疫組織化學(xué)圖上可以清楚地看到，polycalin 蛋白在其雜交的棉鈴蟲中射圖中抗體金顆粒分布廣泛，在中腸細(xì)胞微絨毛上，細(xì)胞核，高爾基體，線粒體和內(nèi)質(zhì)網(wǎng)上分布，沒有形成特異性分布（圖 3.1）。


本文編號(hào)：3571704